陳舊性鞭蟲封片標本的制作及其形態學觀察

齊莉莉，王 賀，梁文章，楊 帆，喬紅秀，張 楠

（1.河北醫科大學基礎醫學院病原生物學教研室，河北石家莊050017；2.河北中醫學院中西醫結合學院診斷學教研室，河北石家莊050200）

陳舊性鞭蟲封片標本的制作及其形態學觀察

齊莉莉1，王 賀1，梁文章1，楊 帆1，喬紅秀2，張 楠2

（1.河北醫科大學基礎醫學院病原生物學教研室，河北石家莊050017；2.河北中醫學院中西醫結合學院診斷學教研室，河北石家莊050200）

鞭蟲屬；標本制備；醫學檢驗科學

寄生蟲是一類致病性的低等真核生物，其所致寄生蟲病發病率和病死率均很高，嚴重影響著人類的健康，并制約著國家經濟和社會的發展［1］。由于寄生蟲病的發病率已被認定為衡量一個地區社會經濟文化發展的基本指標之一，所以我國自新中國成立之初，即開展了寄生蟲病的普查和防治工作，效果顯著。經過50多年的防治，至2008年底全國有血吸蟲流行的12個省市區中5個已阻斷傳播，全國血吸蟲病病例數已經降至41.3萬；2007年經過世界衛生組織審核認可，中國成為全球第一個宣布消除絲蟲病的國家；我國計劃在2015年達到血吸蟲病的傳播控制或者傳播阻斷標準［2］。幾種重大寄生蟲病在我國得到了較大程度的控制，人體寄生蟲的感染率日趨下降，寄生蟲標本的采集就變得較為困難。而目前，各醫學院校不斷擴大招生規模，導致寄生蟲學教研室用于實驗教學的封片標本短缺現象日趨明顯，亟待補充。為解決這一矛盾，作者試圖用陳舊的寄生蟲大體標本作為制備封片標本的來源，現將保存于10%甲醛液中十余年的鞭蟲，制備成永久性封片的過程和效果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 河北醫科大學寄生蟲教學研室保存的鞭蟲大體標本。

1.2 方法 軟化，取出固定于10%甲醛液中多年的鞭蟲，用蒸餾水沖洗數次后，放入甘油生理鹽水液中浸泡24 h；整壓，用細線扎牢蟲體兩端，蟲體前半部分重壓，再放入生理鹽水中繼續浸泡24 h；染色，將蟲體松綁，并用昆蟲針在蟲體表面不同部位扎數個小孔，再用蒸餾水反復沖洗，依次移至50%、60%、70%酒精中各30 min后，放入卡紅染液中染色12 h，取出蟲體放入1%鹽酸酒精中退色4～6 h，直至蟲體外觀呈粉紅色為止；脫水，依次經80%、90%、95%、100%酒精，無水酒精與二甲苯1∶1溶液，脫水30 min；透明，放置于二甲苯培液中，透明10 min；封片，用中性樹膠封片并加蓋蓋玻片，顯微鏡下觀察。

2 結 果

經過軟化、整壓、染色、脫水及封存標本，蟲體平整，樹膠薄厚適度，外表美觀，呈粉紅色。低倍鏡下觀察蟲體形似馬鞭，前端細長，約占蟲體長的3／5，后端明顯粗大。表皮層無色透明，而內部器官顏色鮮艷，結構清晰。可見到細長的咽管、包繞于咽管外的桿狀體（即呈串珠狀排列的桿細胞組成），消化管與生殖器官清晰可見且易于區分（圖1～3）。

圖1 毛首鞭形線蟲部分咽管（×100）

圖2 毛首鞭形線蟲部分消化系統和生殖系統（×100）

圖3 毛首鞭形線蟲尾部（×100）

3 討 論

通常我們采用新鮮蟲體制作封片標本［3］，經過迅速清洗、整壓、固定、染色、脫水透明和封存等一系列制備過程。新鮮標本組織具有彈性和韌性，在整壓過程中，不易損壞蟲體原有的形態結構，可以把所要觀察某些結構特征調整到理想狀態，蟲體也易于染色和脫水。而經過甲醛液體固定的標本則不同。

一般情況下，寄生蟲大體標本保存于10%甲醛固定液內，因甲醛是一種易變性、滲透力極強的還原劑，可使組織硬化，固定時間越久者越為明顯。鞭蟲雌蟲長35～50 mm，雄蟲長30～45 mm，是一種較小的線蟲，其前端細后端較粗，保存在甲醛中過久，蟲體變得既硬且脆，尤其是由細長的咽管構成的蟲體前端，極易折斷。

在最初制作陳舊性鞭蟲封片標本時，沒有經過長時間浸泡、軟化及整壓，即直接進行染色，其結果往往出現脫水不徹底，蟲體內部結構模糊的現象，多見于蟲體前端。分析原因：①可能與鞭蟲自身形態結構有關；②可能是因蟲體沒有經過整壓，進而影響液體交換；③經脫水、透明后蟲體變得更硬；④封片時，因蟲體不平整而使得樹膠過厚，影響觀察效果。經過多次試驗，對于陳舊性蟲體進行永久性封片標本制作時，需要經過一定時間的浸泡，徹底清除甲醛殘留物，并在浸泡液中加入適量的甘油，使得蟲體組織充分軟化，不僅易于整壓，且易于染色和脫水，可收到與新鮮標本同樣的效果。

人體寄生蟲學屬于病原生物學，是以形態學為主的醫學專業基礎課程，它是醫學生從基礎課學習過渡到臨床課學習的橋梁課程［4］，是一門理論和實踐聯系緊密的學科［5］。目前，傳統的寄生蟲學實驗教學主要通過觀察大體標本和封片標本識別寄生蟲的形態結構，以加深和鞏固課堂所學內容。利用本研究的試驗方法可以及時有效地準備足夠的封片標本，保證教學所需，同時可為學校節約購置標本的費用，一舉兩得。

［1］ 高興鄭.醫學寄生蟲學［M］.3版.北京：北京大學醫學出版社，2008：3.

［2］ 沈繼龍，張進順.臨床寄生蟲學檢驗［M］.3版.北京：人民衛生出版社，2012：2－15.

［3］ Ritchie AE.Simplified specimen preparation for electron microscopic studies of an intra-erythrocytic parasite，Anaplasma marginale［J］.Proc Soc Exp Biol Med，1962，110：532－545.

［4］ 楊樹國，李靜霞.談人體寄生蟲學實驗教學的整合與創新［J］.中國熱帶醫學，2009，9（6）：1176－1177.

［5］ 馬艷，汪琦，李娟蘭，等.人體寄生蟲學開放性實驗教學初探［J］.山西醫科大學學報：基礎醫學教育版，2010，12（2）：161－163.

（本文編輯：許卓文）

R383.14

B

1007-3205（2015）01-0097-03

2014－05－15；

2014－05－30

齊莉莉（1983－），女，河北保定人，河北醫科大學基礎醫學院初級實驗師，醫學碩士，從事法醫昆蟲學研究。

10.3969／j.issn.1007-3205.2015.01.038