P53在宮頸上皮內瘤樣病變中的檢測價值

P53在宮頸上皮內瘤樣病變中的檢測價值

田曉蕾鐘穎

(深圳市西麗人民醫院婦產科，廣東深圳518000)

摘要〔〕目的探討基因表達產物P53蛋白在正常宮頸上皮、各級宮頸CIN組織中的表達水平與CIN病理學及分級的關系。方法采用S-P免疫組化法對45例經病理診斷為宮頸上皮內瘤樣病變患者進行檢查，檢測各級宮頸組織中P53表達水平，以正常宮頸上皮15例作為對照。結果P53蛋白陽性表達率在正常宮頸鱗狀上皮、上皮內瘤樣病變分別為0.00%、40.00%，兩兩比較差異顯著(P<0.01)；在各分級中，P53 蛋白陽性表達率分別為30.00%，38.89%，47.06%。結論說明P53參與了宮頸上皮內瘤樣病變的發生，在各組宮頸上皮組織中的表達呈負相關。

關鍵詞〔〕P53；宮頸上皮內瘤樣病變；免疫組織化學

中圖分類號〔〕R73〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：深圳市南山區科技計劃項目(2013047)

通訊作者：鐘穎(1973-)，女，碩士，主任醫師，主要從事圍產醫學研究。

第一作者：田曉蕾(1982-)，女，碩士，主治醫師，主要從事婦產科學的研究。

宮頸上皮內瘤樣病變是一種宮頸癌前病變，它的外表可以是正常的，但細胞學或組織學檢查有了異常增殖的改變〔1〕。在與宮頸癌有關的眾多基因中，P53蛋白所發揮的生物學作用也日益受到人們重視〔2〕。大部分突變發生在第5～8外顯子區域內。p53基因發生突變的腫瘤細胞存在于外周血中。采用靈敏的分子檢測方法可特異性地血液樣本中檢測到微量的p53基因突變〔3〕。在結直腸癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和頭頸部癌患者的血液DNA中都已檢測到了p53基因突變〔4〕。相關研究表明宮頸上皮內瘤變中P53表達增加，共同導致細胞凋亡減少，可能是宮頸上皮內瘤變向宮頸癌發生、發展的作用機制之一〔5〕。本實驗通過檢測P53在宮頸宮頸上皮內瘤樣病變中的表達情況，探討宮頸癌早期診斷依據及基因治療方案。

1材料與方法

1.1對象納入宮頸上皮內瘤樣病變組織標本45例設為實驗組，年齡40～62歲，均經病理證實的活檢或手術切除得到證實，其中CINⅠ級10例，CINⅡ級18例，CINⅢ級17例。另外選取正常宮頸組織標本15例作為對照組，以上診斷均經病理證實。兩組患者基線資料具有可比性，并對實驗知情同意。診斷標準：根據其非典型增生的程度，宮頸上皮內瘤樣病變分為CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ三個不同的級別。CINⅠ級：相當于極輕度和輕度不典型增生；CINⅡ級：相當于中度不典型增生；CINⅢ級：相當于重度不典型增生和子宮頸原位癌。

1.2主要試劑鼠抗人P53單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒均購于(上海)化學試劑有限公司。

1.3實驗方法免疫組化檢測：標本用中性甲醛固定，石蠟切片脫蠟至水，5%～10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉，室溫孵育10min。滴加一抗工作液，37℃ 孵育1～2h或4℃ 過夜，連續切片5份，厚3μm，1張常規蘇木精-伊紅染色，確定病理診斷及分組。用已有陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定染色強度評分標準〔6〕：以細胞質和(或)核內出現棕黃色顆粒為陽性表達，陽性細胞數≤5%者0分，6%～25%者1分，26%～50%者2分，≥50%者3分。細胞染色黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。采用半定量積分法判定結果：染色強度評分與陽性細胞評分相加：≤1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性()，≥6分為強陽性()。

1.4統計學方法應用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗。

2結果

2.1P53表達在組織細胞中分布P53蛋白陽性表達于細胞核，以細胞核出現黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，從正常宮頸-宮頸癌P53表達逐漸增加，顏色逐漸加重。見圖1。

2.2P53蛋白在正常宮頸上皮、各級CIN中的表達P53在正常宮頸上皮(0%)、各級CIN陽性表達率〔CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級陽性率分別為3例(30.0%)、7例(38.89%)、8例(47.06%)〕隨病變程度的加重依次升高，與對照組比較差異顯著(χ2=13.25，P<0.01)，但P53陽性表達率在各級CIN中兩兩比較無顯著性差異(P>0.05)。

2.3P53在正常宮頸組織、CIN中的表達情況對照組P53 0例陽性，觀察組-9例，+7例，2例，27例。在對照組和實驗組間差異顯著(P<0.05)。

圖1　P53表達在組織細胞中的陽性分布(S-P,×400)

3討論

p53基因可參與細胞周期的調控，在維持細胞增長、抑制腫瘤增殖過程中起重要作用，是重要的細胞生長負調節因子，參與細胞周期調控，當細胞DNA損害時，P53蛋白激活P21基因表達，并與細胞周期蛋白結合形成復合體，抑制依賴細胞周期蛋白的激酶活性，阻止CDKs對Rb蛋白的磷酸化，使細胞修復損傷、恢復正常，常被稱為“基因衛士”〔7〕。

相關研究顯示，P53的表達強度與宮頸慢性炎癥、宮頸上皮內瘤變及宮頸鱗狀細胞癌有關，兩者在組織中表達的陽性單位對于區分宮頸炎性病變和上皮內瘤變，區分低級別和高級別上皮內瘤變，包括CINI和CINⅡ的區分，以及對于治療方案的擬定均具有重要價值〔8〕。本實驗結果提示，P53蛋白陽性表達與癌組織學類型、浸潤深度、分化程度有關。

p53基因可分為野生型和突變型，前者為抑癌基因，后者為致癌基因，p53陽性率一般會隨著臨床期別增高和細胞分化程度變低而增高。Paquette等〔9〕研究發現P53基因功能的失活在宮頸癌發生中的作用異常顯著，并認為宮頸癌約97%存在人乳頭瘤病毒(HPV)感染。馮麗莉等〔10〕認為P53的過表達與宮頸癌的發生發展有關，其可作為宮頸癌早期診斷的有效指標；本實驗結果與上述文獻結果一致。

p53屬于抑癌基因，正常情況下，p53基因外顯子的核酸序列十分穩定，一旦發生改變即屬于異常情況。其在宮頸病變發生、發展中的相關性研究已有文獻報道，因此對p53基因的檢測有利于癌癥的早發現、早診斷、早治療。

4參考文獻

1SoyoolaE0，PattiloRA.PTEN/MMACImutationscorrelateinverselywithanalteredp53tumorsuppressorgeneingynecologictumors〔J〕.AmJObstetGynecol，2003；188(4)：S33-6.

2YoonaCH，LeeDS，LimbDS，et al.PKR，ap53targetgene，playsacrucialroleinthetumor-suppressorfunctionofp53〔J〕.ProcNatlAcadSciUSA，2009；106(19)：7852-7.

3林曉亮，姜云波，趙倩，等.攜帶p53AIP1基因的重組復制缺陷型腺病毒載體的構建、鑒定及其在人宮頸癌細胞系HeLa中的表達〔J〕.細胞與分子免疫學雜志，2013;29(10)：1082-6.

4JiangY，ChenH，JiaH，et al.AdenovirusAd-p53AIP1-mediatedgenetherapyanditsregulationofp53-MDM2interactions〔J〕.ExpTherMed，2010;1(2)：363-8.

5羅遠材，郭路.P53對蛋白激酶R和宮頸癌HeLa細胞生物學行為的影響〔J〕.天津醫藥，2014;42(12)：1168-7.

6樓朝霞，梅麗娜.宮頸癌組織中突變型p53基因的表達及其臨床意義〔J〕.海南醫學，2013;24(9)：1272-4.

7Ruttkay-NedeckyB，Jimenez-JimenezAM，NejdlL，et al.Relevanceofinfectionwithhumanpapillomavirus：theroleofthep53tumorsuppressorproteinandE6/E7zincfingerproteins(Review)〔J〕.IntJOncol，2013;43(6)：1754-62.

8羅瓊，邵少慰，劉曙光，等.宮頸病變Ki67和P53表達的定量分析及其臨床意義〔J〕.中國體視學與圖像分析，2013;18(3)：282-8.

9PaquetteRL，LeeYY，WilczynskiSP，et al.Mutationsofp53andhumanpapillomavirusinfectionincervicalcarcinoma〔J〕.Cancer，1993;72(4)：1272-80.

10馮麗莉，楊毓琴.p53蛋白在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達〔J〕.中國婦幼健康研究，2006;17(4)：260-2.

〔2015-03-21修回〕

(編輯袁左鳴)