老年胃癌患者胃癌組織中血管內皮生長因子-C、-D、-A、成纖維細胞生長因子-2表達、幽門螺旋菌-L型感染與淋巴結轉移的關系

老年胃癌患者胃癌組織中血管內皮生長因子-C、-D、-A、成纖維細胞生長因子-2表達、幽門螺旋菌-L型感染與淋巴結轉移的關系

王成袁麗萍殷麟

(青海大學附屬醫院胃腸腫瘤外科，青海西寧810001)

摘要〔〕目的分析老年胃癌患者胃癌組織中血管內皮生長因子(VEGF)-C、-D、A及成纖維細胞生長因子(FGF)-2的表達和幽門螺旋菌(Hp)-L型感染與淋巴結轉移的關系。方法胃癌患者手術病理組織蠟塊標本90例，采取免疫組化法測定VEGF-C、-D、-A、FGF-2、Hp-L型表達水平，計算微淋巴管密度(LVD)。結果Hp-L型陽性組VEGF-C、-D陽性率顯著高于Hp-L型陰性組(P<0.01)。VEGF-C、-D陽性表達組和Hp-L感染LVD顯著高于陰性組(P<0.01)。淋巴結轉移陽性組VEGF-C、-D、FGF-2表達和Hp-L型感染陽性率、LVD顯著高于淋巴結轉移陰性組(P<0.01)。LVD和胃癌淋巴結轉移具有明顯相關性(P<0.01)。結論Hp-L型感染、VEGF-C、-D、FGF-2和胃癌淋巴結轉移關系密切， Hp-L型感染、VEGF-C、-D在胃癌組織淋巴管生成方面具有一定作用，Hp-L型感染、VEGF-C、-D、FGF-2可共同促進胃癌的淋巴結轉移。

關鍵詞〔〕血管內皮生長因子；成纖維細胞生長因子-2；幽門螺旋菌-L型；淋巴結轉移；胃癌

中圖分類號〔〕R459.3；R656.61〔文獻標識碼〕A〔

第一作者：王成(1971-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事胃腸腫瘤研究。

胃癌早期臨床癥狀不明顯，隨著病情進展可逐漸出現惡心、嘔吐、上腹不適、吞咽困難、幽門梗阻以及消化道出血等癥狀。胃癌的發病是多因素綜合作用的結果〔1，2〕。主要病因有飲食生活習慣、幽門螺桿菌(Hp)感染及遺傳因素等。其中Hp感染與胃癌之間的關系已被證實，但是有關Hp-L型與胃癌關系的研究較少見。另外，癌組織中的某些細胞因子與胃癌的發生、發展、轉移的關系尚未完全闡明。本研究通過免疫組化法對胃癌組織中的血管內皮生長因子(VEGF)-C、-D、-A、成纖維細胞生長因子(FGF)-2進行測定，同時檢測幽門螺旋菌(Hp)-L型的感染情況，旨在探究其與淋巴結轉移的關系。

1材料與方法

1.1試驗標本我科2011年1月至2015年1月胃癌手術病理組織蠟塊標本90例，均確診為胃癌，同時臨床病史資料完整，術前未進行任何抗癌治療。男68例，女22例；年齡62~83歲，平均(72.4±3.9)歲；淋巴結轉移55例，淋巴結無轉移35例。

1.2試劑和試驗方法兔抗人VEGF-C、-D、-A多克隆抗體、兔抗人FGF-2單克隆抗體購自福州邁新公司，兔抗人Hp-L型抗體、鼠抗人D2-40單克隆抗體購自北京中杉金橋生物公司。將病理組織石蠟塊切片厚度為4 μm，進行免疫組化SP法染色，采用PBS代替一抗進行陰性對照。

1.3觀察指標VEGF-C、-D、-A、FGF-2表達：免疫組化中，陽性表現為細胞質中棕黃色或黃色顆粒〔3〕。其中染色程度：0分，不著色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。染色細胞占計數細胞百分率：0分，<5%；1分，5%~25%；2分，26%~50%；3分，51%~75%；4分，>75%。染色程度和染色細胞占計數細胞百分率相乘乘積進行計算：0分，陰性；1~4分，弱陽性；5~8分，中度陽性；9~12分，強陽性。Hp-L型表達：免疫組化中，陽性表現為細胞質中棕黃色細顆粒〔4〕。微淋巴管密度(LVD)計算：D2-40陽性表現為淋巴管內皮細胞質或細胞膜中棕黃色顆粒。計數時先在100倍低倍鏡視野下選取腫瘤中心和邊緣組織中含有淋巴管最多的部分。選取200倍高倍鏡視野，隨機選取3個視野計數，計算其平均值〔5〕。

1.4統計學方法采用SPSS22.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、多因素Logistic回歸分析。

2結果

2.1VEGF-C、-D、-A及FGF-2的表達和Hp-L型感染之間的關系Hp-L型陽性組的VEGF-C、-D陽性率顯著高于Hp-L型陰性組(P<0.01)。見表1。

表1　VEGF-C、-D、-A及FGF-2的陽性表達和

2.2VEGF-C、-D、-A、FGF-2的表達、Hp-L型感染的胃癌組織中LVD比較VEGF-C、-D和Hp-L感染陽性組LVD顯著高于陰性組(P<0.01)。見表2。

表2　VEGF-C、-D、-A、FGF-2陽性表達、

2.3VEGF-C、-D、-A、FGF-2的表達、Hp-L型感染、LVD和淋巴結轉移的關系淋巴結轉移陽性組VEGF-C、-D、FGF-2表達和Hp-L型感染陽性率、LVD顯著高于淋巴結轉移陰性組(P<0.01)。見表3。

表3　VEGF-C、-D、-A、FGF-2的表達、Hp-L型感染、LVD值和淋巴結轉移的關系( n)

2.4胃癌淋巴結轉移相關因素的Logistic回歸分析LVD和胃癌淋巴結轉移具有明顯相關性(P<0.01)。見表4。

表4　胃癌淋巴結轉移相關因素的Logistic回歸分析

3討論

毛細淋巴管的生成是癌組織發生、發展及轉移的重要因素〔6〕。而VEGF是促進毛細淋巴管生成的重要因子〔7〕。其作用機制為與淋巴管內皮細胞上VEGF受體(VEGFR)結合，引發信號轉導級聯反應，從而調節淋巴管內皮細胞的增殖與分化。VEGF中對淋巴管生成起主要作用的有VEGF-C、VEGF-D及VEGF-A〔8〕。其中VEGF-C和VEGF-D具有同源性，均通過與淋巴管內皮細胞VEGFR-3結合，使細胞內第二信使活化，從而激活Akt或MAPK等信號通路，正向調控淋巴管內皮細胞增殖、分化及遷移的過程，促進淋巴管生成。正常組織中，VEGF-C和VEGF-D常處于失活或者封閉狀態。而腫瘤組織中VEGF-C和VEGF-D表達水平上升，且處于活性狀態，具有誘導癌組織內毛細淋巴管生成的作用，從而促進腫瘤的生長和轉移。而VEGF-A則是通過與VEGFR-1、VEGFR-2相結合，一方面可直接促進腫瘤組織淋巴管的生成和轉移，另一方面可刺激巨噬細胞、單核細胞、中性粒細胞等炎性細胞分泌VEGF-C和VEGF-D，從而間接促進毛細淋巴管的生成。LVD是反映癌組織淋巴管生成的主要指標〔9〕。本研究結果說明VEGF-C和VEGF-D的表達水平升高是腫瘤組織新生毛細淋巴管生成的基礎，VEGF-C和VEGF-D與胃癌的發生和轉移具有密切的聯系。而本研究中未發現VEGF-A與胃癌組織淋巴管生成之間的顯著關系，一方面可能由于VEGF-A在腫瘤組織發生和轉移過程中的直接作用并不明顯，另一方面可能與研究樣本的局限性有關。

FGF-2是一種多功能細胞因子〔10〕。FGF-2對腫瘤發生和轉移、血管生成、胚胎發育等過程均起重要作用。其中當FGF-2處于低水平表達時，主要促進淋巴管生成，其作用機制主要分為兩方面，一是通過細胞內信號轉導激活FGF受體及其下游的信號通路，直接誘導癌組織的毛細淋巴管生成，二是通過促進炎性細胞如單核巨噬細胞等分泌VEGF-C和VEGF-D，從而間接調節腫瘤淋巴管內皮細胞的增殖、分化及轉移。本研究結果證實了FGF-2在胃癌淋巴結轉移中的作用。

Hp是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌〔11〕。研究顯示，約60%以上胃癌患者均存在Hp感染〔12〕。其中Hp-L型由于缺失細胞壁，無法維持螺旋形彎曲的外部形態，主要表現為球形或短桿形。Hp-L型表面電荷發生變化，增強了其對胃組織細胞的黏附性，定植能力更強。Hp-L型促進胃癌毛細淋巴管生成的主要機制為：①Hp-L型長時間定植于胃組織中，引發慢性炎癥，從而促進炎性細胞釋放各種炎性因子，其中包括VEGF及FGF-2等，從而間接促進癌組織淋巴管的生成；②慢性炎癥可導致胃組織血管及淋巴管通透性增加，滲出增加，導致組織水腫，可引發局部組織缺氧，從而誘導各種細胞生長因子表達，促進淋巴管內皮細胞增生和轉移。本研究說明Hp-L型感染與胃癌的發生和轉移密切相關。LVD和胃癌淋巴結轉移具有明顯相關性。

綜上，VEGF-C、-D、FGF-2及Hp-L型感染能促進腫瘤組織新生毛細淋巴管的生成和轉移，是胃癌發生、發展的重要因素。

4參考文獻

1楊揚，張敏，任曉靜，等.腫瘤易感基因101對胃癌細胞血管形成的影響〔J〕.中華實驗外科雜志，2014;31(11)：2420-2.

2梁寒暉，韋綿輝，張學榮，等.貝伐單抗在胃癌療效評價中的生物標志物研究〔J〕.中華實驗外科雜志，2014;31(11)：2417-9.

3樊強，卞邦健，楊廣林，等.新輔助化療在局部晚期胃癌治療中臨床應用〔J〕.現代儀器與醫療，2014;6(1)：55-6.

4封蔚瑩，羅婷，鐘永根，等.成人慢性特發性中性粒細胞減少癥與幽門螺桿菌感染的臨床相關性研究〔J〕.華中科技大學學報(醫學版)，2013;42(4)：476-9.

5Coskun U,Akyurek N,Dursun A,etal.Peritumoral lymphatic microvessel density associated with tumor progression and poor prognosis in gastric carcinoma〔J〕.J Surg Res,2010;164(1):110-5.

6黃林飛，盧玉娟，潘晟，等.血管內皮生長因子、基質金屬蛋白酶-2在胃癌中的表達及其與胃癌侵襲性的關系〔J〕.中華實驗外科雜志，2014;31(8)：1816-8.

7張國建，秦曉寧，閻慶輝，等.腫瘤轉移相關基因-1和血管內皮生長因子C在胃癌中的相關性〔J〕.中華實驗外科雜志，2014;31(3)：499-501.

8張征，毛伯能，錢佶.胃癌組織血管內皮生長因子家族與胃癌轉移的關系〔J〕.中華消化雜志，2012;32(12)：866-7.

9王靜文，唐建武，王波，等.血管內皮生長因子比值在胃癌及轉移中的變化及意義〔J〕.中華消化雜志，2012;32(9)：638-40.

10Wong SY,Hynes RO.Tumor-lymphatic interaction in an activated stromal microenvironment〔J〕.J Cell Biochem,2007;101(4):840-50.

11鄭奎城，林曙光，李曉慶，等.血清PG和G-17及幽門螺桿菌抗體表達與胃癌發病率相關性分析〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(1)：24-7.

12蔡兆根，于東紅，吳海波，等.胃癌中幽門螺桿菌L型感染和淋巴管生成因子與淋巴結轉移的關系〔J〕.華中科技大學學報(醫學版)，2014;43(1)：32-8.

〔2013-12-19修回〕

(編輯苑云杰)