規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟、豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果分析

（河南省諸美種豬育種集團(tuán)有限公司，河南 駐馬店 463612）

規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟、豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果分析

霍金耀，鄭逢梅

（河南省諸美種豬育種集團(tuán)有限公司，河南 駐馬店 463612）

為了解豬瘟、豬藍(lán)耳病的免疫狀況、評(píng)價(jià)免疫效果、制定合理免疫程序與防控措施。筆者于2014年分4次對(duì)某規(guī)模化豬場(chǎng)采血進(jìn)行豬瘟、豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示該場(chǎng)母豬的豬瘟、豬藍(lán)耳病抗體水平合格；產(chǎn)房仔豬豬瘟抗體水平合格，豬藍(lán)耳病抗體水平較低；保育階段豬瘟和豬藍(lán)耳病抗體水平均較低；育肥階段豬瘟抗體水平較低，豬藍(lán)耳病抗體水平偏高，且標(biāo)準(zhǔn)差大。結(jié)合該場(chǎng)免疫程序，表明仔豬的豬瘟首免日齡應(yīng)根據(jù)抗體消長(zhǎng)情況推遲，同時(shí)應(yīng)考慮對(duì)仔豬免疫豬藍(lán)耳病疫苗。

豬瘟抗體；豬藍(lán)耳病抗體；檢測(cè)分析

疫苗接種是規(guī)模化豬場(chǎng)預(yù)防和控制重大傳染病的重要途徑，特別是不同的豬場(chǎng)需要制定一套因地制宜、切實(shí)可行的免疫程序以及免疫評(píng)價(jià)系統(tǒng)。免疫監(jiān)測(cè)是為了監(jiān)測(cè)接種豬群的免疫效果，并根據(jù)免疫效果合理地調(diào)整免疫接種方案，是指導(dǎo)與制定免疫程序的重要參考依據(jù)。豬瘟、豬藍(lán)耳病是當(dāng)前危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重大傳染病，嚴(yán)重影響著規(guī)模化豬場(chǎng)的豬群健康與成績(jī)。為了監(jiān)測(cè)某規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟、豬藍(lán)耳病的抗體水平，掌握豬場(chǎng)流行病學(xué)動(dòng)態(tài)及免疫效果，每季度抽取該豬場(chǎng)血樣120份左右，進(jìn)行豬瘟、豬藍(lán)耳病的抗體水平檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源及主要試劑和儀器

2014年3、6、9、12月對(duì)某規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行抽樣調(diào)查，每頭采取血樣5 mL，每次采集血樣120份左右。

豬瘟、豬藍(lán)耳病抗體ELISA檢測(cè)試劑盒均為美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品。酶標(biāo)儀、移液器、臺(tái)式離心機(jī)（凱達(dá)TGL-16）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 組別分群 該場(chǎng)為養(yǎng)豬一條龍模式生產(chǎn)線(xiàn)，按照豬群所在區(qū)域人為劃分為產(chǎn)房階段、保育階段、育肥階段；母豬群劃分為后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬。

1.2.2 血樣采集 前腔靜脈采血，標(biāo)記后置于30～37 ℃孵育30 min，待血液凝固、血清析出，帶回實(shí)驗(yàn)室分離血清。

1.2.3 血清制備 將帶回的一次性采

血注射器室溫靜置30 min后，將析出的血清分別放入對(duì)應(yīng)編號(hào)的滅菌EP管中，分組編號(hào)，冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 豬瘟、豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)方法與結(jié)果判定 按照豬瘟、豬藍(lán)耳病ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行抗體檢測(cè)與結(jié)果判定，豬瘟抗體結(jié)果為阻斷率%＞40判為陽(yáng)性，豬藍(lán)耳病抗體結(jié)果為S/P值＞0.4判為陽(yáng)性。每組設(shè)2個(gè)陰性血清對(duì)照和2個(gè)陽(yáng)性血清對(duì)照。

1.3 豬瘟、豬藍(lán)耳病免疫程序調(diào)查

對(duì)該規(guī)模化豬場(chǎng)的豬瘟、豬藍(lán)耳病免疫程序進(jìn)行調(diào)查，該場(chǎng)2014年全年免疫程序一致，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 豬瘟、豬藍(lán)耳病免疫程序

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果顯示，1、2、3季度中，均表現(xiàn)為保育豬抗體水平最低，4季度中育肥豬抗體水平最低。1、2、3季度的產(chǎn)房仔豬抗體水平較好，但是4季度的產(chǎn)房仔豬抗體水平偏低。母豬的抗體水平全年均達(dá)到90%以上的水平，但是4季度的抗體水平較前3個(gè)季度略低。

根據(jù)豬瘟抗體平均值結(jié)果，前3季度中平均值最低的為保育豬，分別為66.3、46.5和50.2，4季度中平均值最低的為育肥豬的49.4。標(biāo)準(zhǔn)差結(jié)果中，保育、育肥的標(biāo)準(zhǔn)差普遍最高，4個(gè)季度中標(biāo)準(zhǔn)差最高的階段均為育肥豬，分別是30.4、20.9、24.9、24.8。母豬的抗體平均值均處于較高水平，其中4個(gè)季度中后備母豬的標(biāo)準(zhǔn)差均明顯高于經(jīng)產(chǎn)母豬的標(biāo)準(zhǔn)差。

表2 4個(gè)季度各個(gè)階段豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

由表4可以看出，4個(gè)季度產(chǎn)房、保育階段豬藍(lán)耳病抗體的陽(yáng)性率較低，育肥、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體陽(yáng)性率高。育肥豬在四個(gè)季度中抗體陽(yáng)性率幾乎全部為100%，3、4季度后備母豬的陽(yáng)性率由1、2季度的100%下降到60%，經(jīng)產(chǎn)母豬的在前3季度的陽(yáng)性率達(dá)92%以上，4季度下降為75%。

由表5可以看出，第1季度中，豬藍(lán)耳病抗體平均值最高的為經(jīng)產(chǎn)母豬（1.9），2、3、4季度中抗體平均值最高的均為育肥豬（分別為2.0、2.0、1.6）；1、2季度中經(jīng)產(chǎn)母豬的標(biāo)準(zhǔn)差為同一時(shí)期不同階段的最高值，3、4季度中保育豬的標(biāo)準(zhǔn)差為最高值。

表3 4個(gè)季度各個(gè)階段豬瘟抗體平均值與標(biāo)準(zhǔn)差

表4 4個(gè)季度各個(gè)階段豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)果分析

3.1 豬瘟抗體結(jié)果分析

4個(gè)季度的豬瘟抗體水平總體規(guī)律相似，但是仍有一定差異，前3個(gè)季度的豬瘟抗體陽(yáng)性率最低值均在保育，產(chǎn)房階段以及母豬階段的抗體水平均較高，表示該場(chǎng)的仔豬首次免疫時(shí)間偏早，該場(chǎng)在20日齡首免豬瘟疫苗，此時(shí)產(chǎn)房階段的抗體平均值和陽(yáng)性率都處于較高水平，免疫豬瘟疫苗之后，部分疫苗毒與體內(nèi)的部分豬瘟抗體發(fā)生中和反應(yīng)，從而使體內(nèi)的豬瘟抗體水平下降。

4季度的豬瘟抗體平均值與前3個(gè)季度相比偏低，經(jīng)詢(xún)問(wèn)，該場(chǎng)9月份開(kāi)始使用與之前同一廠家不同批號(hào)的豬瘟疫苗，推測(cè)為疫苗批次質(zhì)量問(wèn)題（后經(jīng)送檢證實(shí)），9月份之后使用的疫苗抗原含量偏低，導(dǎo)致4季度母豬、產(chǎn)房仔豬的抗體水平下降。但是4季度保育豬的抗體陽(yáng)性率有所升高，同時(shí)4季度抗體陽(yáng)性率最低的則為育肥豬，推測(cè)疫苗抗原含量下降導(dǎo)致豬瘟首免時(shí)與疫苗毒中和的抗體數(shù)量也大幅度下降，從而使保育豬的抗體陽(yáng)性率升高，而豬瘟二免時(shí)由于疫苗抗原含量低，因此免疫效果不理想，育肥豬的抗體陽(yáng)性率下降。

4個(gè)季度中育肥豬的標(biāo)準(zhǔn)差均為同一時(shí)期不同階段豬群的最高值，表示育肥豬階段為豬瘟抗體最不穩(wěn)定時(shí)期，這與該場(chǎng)的實(shí)際情況有著密切關(guān)系，該場(chǎng)為種豬場(chǎng)，因挑選后備、測(cè)定后備等程序的影響，使得育肥周期偏長(zhǎng)，育肥前期豬瘟抗體水平較高，但是育肥后期豬瘟抗體逐漸消減，使得整個(gè)育肥階段的抗體水平變化較大。

3.2 豬藍(lán)耳病抗體結(jié)果分析

1季度中豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率最低值在保育階段，2、3、4季度的陽(yáng)性率最低值均在產(chǎn)房階段，這與仔豬不免疫豬藍(lán)耳病疫苗有密切關(guān)系。產(chǎn)房仔豬由于不免疫豬藍(lán)耳病疫苗，因此產(chǎn)房仔豬的抗體水平與經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平密切相關(guān)，4個(gè)季度相互對(duì)比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)產(chǎn)母豬抗體陽(yáng)性率升高時(shí)產(chǎn)房仔豬的抗體陽(yáng)性率也升高，反之亦然。

產(chǎn)房、保育、育肥3個(gè)階段的豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率基本上呈遞增趨勢(shì)（1季度產(chǎn)房陽(yáng)性率比保育略高，應(yīng)該與同一時(shí)期母豬抗體水平也最高相關(guān)），由于沒(méi)有免疫疫苗，表示保育和育肥豬藍(lán)耳病抗體的升高是野毒感染造成的。保育的抗體陽(yáng)性率升高，到育肥階段豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率均達(dá)到或接近100%，且育肥豬的抗體平均值在同一時(shí)期的不同階段中幾乎全部為最大值，表示保育階段豬群幾乎全部被豬藍(lán)耳病野毒感染。

表5 4個(gè)季度各個(gè)階段豬藍(lán)耳病抗體平均值與標(biāo)準(zhǔn)差

1、2季度母豬的豬藍(lán)耳病抗體平均值和標(biāo)準(zhǔn)差均處于較高程度，表示1、2季度母豬的豬藍(lán)耳病抗體也不太穩(wěn)定，說(shuō)明母豬群中也存在豬藍(lán)耳病野毒的感染。3、4季度母豬的抗體平均值有所下降，標(biāo)準(zhǔn)差也有所降低，表示下半年母豬群的豬藍(lán)耳病野毒活躍程度降低，抗體值與理論情況下疫苗免疫的抗體值較為接近。

4 討論

4.1 豬瘟防控策略

近年來(lái)豬瘟的發(fā)生和流行特征以慢性、非典性、溫和性、隱性等類(lèi)型為主，公豬、基礎(chǔ)母豬多表現(xiàn)為隱性感染，仔豬最容易經(jīng)過(guò)垂直傳播感染，這些感染豬都是能夠持續(xù)排毒的傳染源，同時(shí)，病豬愈后24～57 d仍有帶毒和排毒現(xiàn)象，這點(diǎn)在飼養(yǎng)管理中必須引起足夠的重視[1，2]。

該場(chǎng)全年豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定，表示疫苗免疫接種水平良好，保育豬的豬瘟抗體水平偏低，應(yīng)檢測(cè)產(chǎn)房仔豬母源抗體的消減規(guī)律，根據(jù)母源抗體的消減程度，在豬瘟抗體阻斷率40%～45%左右時(shí)進(jìn)行首免，之后，監(jiān)測(cè)首免后抗體消長(zhǎng)規(guī)律，在抗體值下降過(guò)程中，選擇抗體阻斷率在40%～45%時(shí)進(jìn)行二免。而不能一味的照搬使用傳統(tǒng)20+60日齡免疫程序，應(yīng)根據(jù)自身豬場(chǎng)的實(shí)際抗體檢測(cè)情況制定免疫程序。育肥階段由于生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，可適當(dāng)在育肥中后期加強(qiáng)免疫一次，從而使育肥后期抗體維持較高水平。

針對(duì)疫苗批次差異產(chǎn)生的影響，在購(gòu)進(jìn)疫苗前一定要對(duì)疫苗的抗原含量進(jìn)行檢測(cè)，推薦使用TCID50檢測(cè)病毒效價(jià)或者使用熒光定量RT-PCR檢測(cè)疫苗中核酸含量，選擇效價(jià)高或抗原含量高的疫苗批次。

4.2 豬藍(lán)耳病防治對(duì)策

對(duì)河南大中型、規(guī)模化豬場(chǎng)豬藍(lán)耳病感染情況調(diào)查，絕大多數(shù)豬場(chǎng)屬于豬藍(lán)耳病陽(yáng)性穩(wěn)定場(chǎng)，生產(chǎn)管理水平直接決定著豬藍(lán)耳病的防控效果[3]。豬場(chǎng)中存在豬藍(lán)耳病野毒時(shí)，豬群容易造成隱性感染且不表現(xiàn)臨床癥狀，當(dāng)感染的豬藍(lán)耳病病毒毒力較強(qiáng)或病毒活躍期以及一旦飼養(yǎng)管理失當(dāng)、飼養(yǎng)條件變化等不穩(wěn)定因素存在，極易引起豬藍(lán)耳病的暴發(fā)，因此，疫苗免疫以及配套的抗體檢測(cè)顯得尤為重要。

通過(guò)抗體檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)該場(chǎng)的保育階段為豬藍(lán)耳病最為活躍階段，因此加強(qiáng)保育階段的飼養(yǎng)管理與群防群控為該場(chǎng)防控豬藍(lán)耳病的關(guān)鍵點(diǎn)。育肥階段豬藍(lán)耳病均已感染，因此要格外注意育肥階段是否有類(lèi)似于豬藍(lán)耳病臨床癥狀出現(xiàn)，如高熱稽留、呼吸道疾病等，若有疑似豬藍(lán)耳病例應(yīng)立刻采樣進(jìn)行豬藍(lán)耳病病原檢測(cè)，同時(shí)大群投藥治療，確診為豬藍(lán)耳病后應(yīng)加強(qiáng)病豬隔離，防止傳染給健康豬只，感染豬藍(lán)耳病的豬群不再留作種用。

該場(chǎng)仔豬未免疫豬藍(lán)耳病疫苗，建議檢測(cè)產(chǎn)房、保育仔豬的母源抗體消減規(guī)律，制定合理的豬藍(lán)耳病免疫程序，主動(dòng)免疫能夠降低感染性野毒在接種動(dòng)物體內(nèi)的復(fù)制效率，減少發(fā)病病例，保護(hù)豬群健康[4，5]。

4.3 豬場(chǎng)綜合防控措施與生物安全體系建設(shè)

規(guī)模化豬場(chǎng)穩(wěn)定生產(chǎn)與持續(xù)發(fā)展是以種豬的健康穩(wěn)定為前提，豬場(chǎng)豬瘟和豬藍(lán)耳病控制的好壞直接關(guān)系到整個(gè)種豬群的健康狀況。種豬群攜帶豬瘟、豬藍(lán)耳病病毒或機(jī)體免疫受到抑制，仔豬先天性感染豬瘟或者豬藍(lán)耳病，或者仔豬得不到母源抗體的充分保護(hù)，很容易感染各種病原，成為豬場(chǎng)的隱患。

規(guī)模化豬場(chǎng)應(yīng)建立完善的衛(wèi)生防疫與生物安全體系，避免病原自外界傳入與病原在豬場(chǎng)內(nèi)部傳播是疫病防控的出發(fā)點(diǎn)與著力點(diǎn)。定期進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果及時(shí)調(diào)整免疫程序，對(duì)可疑豬隔離治療，對(duì)確診為重大傳染病豬只立刻上報(bào)疫情或無(wú)害化處理。

有條件的種豬場(chǎng)，在做好抗體檢測(cè)的同時(shí)應(yīng)做好病原檢測(cè)，尤其是種用后備公母豬引種之前以及引種后的隔離期應(yīng)該分2次逐頭檢測(cè)重大動(dòng)物疫病病原，如豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病毒、口蹄疫病毒，對(duì)病原陽(yáng)性的后備種豬應(yīng)堅(jiān)決淘汰處理，以免病毒傳染給豬場(chǎng)其他豬群，對(duì)于經(jīng)產(chǎn)母豬也應(yīng)定期采樣，檢測(cè)重大動(dòng)物疫病病原，建立健全疫病監(jiān)測(cè)監(jiān)督機(jī)制，對(duì)病原陽(yáng)性的經(jīng)產(chǎn)母豬也應(yīng)做淘汰或不做種用處理。商品豬場(chǎng)也應(yīng)該定期進(jìn)行病原檢測(cè)，了解本場(chǎng)疫病感染情況，有助于制定合理的防疫程序與防范措施，若發(fā)生疫情時(shí)也有助于采取對(duì)應(yīng)措施。

[1] 李嬌，沈志強(qiáng)，祖立闖，等.間接ELISA在豬瘟抗體檢測(cè)上的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33(6)：126-129.

[2] 劉建，湯德元，李春燕，等.我國(guó)豬瘟流行新趨勢(shì)與防控措施[J].中國(guó)豬業(yè)，2013(2)：37-39.

[3] 謝偉濤，梁躍，喬松林，等.豬場(chǎng)藍(lán)耳病檢測(cè)結(jié)果與案例分析[J].今日養(yǎng)豬業(yè)，2015(3)：72-73.

[4] 吳億春.豬繁殖與呼吸綜合征疫苗研究新進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2011，38(11)：191-194.

[5] 于桂芳，王國(guó)良，溫富勇.高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體監(jiān)測(cè)分析報(bào)告[J].當(dāng)代畜牧，2011(4)：14-15.

2015-05-20）