三種復(fù)方中藥制劑對(duì)鴨大腸桿菌的體外抑菌效果研究

劉哲通

（四川省榮縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 榮縣 643100）

養(yǎng)禽業(yè)中禽大腸桿菌引起的疾病往往非常嚴(yán)重，臨床上多數(shù)采用抗菌藥物治療，而用抗菌藥物治療容易產(chǎn)生耐藥性，在治療過(guò)程中需要加大藥量或變換藥物品種，這樣既增加了治療成本，又使得藥物殘留的問(wèn)題更加突出。因此，使用抗菌譜廣、殘留小、毒性低且對(duì)病原菌不易產(chǎn)生耐藥性的中藥來(lái)治療大腸桿菌病已是大勢(shì)所趨。本試驗(yàn)經(jīng)過(guò)臨床用藥篩選出了三種中藥復(fù)方制劑，并應(yīng)用于鴨致病性大腸桿菌的體外抑菌試驗(yàn)中，觀察其抑菌效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物。加味三黃湯：黃連30g、黃芩30g、大黃 20 g、穿心蓮 30 g、苦參 20 g、夏枯草 20 g、龍膽20 g、連翹 20 g、二花 15 g、白頭翁 15 g、車前子 15 g、甘草15g；白頭苦參湯：白頭翁10g、苦參10 g、金銀花 10g、忍冬藤 5g、澤瀉 3g、車前草 3g、川黃連 2g、檳榔2g。郁金散：郁金6g、黃連10g、黃柏10g、枝子10g、赤芍 8g、大黃 5g、訶子（另包）10g、黃芩 10g。

以上三種方劑均購(gòu)于榮縣泰康大藥房，經(jīng)鑒定符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 菌種。從確診了患大腸桿菌病的病死鴨組織中分離培養(yǎng)而得。

1.1.3 試劑。麥康凱瓊脂，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：980301；營(yíng)養(yǎng)瓊脂，上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所試劑廠，批號(hào)：980905；氯化鈉，重慶東方試劑廠，批號(hào)：980320；牛肉浸膏，成都市牛奶供應(yīng)管理部，批號(hào)：7802144；蛋白胨，成都華西制品廠，批號(hào)：921203。

1.1.4 試驗(yàn)器材。托盤(pán)天平，蒸汽消毒器，電熱鼓風(fēng)干燥箱，離心機(jī)，培養(yǎng)箱，無(wú)霜型冰箱，潔凈工作臺(tái)，游標(biāo)卡尺，電爐，布氏漏斗，牛津杯，試管。

1.2 試驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.2.1 藥物制備。將復(fù)方制劑置于電磁鍋中，加適量蒸餾水浸泡30min，后煎煮，沸后用文火煮30min，濾出煎液，共煎3次，合并濾液，濃縮至生藥含量為1g/mL；1000r/min離心10min，取上清液調(diào)pH值為7.5；高壓滅菌后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫恢軆?nèi)用完。

1.2.2 肉湯培養(yǎng)基制法。牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g、蒸餾水1 000 mL，調(diào)節(jié)pH值為7.5，煮沸10min，冷卻過(guò)濾，15磅壓力下滅菌15min備用。

1.2.3 肉湯瓊脂培養(yǎng)基制法。肉湯培養(yǎng)基100mL，瓊脂2.0g，在肉湯培養(yǎng)基高壓滅菌前，加入瓊脂煮沸，再高壓消毒。

1.2.4 菌液制備。將分離的鴨大腸桿菌菌種接種到肉湯培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18～24h備用。

1.3 體外抑菌試驗(yàn)方法

1.3.1 雙碟的制備。培養(yǎng)基底層：將滅菌肉湯瓊脂培養(yǎng)基溶化后取15mL倒入滅菌平皿內(nèi)。培養(yǎng)基菌層：將15mL菌液與100mL冷卻至45℃的肉湯瓊脂培養(yǎng)基混勻，然后分別在每一平皿內(nèi)加入10 mL，均勻攤在具有底層培養(yǎng)基的平皿內(nèi)。

1.3.2 待培養(yǎng)基凝固后，在每碟中均勻立放4個(gè)牛津杯，用陶瓦蓋覆蓋。

圖1 體外抑菌測(cè)定（管碟法）

1.3.3 用移液器分別取200μL中藥藥液于4個(gè)牛津杯中（如圖1所示），置 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。然后用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)直徑，判斷抗菌藥物抑菌作用的強(qiáng)弱。為了使試驗(yàn)結(jié)果一目了然，結(jié)果判定參照《中藥制用經(jīng)驗(yàn)錄》[1]中收載的“中草藥的抑菌作用實(shí)驗(yàn)”一文提供的方法，即將所測(cè)得的抑菌環(huán)直徑毫米數(shù)變成用“-、+、++、+++”號(hào)表示。抑菌環(huán)直徑在8.0 mm或以下，記“-”號(hào)，為不敏感；抑菌環(huán)直徑在8.0～13.0 mm，記“+”號(hào)，為低度敏感；抑菌環(huán)直徑在13.1～19.0mm，記“++”號(hào)，為中度敏感；抑菌環(huán)直徑在19.1～25.0mm，記“+++”號(hào)，為高度敏感。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)結(jié)果 加味三黃湯的抑菌圈平均直徑為20.3mm，抑菌效果為高度敏感；白頭苦參湯的抑菌圈平均直徑為16.8 mm，抑菌效果為中度敏感；郁金散的抑菌圈平均直徑為14.5 mm，抑菌效果為中度敏感。詳細(xì)情況見(jiàn)表1。

表1 3種中藥復(fù)方制劑對(duì)鴨大腸桿菌的抑菌強(qiáng)度

2.2 分析 從表1可以看出，3種中藥復(fù)方制劑對(duì)鴨大腸桿菌均有明顯的抑制作用，其中以加味三黃湯的抑菌效果最佳。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，加味三黃湯對(duì)鴨大腸桿菌的抑菌強(qiáng)度高，白頭苦參湯的抑菌強(qiáng)度中等，郁金散的抑菌強(qiáng)度也是中等，可見(jiàn)這3種中藥復(fù)方制劑都對(duì)鴨大腸桿菌有明顯的抑制作用。

[1]鄧來(lái)送.中藥制用經(jīng)驗(yàn)錄[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2012.