血清學診斷的運用

李 娟，黃仁樹

（四川省什邡市動物疫病預防控制中心，四川 什邡618400）

目前獸醫實驗室診斷主要分病毒學診斷、血清學診斷、細菌學診斷三類。細菌學與病毒學診斷在基層實驗室開展得不多，應用最普遍的是血清學診斷。

1 血樣采集、保存和運送

1.1 血液采集 血清學診斷的樣品主要是血清。家禽采用翅下靜脈采血，小豬采用臥式采血，中豬和大豬采用立式采血，奶牛采用尾靜脈采血是造成應激最小、最方便的采血方法。血清學診斷中應注意在畜禽抗體高峰期進行血樣采集。

血樣采集應嚴格按照無菌要求操作，針頭、容器、采血部位均應消毒。采血人員應熟練掌握采血技術，并選用合適的注射器及針頭進行采血。采血前應做好保定工作，并選準進針部位，豬的前腔靜脈越往頭部越淺、越細，越靠胸部越粗、越深。采血過程中應掌握好進針角度和深度，對家禽進行采血時針尖應順著血管向前推進，若推偏則會引起血腫。

1.2 血清制取 血清制取方法：自然析出法，采血后將注射器活塞向后拉1～2cm，留出血清析出的空隙，并將血液呈30°左右夾角靜置，讓血清自然析出，通常溫度高血清析出快，夏季一般靜置1h血清即可析出；離心法，即將注射器內的血液沿容器壁徐徐注入（不能用力推，也不能震蕩，否則易發生溶血），待容器內的血液凝固后，用離心機離心，離心的血液上層即是血清。采用離心法需凝血后再離心，否則離心出的是血漿。

1.3 血樣保存和運送 血清制備后應置于4℃條件下冷藏，并在24h內送檢，如24h內不能送檢，則應將血清置于-20℃條件凍存，注意不可反復凍融。

血樣運輸過程中，避免容器破損，樣品裝入冷藏箱前應鋪設襯墊。

需注意的是所有盛裝送檢樣品的容器應貼上防脫標簽，同時應填寫采樣單，標明采樣時間、采樣地點、編號和樣品名稱、畜禽品種、免疫情況等。

2 血清學診斷

2.1 試劑和器具 進行血清學診斷的試劑應有批文批號，使用時應注意試劑的有效期，診斷試劑的有效期通常比較短，有的有效期只有3個月，化學試劑主要選擇分析純。

另外，移液器量程的準確性直接影響著實驗結果，選用適當容量區間的移液器誤差會更小，如ELISA實驗中，樣品的稀釋倍數都較大，樣品加樣量很小，故移液器應選用與之較為接近的量程。在血清學檢測中經常會用到96孔血凝板，通常豬瘟的間接血凝試驗選用110°V型板，而禽流感和新城疫的血凝試驗選用90°V型板，因為在同等時間內不同型號板的血沉降效果不同。

2.2 實驗室儀器校正 在血清學診斷中，常用的儀器有電子天平、水浴鍋、酶標儀、純水器、滅菌鍋、移液器和恒溫箱。

電子天平在第一次使用、長時間未使用、移動位置及氣溫變化時都要進行校準，才能保證試驗結果的準確性。對水浴鍋應經常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和實測溫度是否一致，一般允許有±1℃的誤差。對酶標儀應經常維護光學部分，防止濾光片霉變，并定期檢測校正。純水器應注意器濾芯、反滲透膜和純化柱子是否超出使用壽命，如果失效應立即更換，否則會影響純水的質量。滅菌鍋的安全閥、溫度表、壓力表要定期校驗，以確保設備正常。移液器可用分析天平輔助校正取液量。恒溫箱的電動軸承每半年應加油一次，并經常檢查恒溫箱所示的溫度和實測溫度是否一致。

2.3 實驗室操作 實驗室操作的規范性直接影響著實驗結果的準確性。

在血清學診斷中，一是所用的器皿應洗凈，配好的溶液都需進行滅菌處理，并注明溶液名稱和配制日期，配好的溶液應置于低溫條件下保存或冷凍保存。二是所用的電子儀器在用前10min應打開預熱，以達最佳工作狀態。三是使用移液器時，為獲得較高的精度，吸頭應預先吸取一次樣品溶液，然后再正式移液，吸液時應保證槍頭無氣泡，每次實驗后應將移液器刻度調至最大，讓彈簧復原，以延長移液槍的使用壽命。四是所用溶液和試劑應取多少用多少，未用完的溶液或試劑不能倒回瓶中。五是控制好實驗室溫度，通常實驗室溫度控制在20～25℃，特定的實驗要控制到相應的實驗室溫度。

2.4 生物安全措施 基層獸醫實驗室一般不從事高致病性病原微生物檢測實驗，但進行人畜共患病等檢測（如布魯氏菌病血清學檢測）仍對實驗室工作人員有潛在威脅。實驗室工作人員應提高防護意識，了解生物安全措施對自身和環境安全的重要性。

實驗室應定期或不定期地用紫外燈或消毒劑消毒。實驗結束后應對實驗室、實驗臺面進行消毒，廢棄物應消毒后做統一處理。個人應戴好手套、口罩，穿好鞋套和實驗服，實驗結束后應洗凈雙手。

3 實驗室記錄

采樣記錄一式兩份，一份隨樣品送實驗室，一份采樣單位備案。

通常采樣記錄應包括：畜主姓名、畜主電話、畜禽場地址，動物種類、數量、日齡和免疫情況。采樣記錄單一定要填寫詳實，它對分析實驗結果有重要作用。

血清學診斷實驗也應做好原始記錄，記錄包括：檢測時間、樣品名稱、檢測項目、實驗方法、實驗設備、環境溫度和濕度、檢查結果、檢查人員等。