HPLC法測定愛立消膠囊中野黃芩苷的含量

摘要：目的 建立高效液相色譜（HPLC）法測定愛立消膠囊中野黃芩苷含量的方法。方法 高效液相色譜法，紫外檢測器。色譜柱為Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水-醋酸（35：61：4）為流動相，流速：1.0ml/min，紫外檢測器，檢測波長：335nm。結果 野黃芩苷進樣量在0.3～3μg范圍內呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為99.2%，RSD=2.1%（n=6）。結論 本方法快速簡便，結果準確、可靠，重現性好，可用愛立消膠囊的質量控制。

關鍵詞：愛立消膠囊；野黃芩苷；HPLC

愛立消膠囊的處方有半枝蓮、白花蛇舌草等，其中半枝蓮有清熱解毒、用于疔瘡腫毒、水腫等作用[1]，本文對愛立消膠囊中野黃芩苷的含量測定方法進行了探索。用HPLC法測定了愛立消膠囊中野黃芩苷的含量，該法操作簡便，靈敏度高，重現性好，可作為愛立消膠囊中野黃芩苷含量測定的方法。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀（島津LD-10A、島津LD-20AD，紫外檢測器），BP211D電子天平（德國賽多利斯，稱量范圍：80/210g；精度：0.01/0.1mg）。紫外分光光度計（島津UV-2450）

1.2試藥 愛立消膠囊（廣西梧州三鶴藥業有限公司科研所，批號：140601、140602、140603），野黃芩苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：110842-201207），流動相甲醇為色譜純（天津四友），缺半枝蓮的陰性樣品（廣西梧州三鶴藥業有限公司科研所）。

2 試驗方法與結果

2.1色譜及檢測的條件 ①色譜柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；②流動相：甲醇-水-醋酸（35：61：4）；③檢測波長為335nm，流速：1.0ml/min。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品適量，置100ml容量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，制成濃度為98.5μg/ml的溶液，0.22μm濾膜濾過作為對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內容物，混勻，取2.0g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）提取至無色，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續提取至無色，轉移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取25ml，蒸干，殘渣用20%甲醇溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，0.22μm濾膜濾過作為供試品溶液。

2.4陰性對照溶液的制備 取缺半枝蓮的陰性樣品2.0g，按供試品溶液的制備項下方法提取。

2.5線性關系的考察 精密吸取野黃芩苷對照品溶液作標準曲線試驗，分別進樣10μl，測定。以野黃芩苷對照品進樣量（μg）為橫坐標（X），峰面積積分值為縱坐標（Y）繪制標準曲線。結果表明，野黃芩苷進樣量在0.3～3μg范圍內呈良好的線性關系，見表1。

2.6專屬性試驗 取除半枝蓮之外的處方，按本品相同工藝制成缺半枝蓮的陰性對照，按上述方法測定。結果陰性對照中在與野黃芩苷峰相同的位置上無吸收峰，表明處方中的其他成分對本品含量測定無陰性干擾，色譜圖見圖1～3。

2.7精密度實驗 取同一供試品溶液，連續測定5次，10μl/次。結果峰面積的RSD為0.2%，表明方法的精密度良好。

2.8穩定性實驗 取同一供試品溶液，分別在0、2、6、8、10、12h時進樣。結果峰面積的RSD為0.4%（n=6），表明試品溶液在12小時內穩定。

2.9重復性試驗 取本品內容物（批號：140601），平行取樣6份，按正文擬訂的方法測定含量，結果平均含量是112μg/粒，RSD=1.5%（n=6）。表明方法的重復性好。

2.10回收率試驗 精密稱取已知含量同一供試品（112μg/粒）6份，分別精密加入一定量對照品，按供試品溶液制備方法測定，計算回收率，結果平均回收率為99.2%，RSD=2.1%（n=6），符合定量分析的要求。

2.11樣品測定 按上述測定方法，測定了本品三批試制樣品中的野黃芩苷含量，見表2。暫擬訂限度為本品每粒含半枝蓮以野黃芩苷（C21H18O12）計，不得少于90μg。

3 討論

3.1檢測波長的選擇 將2.2野黃芩苷對照品溶液于200～400nm波長掃描，發現野黃芩苷在335nm波長處有最大吸收，故選擇335nm作為野黃芩苷的檢測波長。

3.2流動相選擇 經實驗用甲醇-水-醋酸（35：61：4）或乙腈-水-醋酸（35：61：4）作為流動相時供試品圖譜的分離度均大于1.5，野黃芩苷峰分離效果及峰形均良好，但甲醇的毒性比乙腈小，故選擇甲醇-水-醋酸（35：61：4）作為流動相。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：22，187.

編輯/成森