糖尿病大鼠坐骨神經cAMP、cGMP與微循環相關性及益氣活血通絡中藥的干預作用

糖尿病大鼠坐骨神經cAMP、cGMP與微循環相關性及益氣活血通絡中藥的干預作用

趙蕓蕓張文風王秀閣1

(長春中醫藥大學，吉林長春130117)

摘要〔〕目的觀察糖尿病(DM)大鼠坐骨神經環磷酸腺苷(cAMP)、環磷酸鳥苷(cGMP)與微循環相關性及益氣活血通絡方的干預作用。方法采用鏈脲佐菌素復制DM大鼠模型，并隨機分為模型組、中藥組、彌可保組，同時設正常對照組。觀察益氣活血通絡中藥對大鼠血液流變學、坐骨神經cAMP、cGMP含量的影響。結果DM大鼠血液流變學、坐骨神經cAMP、cGMP含量均發生改變，益氣活血通絡方藥對二者有明顯改善作用。結論DM大鼠血液流變學與坐骨神經改變cAMP、cGMP含量具有相關性，益氣活血通絡中藥通過對二者的改善從而防治DM周圍神經病變。

關鍵詞〔〕糖尿病；血液流變學；cAMP、cGMP；益氣活血通絡方

中圖分類號〔〕R285.5〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：吉林省科技發展計劃項目(No.20140311001YY)；長春市科技計劃項目(No.2013374)

通訊作者：張文風(1970-)，女，博士后，教授，碩士生導師，主要從事中藥復方的配伍及機制研究。

1長春中醫藥大學附屬醫院

第一作者：趙蕓蕓(1992-)，女，在讀本科，主要從事中藥復方的配伍及機制研究。

血液流變學是糖尿病(DM)診斷、治療、療效觀察的客觀指標之一〔1〕，其異常變化對DM的慢性并發癥發生及發展影響較大。以往研究表明，益氣活血通絡方可以降低DM大鼠血糖、提高其體重、坐骨神經傳導速度、改善血清胰島素、C肽以及抑制細胞凋亡等作用〔2～8〕。本文探究DM大鼠血液流變性與坐骨神經環磷酸腺苷(cAMP)、環磷酸鳥苷(cGMP)含量相關性及其作用，旨在揭示中藥復方的作用機制。

1材料與方法

1.1模型的建立雄性健康Wistar大鼠，體重(240±20)g。適應性飼喂1 w后，禁食12 h，將鏈脲佐菌素臨用配成2%濃度溶液，按劑量50 mg/kg左下腹腔內單次注射，72 h后取尾血測血糖，血糖≥16.7 mmol/L作為DM大鼠。適應性喂養3 d后將成模大鼠隨機分為模型組、中藥組、彌可保組各10只。并取體重、鼠齡相匹配的同批血糖值在正常范圍內正常大鼠10只作為正常對照組。連續觀察8 w后處死。由于高血糖及并發感染，模型組死亡3只，彌可保組死亡2只，中藥組死亡1只。

1.2實驗設備AnkeTDL-5-A型離心機(上海醫療器械有限公司)，GC-911-r-放射免疫計數器(中國科技大學實業總公司)，FASCO-3010全自動血液流變快測儀(重慶大學維多生物工程研究所)。

1.3藥品及試劑益氣活血通絡方組成藥物(黃芪、桂枝、生地、水蛭)均購于長春市同仁堂藥房，長春中醫藥大學王淑敏教授鑒定，煎制成2 g/ml，置4℃冰箱保存備用。cAMP、cGMP放射免疫分析藥盒(北京北方生物技術研究所，批號121020、121026)。

1.4血液流變學檢測大鼠麻醉后，腹主動脈取血，肝素抗凝，應用FASCO-3010全自動血液流變快測儀測定。

1.5大鼠坐骨神經cAMP、cGMP檢測大鼠在麻醉狀態下，切開雙側股后部皮膚，分離出雙側坐骨神經。剪下后快速放入干冰中保存。在冰浴環境下，將坐骨神經放入盛有2 ml冷的0.05 mol/L醋酸緩沖液(pH 4.75)的勻漿器內，將組織粉碎后，懸浮液倒入10 ml試管內，用2 ml無水乙醇洗勻漿器，然后將乙醇倒入懸浮液中混勻，靜止5 min，3 500 r/min離心15 min，將上清液收集在小瓶內，用2 ml 75%乙醇洗勻漿器和沉淀2次，混勻，3 500 r/min離心15 min，合并上清液，60℃水浴中吹干，殘渣放于4℃保存。嚴格按照試劑測定盒的要求檢測。

1.6統計學方法選用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析和q檢驗。

2結果

2.1各組大鼠血液流變學變化與正常對照組相比，模型組、中藥組、彌可保組大鼠全血度、紅細胞聚集指數及剛性指數明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，中藥組顯著差異，而彌可保組沒有顯著差異，見表1。

2.2各組大鼠坐骨神經cAMP、cGMP含量的變化與模型組相比，中藥組動物的cAMP、cGMP含量明顯升高(P<0.05)；中藥組與彌可保組相比無顯著差異(P>0.05)，見表1。

表1　各組大鼠血液流變學及CAMP、CGMP變化的比較

與正常對照組比較：1)P<0.01，2)P<0.05；與模型組比較:3)P<0.01，4)P<0.05

3討論

DM存在著不同程度的血液流變學改變。研究表明，DPN時神經血流灌注減少且神經內膜缺氧，神經微血管也有不同程度的病變發生，這些異常變化的程度與神經病理變化和臨床癥狀程度極為相關。

cAMP、cGMP廣泛存在于動物機體的各種組織中。cAMP具有各種調節功能，神經組織中cAMP、cGMP含量下降的同時，Na+-K+-ATP酶的活性也降低，將影響神經的正常動作電位，使神經傳導速度減慢。cGMP信號的產生是鳥苷酸環化酶(GC)催化的，其中的一類胞內可溶性環化酶與NO的傳導有關，NO有使血管舒張的作用〔9〕。

益氣活血通絡方由黃芪、水蛭、葛根、生地組成。研究表明，黃芪可擴張血管，改善血行增強機體免疫力；水蛭可抗血栓形成、抗凝血、降血脂、改善血液流變學和微循環；葛根可改善微循環、擴張血管、增加血流、提高局部血流量。本研究結果表明，DM大鼠血液流變性及坐骨神經cAMP、cGMP含量變化。血液流變性改變表現為血黏度升高，紅細胞聚集指數及剛性指數發生變化。血液流變性變化的同時伴隨神經組織中cAMP、cGMP含量降低，證實了二者的相關性。

益氣活血通絡方能改善DM大鼠血液流變性，升高神經組織中cAMP、cGMP含量，可能是其促進神經軸突的再生和修復的作用及機制之一。

4參考文獻

1苗述楷，蔡惠文.糖尿病并發癥防治學〔M〕.北京：中國醫藥科技出版社，2000：4.

2張文風.益氣活血通絡法對糖尿病大鼠血清胰島素、C肽的影響〔J〕.湖南中醫雜志，2008；24(6)：98-9.

3張文風.益氣活血通絡法防治糖尿病周圍神經病變的實驗研究〔J〕.中醫藥信息，2008；6：24-5.

4張文風，蘇鑫，粟栗.糖尿病大鼠坐骨神經AGEs的表達及益氣活血通絡方的干預研究〔J〕.上海中醫藥雜志，2010；44(3)：25-6.

5張文風，樸今哲，蘇鑫，等.從血液流變學和神經傳導速度評價益氣活血通絡法對糖尿病周圍神經病變的干預作用〔J〕.時珍國醫國藥，2010；21(2)：686-8.

6李鐵成，張文風.糖尿病大鼠坐骨神經傳導速度與其超微結構的相關性及益氣活血通絡中藥的干預研究〔J〕.時珍國醫國藥，2010；21(7)：1657-9.

7張文風，鐘慧群，汪勤.糖尿病大鼠坐骨神經細胞凋亡及其調控基因的表達及益氣活血通絡方的干預研究〔J〕.時珍國醫國藥，2011；22(4)：1121-3.

8鐘慧群，張文風，蘇鑫，等.糖尿病大鼠糖化血清蛋白與AGES的相關性及中藥的干預作用〔J〕.時珍國醫國藥，2011；22(6)：1453-5.

9孫大業.細胞信號傳導〔M〕.第3版.北京：科技出版社，2003：124.

〔2014-10-17修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)