腫瘤患者紅細胞的血紅蛋白釋放實驗初步研究

韓麗紅閆 斌高麗君秦良誼秦文斌*

（1 包頭醫學院血紅蛋白研究室，內蒙古 包頭 014010；2 包頭醫學院第一附屬醫院普外二科，內蒙古 包頭 014010）

腫瘤患者紅細胞的血紅蛋白釋放實驗初步研究

韓麗紅1閆 斌2高麗君1秦良誼1秦文斌1*

（1 包頭醫學院血紅蛋白研究室，內蒙古 包頭 014010；2 包頭醫學院第一附屬醫院普外二科，內蒙古 包頭 014010）

目的在已建立“血紅蛋白釋放試驗HRT”的基礎上，研究腫瘤患者的HRT情況。方法同時比較研究全血中紅細胞和從中分離出來紅細胞的HRT（簡稱“兩種紅細胞的HRT”），做淀粉-瓊脂糖混合凝膠電泳。第1次電泳后停電一段時間，再進行第2次或更多次電泳。觀察紅細胞中血紅蛋白的釋放情況，同時加入了定量因素。結果各種腫瘤標本都有“兩種紅細胞的HRT”，梯帶強度可有不同。本次標本中，游離紅細胞梯帶相對最強的是肝癌、胰腺癌、胃癌，最弱的是鼻咽癌、甲狀腺癌、皮膚癌。全血紅細胞的梯帶強度普遍較弱，變化相對較小。結論腫瘤患者標本中的血漿因素可能影響全血中紅細胞的梯帶釋放。不同腫瘤其血漿因素可能不一樣，具體機制有待深入研究。

腫瘤；血紅蛋白釋放試驗/HRT；紅細胞

2007年，本研究組在研究1例輕型β-地中海貧血病例的紅細胞電泳過程中偶然發現，該患者紅細胞第1次電泳后，比正常人紅細胞電泳原點殘留有更多的紅色物質（加樣量相等）；在停電一段時間后再次電泳，該患者標本從原點電泳出來紅色物質（后經證實為血紅蛋白）比正常成人的多許多：連續多次停電再通電后，輕型β-地中海貧血患者紅細胞釋放多條血紅蛋白區帶（稱梯狀帶或竹節帶）。在停電一段時間后再次電泳，該患者標本從原點釋放出較多的血紅蛋白，從而開始創建血紅蛋白釋放試驗（HRT）[1]。在這一現象的啟示之下，我們開始研究其他臨床標本的血紅蛋白釋放情況。我們建立HRT，發現地中海貧血時梯帶釋放增強[2]，現在想看腫瘤患者與正常對照之間紅細胞膜或紅細胞內血紅蛋白存在狀態的差異，同時探討其機制和意義。

1 材料與方法

1.1 材料：全部腫瘤患者血液都來自包頭醫學院第一附屬醫院，抗凝劑有肝素、EDTA和檸檬酸鹽。

1.2 方法

1.2.1 HRT：兩種紅細胞的HRT（兩種紅細胞的雙向梯帶電泳）。第一向：用患者的全血或由此全血分離出來的紅細胞，分別做淀粉-瓊脂糖混合凝膠電泳[1-2]，電勢梯度6 V/cm，通電15 min、停電15 min，交替進行，共3 h。第二向：到時轉90°，電勢梯度6 V/cm，通電1.5 h，中間不停電。染色：先染麗春紅，再染聯苯胺，此時血紅蛋白呈藍黑色，其他蛋白顯紅色。

1.2.2 梯帶定量：使用BAND SCAN軟件，每個麗春紅標本都掃描定量梯帶中血紅蛋白A2右上方的第一個血紅蛋白區帶（Hb1），以及血紅蛋白A2右下方的CA（碳酸酐酶）區帶，計算：Hb1/CA=梯帶強度。游離紅細胞梯帶強度測定值=X，全血紅細胞梯帶強度測定值=Y，二者比值Z=X/Y。

2 結 果

2.1 HRT圖例：見圖1～圖2。

2.2 一些癌癥HRT定量結果：見表1。

表1 一些癌癥HRT定量結果

圖1 皮膚癌

圖2 膽管癌

3 討 論

HRT的建立開始于地中海貧血的檢測，后來研究過普通外科患者血液標本，尿毒癥、高血糖與血液流變學的關系[1-8]，本文開始研究癌癥患者紅細胞的血紅蛋白釋放情況。現在看來，各種癌癥的血液標本都有再釋放，但程度不盡相同，而且每個標本的兩種紅細胞的梯帶關系也有差異。在游離紅細胞方面（參見附表中的X），梯帶最強的是肝癌、胰腺癌、肺癌、胃癌等，最弱的是鼻咽癌、甲狀腺癌、皮膚癌等。在全血紅細胞的梯帶釋放普遍較弱（參見附表中的Y），這說明血液標本中的血漿成分對其中紅細胞的再釋放有抑制作用，但抑制程度也不盡相同（參見附表中的Z），例如，膽管癌的抑制程度不大，直腸癌肝轉移及肝癌抑制較大，皮膚癌抑制最大。梯帶抑制程度的大小與血漿成分有關，血漿中成分很多，什么成分影響紅細胞再釋放，這是一個新的有趣的大課題，研究繼續進行中[9-11]。

[1]秦文斌,高麗君,蘇燕,等.血紅蛋白釋放試驗與輕β-地中海貧血[J].包頭醫學院學報, 2007,23(6):561-563.

[2]Su Y,Shao G,Gao LJ,et al.RBC electrophoresis with discontinuous power supply – a newly established hemoglobin release test[J]. Electrophoresis,2009,30(6):3041-3043.

[3]韓麗紅,閆斌,高雅瓊,等.普通外科患者血紅蛋白釋放試驗的比較研究[J].臨床和實驗醫學雜志,2009,8(7):67-69.

[4]高雅瓊,王彩麗,高麗君,等.尿毒癥患者低滲血紅蛋白釋放試驗的初步結果[J].臨床和實驗醫學雜志,2010,9(1):12-13.

[5]張曉燕,高麗君,高雅瓊,等.血糖濃度和血紅蛋白釋放試驗的比對研究[J].國際檢驗醫學雜志,2010,31(6):524-525.

[6]王翠峰,高麗君,烏蘭,等.血紅蛋白釋放試驗與血液流變學檢測結果相關性的研究[J].中國醫藥導報,2010,7(4):64-66.

[7]寶勿仁必力格,王翠峰,高麗君,等.肝硬化患者血紅蛋白釋放試驗明顯異常[J].臨床和實驗醫學雜志,2011,10(24):1915-1917.

[8]Su Y,Shen J,Gao LJ,et al.Molecular interaction of re-released proteins in electrophoesis of human erythrocytes[J].Electrophoresis, 2012,33(9/10):1042-1045.

[9]Su Y,Gao LJ,Ma Q,et al.Interactions of hemoglobin in lived red blood cells measured by the electrophoesis release test[J].Electropho resis,2010,31(17):2913-2920.

[10]秦文斌.活體紅細胞內血紅蛋白的電泳釋放[J].中國科學-生命科學,2011,41(8):597-607.

[11]Su Y,Gao LJ,Qin WB.Interactions of hemoglobin in lived red blood cells measured by the electrophoesis release test[J].Methods Mol Biol,2012,869(3):393-402.

The Experimental Study of Hemoglobin Release Test in Different Cancer Patients

HAN Li-hong1, YAN Bin2, GAO Li-jun1, QIN Liang-yi1, QIN Wen-bin1*
(1 Department of Hemoglobin Laboratory, Baotou Medical College, Baotou 014010, China; 2 General Surgery, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Baotou 014010, China)

ObjectiveTo study the hemoglobin release test in different cancer patients on the basis of hemoglobin release test.MethodsComparative study of red blood cells in whole blood and extracted from red cell HRT(referred to as the "two red cell HRT")was carried out with starch-agarose mixed gel electrophoresis. After first run of electrophoresis, the power was cut down for a while, the second run of electrophoresis was then performed. Observe the release of hemoglobin in red blood cells with the quantitative factors.ResultsThere are "two red cell HRT" in all tumors, and maybe have different ladder intensity. The ladder intensity of free erythrocyte in liver cancer, pancreatic cancer, gastric cancer and nasopharyngeal carcinoma are strongest. The weakest is thyroid cancer, skin cancer. The ladder intensity of red blood cells is generally weak, and has small changes.ConclusionThere are some plasma factor specimens in cancer patients affect red cells in blood ladder release. Different tumor plasma factors may not be the same, the mechanism need to be further studied.

Cancer; Hemoglobin release test/HRT; Red blood cell

R446.1；R446

B

1671-8194（2015）08-0012-02

*通訊作者