胃腺癌中Kruppel樣因子4、5和增殖細胞核抗原表達

胃腺癌中Kruppel樣因子4、5和增殖細胞核抗原表達

韓笑魏琳琳1

(遼寧醫學院附屬第一醫院腫瘤科，遼寧錦州121001)

摘要〔〕目的應用免疫組化方法檢測胃腺癌術后組織中Kruppel樣因子(KLF)4、5和增殖細胞核抗原(PCNA)的表達特征。方法51例經病理醫師確診的胃腺癌術后組織作為觀察組，40例距腫物邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織作為對照組。兩組KLF4、KLF5和PCNA蛋白表達應用免疫組化檢測。結果兩組KLF4、KLF5和PCNA表達差別有顯著性。觀察組中KLF4、KLF5和PCNA的陽性率均與浸潤深度相關，KLF4的陽性率與脈管內瘤栓相關，KLF5的陽性率與腫瘤的最大徑、脈管瘤栓相關，PCNA的陽性率與腫瘤的最大徑相關。線性相關分析顯示觀察組中KLF5和PCNA具有正相關性，其他指標間未見明顯相關性。結論胃腺癌術后組織中KLF4、KLF5和PCNA異常表達，三者異常表達對腫瘤性的進展過程起一定的作用。KLF5可能對細胞增殖有影響。

關鍵詞〔〕胃腺癌；Kruppel樣因子4；Kruppel樣因子5；增殖細胞核抗原；免疫組化

中圖分類號〔〕R735〔文獻標識碼〕A〔

1遼寧醫學院附屬第一醫院婦產科

第一作者：韓笑(1982-)，女，主治醫師，主要從事腫瘤學研究。

胃腺癌的發生因素較多，不僅與飲食、幽門螺桿菌相關，還與調節腫瘤分化和增殖的基因相關〔1〕。Kruppel樣因子(KLF)4、5是KLF家族中重要的蛋白，其不僅對調節細胞轉錄有重要作用，還對細胞增殖有重要影響〔2，3〕。增殖細胞核抗原(PCNA)是臨床和病理標記增殖中應用的重要蛋白，表達于細胞核，可以反映細胞增殖的活性〔4，5〕。本研究關注胃腺癌中KLF4和KLF5的表達特征及二者對PCNA增殖指數的作用。

1資料與方法

1.1一般資料胃腺癌手術后留取的臨床資料和蠟塊組織作為觀察組，共51例，均重新制備切片并由病理醫生復審，納入符合WHO腫瘤病理學和遺傳學中的診斷標準。男30例，女21例；年齡51～84歲，平均(66.5±6.5)歲。高分化10例，中分化19例，低分化22例。40例距腫物邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織作為對照組。男20例，女20例；年齡53～80歲，平均(67.6±5.8)歲，兩組一般資料無明顯差異。

1.2KLF4、KLF5和PCNA表達的檢測KLF4、KLF5和PCNA抗體均為濃縮液，由病理技師按不同比例稀釋后進行預實驗，選擇最理想的濃度用在正式實驗中。免疫組化方法應用SP法，操作嚴格按說明書進行，做好質量控制。

1.3KLF4、KLF5和PCNA結果的判讀標準KLF4、KLF5和PCNA均以細胞核中染色棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞。選擇腫瘤細胞或上皮細胞密集的區域10個(400倍)，計數陽性細胞的百分率，取平均值。按通用標準計算，即<10%為陰性，以≥10%為陽性。

1.4統計學方法采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗或線性相關分析。

2結果

2.1兩組中KLF4、KLF5和PCNA陽性率比較觀察組與對照組KLF4〔10例(19.61%) vs 34例(85.00%)〕、KLF5〔36例(70.59%)vs1例(2.50%)〕和PCNA〔40例(78.43%)vs1例(2.5%)〕陽性率差別有統計學意義(均P<0.000 1)。

2.2KLF4、KLF5和PCNA在觀察組不同分組中的比較觀察組中KLF4、KLF5和PCNA陽性率均與浸潤深度相關，KLF4陽性率與脈管瘤栓相關，KLF5陽性率與腫瘤最大徑、脈管內瘤栓相關，PCNA陽性率與腫瘤最大徑相關。見表1。

表1KLF4、KLF5和PCNA陽性表達在觀察組不同分組中的比較〔n(%)〕

臨床特征nKLF4KLF5PCNA最大徑<5cm227(31.82)11(50.00)14(63.64)≥5cm293(10.34)25(86.21)26(89.66)χ2值3.65947.89915.0063P值0.05580.00490.0253浸潤深度未及漿膜248(33.33)12(50.00)15(62.50)漿膜及以外272(7.41)24(88.89)25(92.59)χ2值5.41799.25566.8016P值0.01990.00230.0091脈管內瘤栓無3810(26.32)24(63.16)28(73.68)有130(0)12(92.31)12(92.31)χ2值4.25553.96441.9859P值0.03910.04650.1588分化程度高+中298(27.59)21(72.41)22(75.86)低222(9.09)15(68.18)18(81.82)χ2值2.71470.10790.2623P值0.09940.74250.6085

2.3觀察組中KLF4、KLF5和PCNA的相關性顯示KLF5和PCNA具有正相關性(r=0.47，P=0.046 0)，其他指標間未見明顯相關性(P>0.05)。

3討論

胃腺癌最多見的肉眼形態是潰瘍型，也可形成實性結節或隆起型，切面常灰白色。病變進展時浸潤性生長明顯，可以在漿膜面周圍形成結節。腫瘤細胞體積大，核染色深，呈明顯的浸潤性生長〔6〕。KLF家族是存在于真核生物中的基因，可以對腫瘤細胞增生和惡性轉化起一定作用〔7，8〕。KLF4和KLF5是家族中主要被學者關注的蛋白，尤其是腫瘤形成的研究中〔9，10〕。張志平等〔11〕認為KLF4可以通過激活或抑制目的基因來調節轉錄，KLF4在人結腸腺癌中表達下調，在癌變組織中的表達也下降，但是KLF4在口腔上皮腫瘤和乳腺腫瘤中常表達過度，且彌漫分布，因此KLF4可能具有較強的組織特異性〔12〕。KLF5的作用可能與KLF4的表達不完全一致〔13〕，KLF5被學者認為是促進腫瘤進展的基因，其主要表現為對腫瘤細胞增殖調節的過程中〔14，15〕。王文韜等〔16〕通過對結腸癌中KLF5的表達進行免疫組化的檢測，認為腫瘤中KLF5表達升高，其具有原癌基因的作用，KLF5高表達可以有效促進腫瘤進展。同時作者也發現KLF5與CyclinD1、P53存在正相關性，認為KLF5在發揮作用過程中，可以通過上調CyclinD1、P53的表達而有效促進腫瘤細胞增殖。

本實驗結果顯示胃腺癌術后組織中KLF4低表達、KLF5和PCNA高表達，提示三者異常表達是腫瘤性改變中的重要因素。Yoon等〔17〕研究顯示KLF4可以通過與細胞周期蛋白B1啟動子中的相關元件結合發揮抑制腫瘤的轉錄功能，進而對維持細胞周期的檢查點有一定影響。本文結果顯示KLF4、KLF5和PCNA三種蛋白可以參與腫瘤性的侵襲過程，使腫瘤細胞向周圍組織生長的能力增強，對周圍組織的破壞能力增強。KLF4可能參與腫瘤的脈管形成及侵襲脈管的過程中。KLF5是促進腫瘤生長的重要蛋白，具有原癌基因的作用，即KLF5高表達時腫瘤生長速度增加，腫瘤細胞的增生活躍，腫瘤進展加速。PCNA是直接影響腫瘤生長的重要蛋白。PCNA是標記增殖指數的特異性蛋白。腫瘤失控性增生和分化障礙是形成腫瘤異型增殖的基礎，而PCNA可能參與上述過程中。本實驗未發現KLF4、KLF5和PCNA蛋白與分化程度的關系，但是KLF4可能與胃腺癌的分化程度可能會有關聯，后續研究可以增大樣本來觀察KLF4與分化的關系。本文提示KLF5和PCNA具有明顯的協同作用，也提示KLF5高表達時對PCNA陽性的細胞具有明確的促進作用，共同促進腫瘤的形成和進展進程〔18，19〕。

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〔2015-10-10修回〕

(編輯苑云杰)