唇香草不同部位總成分的分析比較

唇香草不同部位總成分的分析比較

丁文歡1， 歐亮苗2， 張雪佳2， 周曉英3

(新疆醫科大學1中心實驗室；2中醫學院；3藥學院， 烏魯木齊830011)

摘要：目的分析比較唇香草不同部位的化學成分含量。方法采用可見分光光度法對唇香草不同部位的總多酚、總黃酮、總三萜酸、總游離氨基酸及總多糖的含量進行測定，并對數據進行分析。結果唇香草全草以及不同部位均富含總多酚和總黃酮，總游離氨基酸的含量也較高，而總三萜酸和總多糖的含量較低，在花、葉、莖中5種總成分的含量有所差異，5種成分在唇香草葉和花中含量較高，莖中的含量最低。結論根據各總成分含量在唇香草中的分布可初步將唇香草的采收期定于其葉和花產量較高的時期，即開花初期或盛開期。

關鍵詞：唇香草； 不同部位； 總成分

中圖分類號：R914文獻標識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.07.014

[收稿日期：2014-11-19]

Analysis and Comparison of Total Components in Different Parts

of Ziziphora clinopodioides Lam.

DING Wenhuan1, OU Liangmiao2, ZHANG Xuejia2, ZHOU Xiaoying3

(1CentralLaboratory；2CollegeofTCM,3CollegeofPharmacy,

XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze and compare the total components in different parts of Ziziphora clinopodioides Lam. MethodsThe contents of the total phenolics, flavonoids, triterpenoids, free amino acids and polysaccharides were measured by visible spectrophotometry. Then analyze the data. ResultsBoth the grass and different parts of Ziziphora clinopodioides Lam. are rich in total phenolics and flavonoids， and the content of total free amino acids is also high. However, the contents of the total triterpenoids and polysaccharides were low. The contents of these five total components above were different, both the five total components above are richest in the leaves and least in stems of the Ziziphora clinopodioides Lam. ConclusionThe best harvest time for Ziziphora clinopodioides Lam should be in the flowering period according to the experimental data on the analysis of its components distribution.

Key words:ZiziphoraclinopodioidesLam.; different parts; total components

唇香草(Ziziphora clinopodioides Lam.)為唇形科新塔花屬植物唇香草的干燥地上部分，多年生半灌木草本植物，別名有芳香新塔花、小葉薄荷、山薄荷等，維吾爾族名字為蘇則、續則，是維吾爾醫的常用藥材。唇香草全株有強烈的薄荷香氣，喜生于草地、低山坡、礫石及干旱坡地上，是新疆的特有藥材，主要分布于我國新疆的阿勒泰山、天山、準噶爾西部山地、帕米爾高原的山地草原及礫石質坡地，中亞的吉爾吉斯斯坦、哈薩克斯坦、蒙古亦有分布[1]。唇香草性味辛、涼、微苦，具有強心利濕、理氣化痰、消炎散結的功效，常用于治療心臟病、高血壓、哮喘多汗、心悸失眠、水腫、咳嗽、支氣管炎、氣短多汗、心悸失眠、水腫、咳嗽、肺膿腫等疾病[2-3]。

近年來，國內外對唇香草的不同提取部位的生物活性進行研究結果表明其具有抑菌、抗氧化、舒張血管、提高免疫力等生物活性[4-6]。目前對其化學成分的研究，主要采用可見分光光度法測定唇香草中的總成分。利用高效液相色譜法測定唇香草中黃酮類以及有機酸類成分，并建立了唇香草的指紋圖譜以及唇香草的質量標準[7-11]。在維吾爾族民間，唇香草多為藥食兩用的材料。藥用時取唇香草全草入藥，民間食用時多只用唇香草的葉。本實驗對唇香草中花、葉、莖以及全草的總成分進行測定與比較，以期為唇香草的物質基礎研究提供實驗數據。

1儀器、試藥與方法

1.1儀器與試藥XS-105型萬分之一電子天平及METTLER-MS105DU型十萬分之一電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，KQ5200DE型數控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，TGL-16B離心機(上海安亭科學儀器廠)，GBC Cintra-40型紫外可見分光光度計(澳大利亞GBC科學儀器公司)。藥材于2012年8月1日在新疆烏魯木齊市托里鄉采收,經新疆維吾爾自治區中醫醫院主任藥師李永和鑒定為唇形科植物唇香草；沒食子酸(批號：A0110)、蘆丁(批號：100080-200707)、熊果酸(批號：110709-200505)、精氨酸(批號：100080-200908)均購自中國藥品生物制品鑒定所，葡萄糖(批號：20101024，天津市天新精細化工開發中心),乙醇、濃硫酸、蒽酮、福林試劑、碳酸鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、香草醛、氫氧化鈉、茚三酮等均為分析純。

1.2方法

1.2.1供試品溶液的制備唇香草的乙醇提取液：將陰干的唇香草粉碎，過40目篩。精密稱取唇香草粉末1 g，用25 mL 70 %乙醇超聲提取30 min，過濾即得。唇香草的水提取液：將陰干的唇香草粉碎，過40目篩。精密稱量唇香草粉末1 g，用25 mL蒸餾水超聲提取30 min，過濾即得。總多糖提取液制備：稱取唇香草粉末0.5 g，加入20 mL蒸餾水超聲30 min，過濾，濾液中加入20 mL Sevage試劑(氯仿∶正丁醇4∶1)，以120 r/min的速度振蕩30 min除蛋白，將Sevage試劑層棄去，濾液層加入100 mL 95%乙醇放置過夜使多糖沉淀，棄上清液，離心，得粗多糖，用100 mL蒸餾水溶解即得。

1.2.2唇香草中總多酚的含量測定

1.2.2.1標準曲線的建立精密稱取5 mg沒食子酸對照品，用70 %乙醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，得濃度為0.1 mg/mL的沒食子酸對照品溶液。準確吸取沒食子酸對照品溶液1、2、3、4、5 mL置于10 mL容量瓶中，加入福林試劑1 mL，搖勻，靜置1 min，再加入2 mL 20 %碳酸鈉溶液，用70 %乙醇定容，混勻，75℃水浴10 min，在400～800 nm波長范圍內掃描沒食子酸及樣品的最大吸收波長，沒食子酸對照品的掃描結果顯示其最大吸收波長為760 nm，結合文獻報道的最大吸收波長，確定在760 nm處測定唇香草中的總多酚含量。以沒食子酸濃度C(mg/mL)為橫坐標，吸光度值A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：A=15.820 0 C+0.048 2(r=0.999 4)，結果表明，沒食子酸濃度在0.01~0.05 mg/mL范圍內線性關系良好。

1.2.2.2樣品含量測定分別精密吸取按“1.2.1” 項下方法制得的唇香草乙醇提取液1 mL，用70%乙醇稀釋至10 mL，再精密吸取0.5 mL的稀釋液，并按照“1.2.2.1”項下方法測定吸光樣品溶液的吸光度，根據線性方程計算唇香草樣品中總多酚的含量。

1.2.3唇香草總黃酮含量測定

1.2.3.1標準曲線的建立精密稱取蘆丁對照品10 mg，用70%乙醇溶解，定容至50 mL的容量瓶中，得濃度為0.2 mg/mL的蘆丁對照品溶液。精密吸取蘆丁對照品溶液0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL于10 mL容量瓶中，加入5 %亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻；放置6 min后，再加入0.3 mL 10%的硝酸鋁溶液，搖勻；放置6 min后，加入4 mL 4%氫氧化鈉溶液，搖勻；最后用7 %乙醇定容至10 mL，15 min后在400～800 nm波長范圍內掃描，結果顯示其最大吸收在510 nm處，故本實驗選擇在510 nm處測定唇香草中總黃酮的含量。以蘆丁對照品溶液的濃度C(mg/mL)為橫坐標，吸光度值A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：A=10.700 0 C+0.013 6(r=0.999 9)，對蘆丁溶液的濃度在0.02~0.07 mg/mL間線性關系良好。

1.2.3.2樣品含量測定分別精密吸取按“1.2.1”項下方法制成的唇香草乙醇提取液0.3 mL，于10 mL容量瓶中，按“1.2.3.1”項下方法測定吸光度值，并根據標準曲線計算唇香草樣品中總黃酮的含量。

1.2.4唇香草三萜酸類含量測定

1.2.4.1標準曲線的建立精密稱取熊果酸對照品6 mg，置于10 mL容量瓶中，用70 %乙醇溶解并定容，得濃度為0.6 mg/mL的熊果酸對照品溶液。準確吸取對照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL分別置于蒸發皿中，水浴蒸干，冷卻后加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5 mL和濃硫酸溶液1 mL，移入帶有刻度的比色管，用冰乙酸潤洗蒸發皿并入比色管，用冰乙酸定容至10 mL，搖勻，60℃水浴中加熱10 min，冷卻至室溫后在400~800 nm波長范圍內進行最大吸收波長的掃描，根據最大吸收波長最后確定在551 nm波長處測定吸光度值。以熊果酸對照品濃度C (mg/mL)為橫坐標，吸光度值A為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線為A=23.066 7C-0.019 2(r=0.999 9)，表明熊果酸對照品溶液的濃度在0.012～0.36 mg/mL范圍內線性關系良好。

1.2.4.2樣品含量測定分別精密吸取按“1.2.1”項下方法制成的唇香草乙醇提取液1 mL，按“1.2.4.1”項下方測定樣品溶液的吸光度值，并帶入線性方程計算其三萜酸的含量。

1.2.5唇香草總游離氨基酸含量測定

1.2.5.1標準曲線的建立精密稱取10 mg精氨酸對照品，置于25 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解定容，得濃度為0.4 mg/mL精氨酸對照品溶液，精密量取精氨酸對照品溶液0.8、1.1、1.4、1.7、2.0 mL分別置于25 mL棕色比色管中，各加2 mL 2%茚三酮溶液和l mL磷酸緩沖液(pH=6.80)，置沸水中水浴加熱15 min，室溫冷卻15 min，蒸餾水定容至25 mL，在566 nm波長處測定吸光度值。以精氨酸對照品溶液的濃度C為橫坐標，吸光度值A為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線為A=26.208 3C-0.076 1(r=0.999 7)，結果表明精氨酸對照品溶液的濃度在0.0128～0.032 mg/mL范圍內線性關系良好。

1.2.5.2樣品含量測定分別精密吸取按“1.2.1”項下方法制成的水提取液5 mL，按“1.2.5.1”項下方法測定吸光度值，計算樣品含量。

1.2.6唇香草總多糖含量測定

1.2.6.1標準曲線的建立對照品溶液的制備：精密稱取葡糖糖0.200 0 g置100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，得濃度為2 mg/mL的對照品溶液。硫酸-蒽酮溶液的配制：稱取蒽酮0.2 g，加入100 mL濃硫酸超聲溶解即得。精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL分別置于10 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，再分別取1 mL置于試管中，各加硫酸-蒽酮溶液4 mL，搖勻后放置13 min，置沸水中水浴加熱10 min，取出冷卻至室溫(15 min)。于582 nm處測定吸光度，繪制標準曲線，得葡萄糖溶液濃度C與吸光度A的曲線，回歸方程為A=6.787C+0.045 7(r=0.999 6)，線性范圍為0.02~0.12 mg/mL。

1.2.6.2樣品含量測定分別精密吸取按“1.2.1”項下方法制成的唇香草多糖提取液1 mL，按“1.2.6.1”項下方法測定吸光度值，代入線性方程計算樣品含量。

2結果

采用可見分光光法對唇香草不同部位的總成分含量進行測定，結果唇香草全草及各部位均富含總多酚和總黃酮，總游離氨基酸的含量也較高，而總三萜酸以及總多糖的含量較低。唇香草花、葉、莖中的各總成分含量存在差異，唇香草花和葉中5種總成分的含量均較高，而莖中的含量較低，結果見表1。

表1　唇香草不同部位總成分含量/(mg/g)

3討論

近年來的研究證明植物中總多酚、總黃酮、總三萜酸、總游離氨基酸以及總多糖均有較強的生物活性，如多酚類物質多具有抗氧化、抗菌以及抗凝血等活性[12-13]；黃酮類物質多具有抗菌、抗氧化、抗抑郁以及光保護作用等活性[14-16]；三萜酸類成分具有抗炎、鎮咳抗抑郁等活性[17-18]；氨基酸是構成人體營養所需蛋白質的基本物質；游離氨基酸具有抗氧化、提高人體過氧化物酶的水平等作用[19-20]；多糖類化合物多具有抗疲勞、抗癌、抗氧化等生物活性[21-22]。本研究采用可見分光光度法對不同采收期的唇香草中總多酚、總黃酮、總三萜酸、總游離氨基酸以及總多糖的含量進行測定。根據各總成分的溶解性質的不同，總多酚、總黃酮以及總三萜酸采用70 %的乙醇溶液進行超聲提取；總游離氨基酸與總多糖采用蒸餾水超聲提取，由于蛋白質類成分對總多糖的測定結果有干擾，故在唇香草多糖提取過程中采用sevage試劑(氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白；測定多糖含量時，水浴加熱后放至室溫，放置時間的長短對吸光度值影響較大，故測定時要統一放置時長。實驗結果證明在唇香草花和葉中5種總成分含量均較高，而莖中含量較低，從而驗證了唇香草以開花前期和花期作為采收期以及維吾爾族民間食用唇香草葉的行為是有科學依據的。

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(本文編輯施洋)