添加丙氨酰谷氨酰胺血液保存液對儲存血液紅細胞影響的實驗研究*

李大鵬，呂春雷，王鳳嬌，任 紅，鄭文哲

(解放軍88醫院a.中心實驗室；b.醫務處；c.輸血科，山東泰安 271000)

儲存血液隨保存期延長，因紅細胞生存條件變化及代謝廢物產生，以及部分保存紅細胞壽命縮短及損傷增加等因素，對紅細胞代謝、功能等造成不同程度影響，臨床輸注血液可能發生受血者血K+升高、非溶血性輸血反應等[1～3]。筆者選擇在血液保存液Ⅲ中添加丙氨酰谷氨酰胺方式，結合采集血液儲存過程中監測游離血紅蛋白(free hemoglobin,FHB)變化，探討其對紅細胞及儲存血液質量的影響，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇參與采供血機構無償獻血人員10例，均為男性，年齡不限，符合獻血條件，采集未抗凝靜脈血。

1.2 儀器與試劑 測定FHB主要儀器包括722型光柵分光光度計(上海第三分析儀器廠，檢測波長510 nm，1 cm光徑比色杯)、5415R臺式冷凍小型離心機、5810R臺式冷凍高速離心機(德國Eppendorf公司)等。FHB測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 血液保存液配制 選取臨床使用丙氨酰谷氨酰胺注射液(四川科倫，50 ml∶10 g)加入0.9 g/dl氯化鈉注射液50 ml稀釋，選取采供血機構常規使用一次性使用塑料血袋中血液保存液Ⅲ[四川南格爾公司，生產批號150123，藥品批準文號(國藥準字H20045509)]，其配方主要為枸櫞酸鈉、枸櫞酸、無水葡萄糖等。丙氨酰谷氨酰胺稀釋液與血液保存液Ⅲ按1.8∶1比例混合均勻配成實驗組血液保存液，對照組血液保存液為血液保存液Ⅲ。

1.4 實驗方案 選取無菌試管20只均分為A，B組。A組為實驗組，1～10管中均分別加入丙氨酰谷氨酰胺稀釋液0.756 ml及血液保存液Ⅲ0.42 ml；B組為對照組，1～10管均分別加入血液保存液Ⅲ0.42 ml。

按照一次性使用塑料血袋血液保存液采集全血要求，分別采集10例獻血者未抗凝靜脈血，對應加入A，B兩組1～10試管中各3 ml，充分搖勻后放置到4～6℃冰箱保存。

1.5 指標測定 血液采集后第10，21，35天分別檢測A，B兩組FHB含量。FHB測定采用分化比色法，嚴格按試劑盒操作說明書要求進行實驗操作，510 nm波長測各管吸光度A，檢測范圍為0～200 mg/L。

2 結果

采血后第10，21，35天分別檢測A，B兩組FHB含量，數據按檢測時間分組為T1，T2，T3，共AT1，AT2，AT3，BT1，BT2，BT36組，各組基本統計量見表1。由相同檢測時間同樣本A，B兩組檢測值取得配對樣本數據，配對t檢驗結果見表2。其中AT1-BT1，AT2-BT2，AT3-BT3組總體均數均不為0(P值均<0.05)，各組間差異均有統計學意義(P<0.05)。

實驗數據資料為重復測量資料(時間因素和組別因素)，對數據進行球型檢驗，取得ε校正系數進行數據校正(Greenhouse-Geisser法)，檢驗結果見表3；對重復效應和交互效應進行方差分析(F檢驗)，結果表明各檢測時間之間差異具有統計學意義(F=68.031，P<0.001)，檢測組間差異有統計學意義(F=21.422，P<0.05)，時間與組別因素之間無顯著交互作用(F=1.924，P=0.194>0.05)。LSD法進行各檢測時間之間多重比較，結果見表4。表明各檢測時間之間FHB含量差異均具有統計學意義(P<0.05)，相同檢測時間A，B兩組間差異均有統計學意義(P<0.05)，組間FHB含量A組均顯著低于B組。

在α=0.05置信水平下，各檢測時間之間FHB含量均存在顯著性差異，相同檢測時間組間FHB含量均存在顯著性差異，A組均顯著低于B組。

表1 各組血漿FHB檢測值(mg/L)

表2 各組FHB配對t檢驗結果

注：各組間差異均有統計學意義(P<0.05)。

表3 球型檢驗結果

表4 不同檢測時間之間LSD多重比較結果

注：各檢測時間之間FHB含量差異均具有統計學意義(P<0.05)；相同檢測時間A，B兩組間差異均有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

血液離開機體循環，受到儲存及保養條件限制會發生“保存損傷”，其各種功能指標會發生改變，能保持穩定的細胞內、外環境，則紅細胞能存活且維持正常生理功能[4]。血液保存液是影響血液儲存的主要因素，科學、合理改良現有血液保存液，不斷提高儲存血液質量及臨床輸注效果，已成為現階段重要研究課題[5～8]。

紅細胞隨保存時間延長，其膜上脂蛋白和脂質逐漸喪失，細胞內鉀離子降低及鈉、鈣離子升高，致細胞變形能力減低及滲透脆性增加，受到外界因素影響會發生溶血致血紅蛋白逸出，致血漿FHB含量不斷升高，影響紅細胞攜氧能力及輸血效果。FHB含量是反映紅細胞膜穩定性及代謝程度的主要標志，也是檢測紅細胞溶血的主要指標，在儲存血液中含量變化可體現血液保存液對紅細胞膜穩定性的影響，也是判斷全血質量和安全輸注的重要指標[5，9]。

丙氨酰谷氨酰胺是腸外營養的組成部分，適用于分解代謝和高代謝狀況等患者，以及對急性肺損傷患者的保護等[10]，在血液中可迅速分解為丙氨酸和谷氨酰胺(Glutamine Gln)，谷氨酰胺可減少和對抗自由基對機體組織器官的損傷，提高血漿中谷胱甘肽水平及機體抗氧化水平，其被酶解產生NH4可增加紅細胞膜的流動性及對機械壓的抗性[11]。

本文實驗數據表明：各檢測時間之間FHB含量均存在顯著性差異，同一檢測時間組間FHB含量均存在顯著性差異，A組均顯著低于B組，表明儲存血液隨保存時間延長，各種因素導致紅細胞溶血率上升，造成血紅蛋白逸出使FHB含量顯著升高，FHB含量與保存時間呈正相關關系；同時，相同時間檢測血漿FHB含量A組均顯著低于B組，表明添加丙氨酰谷氨酰胺血液保存液Ⅲ可顯著降低紅細胞溶血率，對紅細胞膜保護作用優于血液保存液Ⅲ，對紅細胞具有顯著保護作用，可增加紅細胞膜流動性及降低外界因素造成紅細胞膜破裂溶血，減少因紅細胞生存條件變化等因素對紅細胞造成的影響，提高儲存血液質量及輸注效果。

根據本文實驗數據，在經典血液保存液Ⅲ中按比例添加丙氨酰谷氨酰胺，對紅細胞膜保護作用優于血液保存液Ⅲ，可對紅細胞產生十分顯著的保護作用，能顯著降低紅細胞溶血及血漿FHB含量，提高儲存血液質量及臨床輸注效果，并提高受血者免疫功能和血紅蛋白含量，對危重病患者具有降低感染率等顯著治療作用[11]，充分體現其在血液采集、血液保存及臨床輸血工作中的良好價值[12]。

[1] 張 永，黎紅平，李慈梅．鹽酸小檗堿對血漿游離血紅蛋白的影響[J]．現代醫院，2012，12(8)：77-78．

Zhang Y，Li HP，Li CM．The affect of berberine hy-drochloride on plasma free hemoglobin[J]．Modern Hospital，2012，12(8)：77-78．

[2] 王九兵，王永維．紅細胞懸液輻照前后在不同貯存期游離血紅蛋白含量的比較[J]．醫學理論與實踐，2012，25(14)：1756-1758．

Wang JB，Wang YW．The comparison of free hemoglobin content of different storage period for red blood cell irradiation[J]．J Med Theor & Prac，2012，25(14)：1756-1758．

[3] 袁志軍．大量輸血前后血清鉀的變化和輸血后高鉀血癥發生的影響因素[J]．中國實用醫藥，2014，9(15)：79-80．

Yuan ZJ．Influence factors on the change of serum potassium for a large number of blood transfusion before and after and the hyperkalemia occurred after blood transfusion[J]．China Piac Med，2014，9(15)：79-80．

[4] 王 勇，歐陽孟林．洗滌式自體血回輸中不同溫度洗滌液對人紅細胞形態結構的影響[J]．中國現代醫生，2014，52(14)：31-33．

Wang Y，Ouyang ML．Effect of different temperature scrubbing solution on red blood cell morphological structure[J]．China Modern Doctor，2014，52(14)：31-33．

[5] 馮 倩，劉 奕，王 彥，等．不同保存期內全血質量變化的研究[J]．科學技術與工程，2013，13(13)：3691-3694，3709．

Feng Q，Liu Y，Wang Y，et al．Study on the quality changes of the whole blood during storage time[J]．Science Technology and Engineering，2013，13(13)：3691-3694，3709．

[6] 張 微，徐國美，劉青寧．不同配方洗滌液對濃縮血小板的洗滌效果研究[J]．中國輸血雜志，2010，23(11)：944-946．

Zhang W，Xu GM，Liu QN．Research on the washing effect for different for mulations of concentrated platelet washing liquid[J]．Chinese Journal of Blood Transfusion，2010，23(11)：944-946．

[7] 陳云慶．血液保存液Ⅱ在高危出血患者血液透析封管中的應用體會[J]．吉林醫學，2011，32(32)：6773-6774．

Chen YQ．Application experience on the blood preservation solution Ⅱ in patients at high risk of bleeding for the sealing tube of blood dialysis[J]．Jilin Medical Journal，2011，32(32)：6773-6774．

[8] 黃小輝，胡煒華．術前預存自體血液聯合術中血液稀釋在外科手術中的應用[J]．南昌大學學報(醫學版)，2011，51(9)：64-67．

Huang XH，Hu WH．Combined application of predebosit autotransfusion and intraoperative hemodilution in surgical operation[J]．Journal of Nanchang University(Medical Science)，2011，51(9)：64-67．

[9] 劉海波．游離血紅蛋白指標在懸浮紅細胞質量控制中的應用[J]．國際檢驗醫學雜志，2012，33(21)：2639，2667．

Liu HB．Application on the free hemoglobin target in quality control of suspended red blood cells[J]．Int J Lab Med，2012，33(21)：2639，2667．

[10] 崔 瑩，吳春雪，楊 龍，等．丙氨酰谷氨酰胺對急性肺損傷患者的保護作用及其機制初探[J]．臨床薈萃，2012，27(4)：298-300，303．

Cui Y，Wu CX，Yang L，et al．Studies on protection effect and mechanism of analyl-glutamine during acute lung injury[J]．Clinical Focus，2012，27(4)：298-300，303．

[11] 郭永軍，孔媛媛，關永東，等．外源性補充谷氨酰胺對危重病患者的影響[J]．中華全科醫學，2012，10(1)：49，97．

Guo YJ，Kong YY，Guan YD，et al．Effects of ectrinsic glutamine on patients with critical illness[J]．Chinese Journal of General Practice，2012，10(1)：49，97．

[12] 魏 超，莊 遠，汪德清．紅細胞保存時間與功能變化的研究進展[J]．中國輸血雜志，2013，26(11)：1152-1155．

Wei C，Zhuang Y，Wang DQ．The research prgress on the save time and function change of red blood cells[J]．Chin J Blood Transfusion，2013，26(11)：1152-1155．