紫外分光光度法檢測(cè)桂葉、桂葉渣總黃酮研究

李軍集，周麗珠，陳海燕，梁忠云，李桂珍，梁偉忠

(1.廣西林業(yè)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530002;2.國(guó)家林業(yè)局八角肉桂工程技術(shù)研究中心，廣西 南寧 530002;3.廣西特色經(jīng)濟(jì)林培育與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530002;4.廣西京桂香料有限公司，廣西 藤縣 543300)

肉桂(Cinnamomum cassia presl)又名玉桂，系樟科樟屬，常綠喬木，是一種珍貴的藥材，我國(guó)肉桂產(chǎn)量占世界肉桂產(chǎn)量的80%以上，廣西是全國(guó)最大的肉桂產(chǎn)區(qū)，而廣東、廣西兩省肉桂產(chǎn)量占我國(guó)肉桂產(chǎn)量的95%以上［1-2］。肉桂富含黃酮類(lèi)化合物，大量研究表明，黃酮類(lèi)化合物具有治療心腦血管疾病、抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、降低血糖、降血脂及血壓、抗氧化自由基活性等生物活性［3-7］。

目前，肉桂皮主要作為香料食材、藥材使用，肉桂葉主要用于肉桂油的提取。提取精油后的桂皮渣及桂葉渣基本當(dāng)作燃料或直接遺棄，對(duì)桂皮渣的利用和研究有少量相關(guān)報(bào)道［8-9］。

本文用乙醇提取肉桂枝葉及桂葉渣中的黃酮類(lèi)化合物，采用紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)提取液中的黃酮含量，為肉桂相關(guān)生產(chǎn)剩余物的綜合利用，為更好地開(kāi)發(fā)這一天然特色資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

肉桂枝葉、桂葉渣均來(lái)自西江流域梧州藤縣廣西京桂香料有限公司;石油醚、60%乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、三氯化鋁均為分析純;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(CASNO:153-18-4);蒸餾水。

UV-2550 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì);DF-101B 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器;TP3200 電子天平。

1.2 黃酮提取

將干燥的肉桂枝葉及桂葉渣粉碎，過(guò)50 目篩，用石油醚索氏回流脫脂、脫色4 h，溫度60 ℃，風(fēng)干密封保存。

精確稱(chēng)取5 g 脫油脂肉桂粉，乙醇回流浸提，溫度60 ℃，時(shí)間5 h，料液比1 ∶30 g/mL。冷卻、抽濾，測(cè)定濾液黃酮質(zhì)量濃度。

1.3 檢測(cè)方法

以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 作顯色劑，采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，選擇最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定各濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收值，繪制出蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出回歸方程式。測(cè)定桂葉及桂葉渣提取液的吸收值，利用回歸方程得出各提取液的黃酮含量。

1.3.1 光譜掃描圖 配制蘆丁0.1 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)品，分別稀釋至濃度0.004，0.012 mg/mL，采用紫外分光光度計(jì)在450 ～600 nm 進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 為顯色劑，結(jié)果見(jiàn)圖1，在505 nm 處有最大吸收波長(zhǎng)。

圖1 蘆丁液吸收波長(zhǎng)掃描圖Fig.1 Absorption wavelength scanning of rutin liquor

1.3. 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 用移液槍精確量取0.1 mg/mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分別置于10 mL 容量瓶中;分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 mL，搖勻后放置6 min。分別加10%硝酸鋁溶液0.30 mL，搖勻，靜置6 min。加4%氫氧化鈉溶液4.00 mL，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min。于505 nm 處測(cè)吸光度。以試劑作空白參比液。線(xiàn)性回歸，得回歸方程y =－0.56 ×10－2+9.119x，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5。

式中，x 為標(biāo)準(zhǔn)蘆丁液濃度(mg/mL)，y 為吸光度。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液在濃度為0.002 ～0.016 范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系(圖2)。

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.2 Standard curve of rutin

2 結(jié)果與討論

2.1 黃酮提取液濃度測(cè)定

分別取0. 1 mL 桂葉及桂葉渣提取液，加入NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 顯色劑，用60%乙醇定容。在505 nm 測(cè)吸光度。桂葉提取液吸光度為0.228，桂葉渣提取液吸光度為0.102，利用回歸方程求得桂葉及桂葉渣提取液濃度為2.56，1.02 mg/mL。桂葉渣黃酮類(lèi)化合物含量的降低，說(shuō)明桂葉中的黃酮類(lèi)物質(zhì)，在桂油提取工藝中，有部分被分解或溶解于蒸餾廢水中流失，造成桂葉渣中黃酮類(lèi)物質(zhì)含量變低，但依然保持一定的濃度。

本實(shí)驗(yàn)所采用的提取工藝并非最佳提取工藝，僅為表明在相同工藝條件下桂葉在水蒸氣蒸餾提取桂油后，桂葉中黃酮類(lèi)化合物含量的變化。黃酮的提取工藝有待進(jìn)一步深入研究，黃酮提取率可通過(guò)反復(fù)多次浸提濃縮或利用超臨界萃取、微波、超聲波、生物法等方法提高。本實(shí)驗(yàn)為黃酮的提取及檢測(cè)方法僅供參考，為肉桂渣的綜合開(kāi)發(fā)利用提供可靠依據(jù)。

2.2 精密度

桂葉及桂葉渣黃酮提取液重復(fù)檢測(cè)吸光值，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 桂葉檢測(cè)精密度Table 1 Cinnamon leaves detection precision

由表1 可知，桂葉黃酮提取液重復(fù)檢測(cè)5 次，吸光度平均值為0.227，RSD 為0.308%。

表2 桂葉渣檢測(cè)精密度Table 2 Cinnamon leaves residue detection precision

由表2 可知，桂葉渣黃酮提取液重復(fù)檢測(cè)5 次，吸光度平均值為0.097，RSD 為1.13%。

3 結(jié)論

采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 顯色，紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)桂葉及桂葉渣提取液中的黃酮含量。結(jié)果桂葉及桂葉渣提取液中黃酮含量分別為2.56，1.02 mg/mL。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明桂葉渣依然含有一定量的黃酮類(lèi)化合物。

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