DC-CIK治療老年惡性腫瘤的臨床療效

DC-CIK治療老年惡性腫瘤的臨床療效

韓立春陳文慶1張雪瑩1孫寶盛1

(青島大學醫學院，山東青島266021)

摘要〔〕目的探討樹突細胞(DC)聯合細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)治療對老年惡性腫瘤的免疫功能影響。方法選取2013年3月至2014年3月吉林省腫瘤醫院收治的老年惡性腫瘤患者60例，DC-CIK治療1個療程，治療前后行免疫功能指標及生活質量指標自身對照。結果與治療前相比，治療后外周血總T淋巴細胞、T輔助細胞、自然殺傷(NK)樣T淋巴細胞、NK細胞均較前明顯增高、抑制性T細胞明顯下降(P<0.05) ，生活質量評分較前明顯改善(P<0.05)。結論DC聯合CIK細胞免疫治療能顯著提高老年惡性腫瘤患者的免疫功能。

關鍵詞〔〕DC-CIK；惡性腫瘤；免疫功能

中圖分類號〔〕R730.51〔文獻標識碼〕A〔

惡性腫瘤發生、發展及預后與機體細胞免疫狀態有關。樹突細胞(DC)是機體內重要的抗原提呈細胞，可激發T 淋巴細胞介導的免疫反應。細胞因子誘導殺傷細胞(CIK)是將人外周血單個核細胞在體外與多種細胞因子及抗體共同培養一段時間后獲得的一群殺傷樣T細胞，對腫瘤細胞具有高效的溶解毒性。DC能夠識別出腫瘤細胞，并把腫瘤細胞的相關信號傳遞給 CIK 細胞，使之發揮殺傷腫瘤細胞的功能。因此，DC 能顯著提高 CIK 細胞針對腫瘤細胞的殺傷活性。CIK細胞治療作為目前腫瘤生物治療的首選方案，已在惡性腫瘤治療中取得較好的療效〔1,2〕。老年惡性腫瘤患者年老體弱，自體培養出的DC-CIK細胞質量欠佳，本文嘗試利用異體臍帶血DC-CIK細胞對這類患者進行輔助治療，并就其臨床療效進行觀察。

1材料與方法

1.1研究對象本研究選取2013年3月至2014年3月吉林省腫瘤醫院收治的老年惡性腫瘤患者60例，均經細胞或病理學確診，甲狀腺癌9例、肺癌15例、乳腺癌12例、胃癌11例、肝癌6例、結腸癌7例，男40例，女20例，年齡65～85歲，CIK治療1個療程以上，每天CIK輸注1次， 10次為1個療程。

1.2主要試驗儀器及試劑雙色熒光標記抗體CD 分子單克隆抗體 CD4-FITC /CD8-PE、CD3-FITC/CD16 +CD56-PE、CD25-FITC、CD127-PE、CD4-PC5 購自美國貝克曼公司，實驗選用美國貝克曼公司 XLMCL 流式細胞儀。

1.3CIK制備與回輸CIK由本院腫瘤研究所實驗室規范制備：采異體臍帶血50 ml，利用淋巴細胞分離液分離血液中的單核細胞，按照2×106ml濃度分裝至培養瓶內，培養液含有人白細胞介素(rhIL)-2,CD3,γ-干擾素(IFN)-γ，在5% CO2、37℃培養箱內培養，觀察細胞生長狀態，24 h后進行細菌、內毒素檢測無污染后進行下一步DC、CIK的誘導。將培養6 d的DC與CIK按1∶5的比例混合培養，在混合培養的第3天檢測細胞活性，并做細菌和內毒素檢測，無問題給患者使用。

1.4治療方案采用CIK靜脈輸注,每次輸注細胞數以1×108～2×108為1個單位進行靜脈輸注，根據情況進行，10次輸注為1個療程。治療后1 w評價療效。

1.5療效評價

1.5.1細胞免疫功能評價分別于治療前 1 d及治療結束后1 w采集清晨空腹外周靜脈血 5 ml，用淋巴瘤細胞分離液分離出單個核細胞后，每個試管分裝105/100 μl細胞，分別有各自的抗體4 μl后4℃孵育30 min后，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次后流式細胞儀測定，計數10 000個細胞，測定總T淋巴細胞、T輔助/誘導細胞、T抑制/細胞毒細胞、自然殺傷(NK)細胞、NK樣T淋巴細胞、調節性T細胞陽性表達率及免疫狀態。

1.5.2生存質量評價記錄患者食欲、睡眠、精神、體力的變化，以數字0～5表示，0為無干擾，5為嚴重干擾；血常規、肝、腎功、離子、血糖變化；癥狀、體征的變化及不良反應。

1.6安全性評價記錄患者癥狀體征的變化及不良反應。

2結果

2.1治療前后T細胞亞群比例比較患者行DC-CIK細胞治療后，免疫功能檢測的各項指標均增高，其中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD56+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+值明顯增高(P<0.05)。見表1。

時間CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3+CD56+CD3-CD56+CD4+/CD8+治療前54.73±3.0731.21±3.0526.09±8.052.1±0.9813.61±4.531.08±0.11治療后63.27±2.5238.35±3.2328.70±7.813.8±1.2521.96±5.981.47±0.13P值<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05<0.05

1吉林省腫瘤醫院

第一作者：韓立春(1974-)，女，碩士，副主任醫師，主要從事腫瘤內科學研究。

2.2治療前后生活質量評分比較60例患者經DC-CIK細胞治療后，生活質量指標中食欲不振、失眠、精神萎靡、乏力癥狀均明顯改善(均P<0.05)。見表2。

時間食欲不振失眠精神萎靡乏力治療前3.78±1.013.31±1.133.59±1.093.72±0.87治療后2.09±0.832.22±0.802.58±0.922.28±0.81P值<0.05<0.05<0.05<0.05

2.3安全性評價結果細胞回輸后大多數無明顯不良反應，只有5例患者發熱，體溫最高達38.5℃，為一過性，對癥處理后可降至正常。血常規及肝、腎功、離子、血糖未見明顯異常。

3討論

CIK臨床應用的研究建立在過繼性細胞免疫療法的機制基礎上，旨在消除腫瘤免疫抑制影響，增加CIK數量和細胞毒效應，其發展經歷了從NK療法到CIK細胞以及 DC與CIK聯合使用的過程〔3〕。常規的方法是從患者外周血提取單核淋巴細胞(PBMC)，或因自體細胞采集困難可以從臍帶血中獲取，這些細胞在體外一方面接受腫瘤抗原的刺激分化為抗原提呈的DC細胞，另一方面經過IFN-γ、IL-2和抗CD3抗體等誘導刺激，成為具有免疫活性CIK細胞。自體回輸后，這些活化的CIK細胞不產生明顯的副作用，但可以直接殺傷、抑制腫瘤細胞，或通過刺激免疫系統，提升機體整體抗瘤免疫力。

CIK細胞兼具T淋巴細胞組織相容性復合體(MHC)限制性和NK細胞非MHC性的殺瘤活性，是廣譜的效應細胞，對肺癌、結直腸癌、胃癌、腎癌、乳腺癌、宮頸癌等腫瘤細胞以及許多耐藥腫瘤細胞均有顯著殺傷活性。隨著對CIK的深入研究，目前已有大量文獻報道將其應用于惡性腫瘤治療的臨床研究〔4～7〕。CIK殺瘤機制是通過釋放胞質顆粒酶B作用于腫瘤靶細胞；亦可通過FasL-Fas途徑誘導Fas+腫瘤細胞凋亡；另外，CIK產生許多炎性細胞因子，如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-2和IFN-α等，可以有效抑制周邊腫瘤細胞生長〔8〕。研究〔9〕表明，CIK的應用還可以協同化放療的抗瘤作用。最新文獻〔10〕報道，體外活化時加入IL-12因子能明顯增強CIK細胞的殺傷效應；而且， CIK富集培養時間也得到明顯縮短。

腫瘤形成的一個重要因素就是失去機體正常的免疫監視功能，晚期惡性腫瘤病人表現為逐漸的免疫反應不全，腫瘤細胞產生生物活性物質引起T 細胞增殖抑制，免疫系統功能不全，活化和(或)增加免疫細胞的凋亡達到削弱機體免疫功能，逃避免疫監視〔11〕。研究顯示，腫瘤患者體內CD4+CD25+調節T 細胞明顯高于正常人，從而抑制了機體免疫功能。李敏等〔12〕顯示治療后的CD4+CD25+T 比例降低，故認為CIK 細胞能在一定程度上提高腫瘤機體的免疫功能，改善免疫抑制狀態。

本研究表明患者治療后免疫功能得到改善。由此可見， 經過CIK 細胞回輸治療后機體除直接殺傷腫瘤細胞的能力較治療前獲得提高外， CIK細胞還通過調節機體其他免疫細胞的功能， 包括增強抗腫瘤活性、刺激NK 細胞生長、改變T 細胞亞群比率、刺激機體T 細胞增殖等方式使患者增強免疫監視作用， 維持機體內環境的平衡， 增強機體免疫功能。治療過程中，部分患者出現發熱、畏寒等不適，可能是由于治療后大量細胞因子釋放作用于中樞神經系統產生的體溫上調反應。

綜上所述，CIK易于體外培養、增生速度快，可提高機體免疫力，安全性高，不良反應少，用于治療老年惡性腫瘤可改善患者的生活質量和延長其生命。

4參考文獻

1Li XD,Xu B,Wu J,etal.Review of Chinese clinical trials on CIK cell treatment for malignancies 〔J〕.Clin Transl Oncol,2012；14(2):102-8.

2Mesiano G,Todorovic M,Gammaitoni L,etal.Cytokine-induced killer(CIK) cells as feasible and effective adoptive immunotherapy for the treatment of solid tumors 〔J〕.Expert Opin Biol Ther,2012;12(6):673-84.

3Wang QJ Wang H,Pan K,etal. Comparative study on anti-tumor immune response of autologous cytokine-induced killer(CIK) cells,dendritic cells-CIK(DC-CIK),and semi-allogeneic DC-CIK〔J〕.Chin J Cancer,2010;29(7):641-8.

4Sangilolo D.Cytokine induced killer cells as promising immunotherapy for solid tumors 〔J〕.J Cancer,2011;2(4):363-8.

5Niam M,Linn YC,Fook-Chong S,etal.Clinical scale expansion of cytokine-induced killer cells is feasible from healthy donors and patients with acute and chronic myeloid leukemia at various stages of therapy 〔J〕.Exp Hematol,2011;39(9)：897-903.

6Lu XC,Yang B,Yu RL,etal.Clinical study of autologous cytokine-induced killer cells for the treatment of elderly patients with diffuse larfe B-cell lymphoma 〔J〕.Cell Biochem Biophys,2012;62(1):257-65.

7Yu J,Ren X,Li H,etal.Synergistic effect of CH-296 and interferon gamma on cytokine-induced killer cells expansion for patients with advanced-stage malignant aolid tumors 〔J〕.Cancer Biother Radiopharm,2011;26(4):485-94.

8Vemeris MR,Komacker M,Mailander V,etal.Resistance of ex vivo expanded CD3+ CD56+ T cells to Fas-mediated apoptosis〔J〕.Cancer Immununol Immunother,2000;49(6):335-45.

9Marin V,Pizztola I,Agostoni V,etal.Cytokine-induced killer cells for cell therapy of acute myeloid leukemia:improvement of their immune activity by expression of CD33- specific receptors〔J〕.Haematologica,2010;95(12):2144-52.

10Helms MW,Prescher JA,Cao YA,etal.IL-12 enhances efficacy and shortens enrichment time in cytokine-induced killer cell immunotherapy〔J〕.Cancer Immunol Immunother,2010;59(9):1325-34.

11Hobeika AC，Morse MA，Osada T，etal. Depletion of human regulatory T Cells〔J〕. Methods Mol Biol，2011;707(2):219-31.

12李敏，鄧海峰，陸明洋，等. CIK 治療前后腫瘤患者外周血CD4+CD25+調節型T 細胞變化研究〔J〕. 中國實驗診斷學，2011;15(6):1051-3.

〔2014-05-07修回〕

(編輯袁左鳴)