葡萄酒中幾種防腐劑的固相萃取離子色譜測定法

2015-12-24 03:30:12解彥平胡平何燕郭愛靜

應用化工 2015年9期

解彥平，胡平，何燕，郭愛靜

(石家莊市疾病預防控制中心，河北石家莊 050000)

食品添加劑的濫用已經成為食品安全的重要威脅。我國國家標準GB 15037—2006《葡萄酒》規定:葡萄酒中不得添加合成著色劑、甜味素、香精、增稠劑，同時對防腐劑也有明確限制。葡萄酒中常見的防腐劑有苯甲酸鈉、山梨酸、亞硝酸鹽和二氧化硫［1-2］。幾乎所有種類的葡萄酒都含有一定量的亞硝酸鹽，它的含量對人體也產生重要的影響;SO2作為細菌抑制劑和抗氧化劑對葡萄酒的釀制有很大作用，但SO2含量過高，飲用后會對人體造成傷害［3-4］;檸檬酸通常被用來增加葡萄酒的酸度［5-6］，用量不當影響口感。因此，葡萄酒中的添加劑含量一直屬于葡萄酒檢測中監控的項目。

目前，國內葡萄酒中添加劑的檢測，主要借鑒和使用飲料或配制酒的檢驗方法［7-8］。但是，由于葡萄酒的化學成分遠比配制酒復雜，利用配制酒檢驗中的高效液相色譜(HPLC)法檢測葡萄酒中的合成色素、防腐劑和甜味劑往往導致檢測誤差偏大、靈敏度下降。

本文采用自動淋洗-電導抑制離子色譜法，離子交換固相萃取柱凈化，操作簡便、快速，精密度和準確度均符合要求，可實現多組分同時分析，節約成本，提高效率。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

二氧化硫標準(環境保護部標準樣品研究所，GSB 07-1273—2000，濃度為100 μg/mL);山梨酸標準物質溶液(GBW(E)100007，國家標準物質中心，濃度為1 000 μg/mL);苯甲酸標準物質溶液(GBW(E)100006，國家標準物質中心，濃度為1 000 μg/mL);亞硝酸鹽標準物質溶液(GSB 05-1142—2000，環境保護部標準樣品研究所，濃度100 mg/L);檸檬酸(99.5%);甲醇，色譜純;實驗用水均為超純去離子水。

ICS-2000 型離子色譜儀:EG50 淋洗液發生器;AS50 自動進樣器;ASRSⅡ4 mm 陰離子抑制器;電導檢測器;Chromeleon 6.5 色譜工作站;T-460/H 微波超聲振蕩器;SiGM2-16 希格瑪離心機;Advantage A10 型超純水機;0. 22 μm 微孔濾膜;DIONEX On GuardⅡP、On GuardⅡRP 固相萃取柱。

1.2 色譜條件

色譜柱為IonPacAS Ⅱ-HC 型陰離子分析柱(4.0 mm×250 mm)，IonPacAGⅡ-HC 型陰離子保護柱(4.0 mm×50 mm)，抑制器ASRS(4 mm)，抑制器電流65 mA，淋洗液為26 mmol/L 的KOH 溶液，流速1.0 mL/min，進樣體積25 μL，柱溫30 ℃。

1.3 實驗方法

1.3.1 固相萃取柱準備［9］分別用10 mL 甲醇和活化10 mL 的水DIONEX On GuardⅡRP 柱和On Guard ⅡP 前處理柱，活化過程中注意控制流速，甲醇和水逐滴滴下，使固相萃取小柱充分活化，將小柱平放20 min，備用。

1.3.2 樣品測定量取一定量葡萄酒樣品于錐形瓶中，加入超純去離子水，稀釋一定的倍數，于微波超聲振蕩器上常溫振蕩10 min，以3 000 r/min 離心5 min。取上清液，經0.22 μm 微孔濾膜過濾。過相連接的DIONEX On GuardⅡP、On GuardⅡRP 固相萃取柱，控制同樣的滴速，棄去前3 mL 濾液，剩余2 mL濾液直接進樣進行測定。同時做空白實驗。

2 結果與討論

2.1 取樣量的選擇

葡萄酒中幾種防腐劑的含量不均，為了達到好的檢出效果，取樣量很關鍵。取樣量大，樣品前處理困難，由于前處理所用的固相萃取小柱柱容量一定，當待測樣品中各種成分含量均高時，會影響分離效果和降低柱效;取樣量小，待測組分含量過低，影響檢測的準確性。經過多次實驗，最終選擇取樣量為5.0 mL 適宜。

2.2 葡萄酒樣品前處理

葡萄酒樣品成分復雜，含有較多的色素和糖類，這些多羥基或酚基弱酸物質在強堿性的KOH 淋洗體系中能部分或完全電離，強吸附于保護柱和分離柱，嚴重影響色譜柱的柱效和壽命，因此選擇合適的前處理方法。蛋白質、樹脂、聚合物、色素都使酒具有膠體溶液的性質，同時也是酒中的不穩定因素，為了改善定性定量的準確性和重復性，選用基質為二乙烯基苯高聚物的OnGuardⅡ固相萃取柱，可選擇性吸附樣品基體中的疏水性化合物，實現樣品的有效凈化。RP 柱還起到過濾作用，稍渾濁或有少量雜質的樣品，過柱后樣液更清澈，有利于樣品分析和色譜柱保護［10］。

2.3 淋洗液條件的選擇

為了使幾種組分能很好的分離，采用梯度洗脫，但由于背景電導高，使方法的檢出限大大增高。所以改為等度洗脫，分別用15，20，26，35 mmo/L 濃度淋洗液進行等度淋洗，結果顯示，15，20 mmo/L KOH條件下標準品出峰時間較慢，用35 mmo/L KOH 進行等度洗脫，各峰之間的分離度不佳。用26 mmo/L KOH 濃度洗滌，基線漂移小，保留時間穩定性高，色譜峰分離度好，峰形對稱，重現性優，分析時間短。