重慶市榮昌區豬瘟病毒的分子生物學檢測

蔣夢娜 ，曹禮靜 ，李 超 ，范才良 ，蔣 慶 *

（1.西南大學榮昌校區動物醫學系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市榮昌區職教中心，重慶 榮昌 402460；3.西南大學榮昌校區水產系，重慶 榮昌 402460；4.重慶市榮昌區畜牧獸醫局，重慶 榮昌 402460）

1 材料

1.1 儀器 0.1～2.5、10～100、100～1 000 μL 微量加樣器，TGL20M高速冷凍離心機，96空梯度PCR（德國），WD800D微波爐，DYY-6B穩壓穩流電泳儀，ChampGel60001全自動凝膠成像系統，FA2104S電子天平。

1.2 試劑盒 豬瘟病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒（北京世紀元亨動物防疫技術有限公司生產），批號：CSF20150214P，生產日期：20150214。

2 方法

2.1 樣品采集 2015年2月26日、3月5日、3月12日、3月19日、3月26日、4月2日于榮昌區某屠宰場進行6次采樣，每次隨機采取5份豬淋巴結，共計30份，用滅菌自封袋統一編號置－20℃冰箱保存待檢。

2.2 試驗操作 直接用RT-PCR方法檢測，具體操作根據試劑盒說明書進行。

3 結果

本次試驗共檢測30份豬淋巴結，檢測得出豬瘟病毒陽性0份，陽性率為0%，圖1、圖2、圖3分別為RT-PCR對30份淋巴結的檢測結果。

圖1 RT-PCR檢測結果

圖2 RT-PCR檢測結果

圖3 RT-PCR檢測結果

4 結論與分析

4.1 結論 本次試驗共檢測了30份豬淋巴結樣本，結果豬瘟陽性率為0%。表明榮昌區2015年春季不存在豬瘟感染。

4.2 分析 本次檢測HCV陽性率為零的原因，筆者認為有以下幾點：首先榮昌地區連續3年使用了政府采購的合格的豬瘟疫苗；二是榮昌區普遍在30～35日齡閹割仔豬時進行豬瘟首免，散養戶在春秋季進行集中免疫，同時給空懷母豬也要進行免疫，規模養殖場在70～80日齡會自主進行二次免疫；三是榮昌人有良好的養豬習慣和上千年的養豬經驗，懂得盡快讓仔豬吃上初乳來獲得母源抗體，使得初生仔豬具有較強的免疫力。

4.3 豬瘟診斷方法的選擇 傳統的豬瘟診斷方法主要包括兔體交叉免疫診斷、免疫酶染色試驗、病毒分離與增毒試驗、免疫熒光試驗、豬瘟間接血凝試驗等等，新發展的檢測方法有：ELISA試驗、RT-PCR檢測試驗、DNA探針、膠體金試紙檢測、血清中和試驗等。常用的診斷如兔體交叉試驗，靈敏度高，但耗時長且需要活體無抗兔；RT-PCR具有特異性強、快速和可靠性高的優點。對豬瘟進行診斷或流行病學調查時，應用RT-PCR檢測是較理想的選擇[1-3]。

4.4 豬瘟疫苗品種的選擇 如亞單位疫苗、重組疫苗、DNA疫苗、標記疫苗，目前各個養殖場普遍使用豬瘟兔化弱毒疫苗[4]。雖然HCV存在不同的基因群，但并未發現不同的血清型，說明血清學上的差異并不明顯。我國雖然存在多基因型的毒株，但是HCV已經發生的基因變異尚未對目前的豬瘟免疫構成威脅，豬瘟兔化弱毒苗對不同基因型毒株仍可產生交叉保護力[5]。

4.5 導致豬瘟免疫失敗的可能原因 主要受疫苗質量、免疫操作、免疫程序、持續感染、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）干擾、免疫抑制病干擾的影響；另外，飼養管理不當、豬的營養狀況和人為因素等也會影響免疫成敗。

[1] 胡曉苗，張丹俊，汪麗，等.豬瘟病毒實驗室診斷研究進展[J].畜禽業，2007（3）：21-23.

[2] 曲春玲.豬瘟診斷技術的比較[J].中國動物保健，2014，16（6）：55-56.

[3] 杭麗，皇甫抗棟，沈玉磊.豬瘟診斷技術的研究進展[J].中國畜禽種業，2013（1）：46-48.

[4] 羅廷榮，莫揚，吳文德，等.RT-PCR技術檢測豬瘟病毒的應用研究[J].中國預防獸醫學報，2004，26（4）：307-312.

[5] 涂長春，萬遂如.我國豬瘟的流行現狀、原因與防制對策[A].豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫學會家畜傳染病學分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業委員會第7次學術交流會論文集[C].2002：5-8.