溶痰液在抗酸桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用及其方法學(xué)評(píng)價(jià)

吳建耀 周桂生 龔 萍 余淑芳

昆山周市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇昆山 215314

溶痰液在抗酸桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用及其方法學(xué)評(píng)價(jià)

吳建耀 周桂生 龔 萍 余淑芳

昆山周市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇昆山 215314

目的 探究溶痰液涂片法在痰液的抗酸桿菌檢測(cè)中的意義和價(jià)值。方法 收集2011年6月—2013年6月期間于該院檢驗(yàn)科痰液檢查者的痰標(biāo)本共計(jì)1100份，將每一份樣本同時(shí)進(jìn)行直接涂片法和溶痰液涂片法來(lái)檢測(cè)痰標(biāo)本中的抗酸桿菌，檢測(cè)兩種方法對(duì)抗酸桿菌的陽(yáng)性檢測(cè)率。結(jié)果 溶痰液涂片法的陽(yáng)性率為3.09%，直接涂片法陽(yáng)性率為1.36%，前者明顯高于后者，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。并且各種痰液的檢出率和陽(yáng)性等級(jí)都高于直接涂片法。 結(jié)論 在結(jié)核病的抗酸桿菌的檢測(cè)方法中，溶痰液涂片法陽(yáng)性檢測(cè)率明顯優(yōu)于直接涂片法，可以作為快速診斷結(jié)核病的方法和手段，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

直接涂片法；溶痰液涂片法；抗酸桿菌

結(jié)核病是指由于結(jié)核桿菌引起的慢性感染性疾病，主要的傳播途徑是呼吸道、消化道、皮膚以及子宮，其中最主要是通過(guò)呼吸道，主要的臨床表現(xiàn)是午后低熱、乏力。現(xiàn)今結(jié)核病仍舊嚴(yán)重地危害著人類(lèi)的健康[1]。當(dāng)前對(duì)肺結(jié)核患者進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)和檢測(cè)傳染源最主要的途徑，這也是肺結(jié)核患者在確定診斷和治療方案的重要依據(jù)[2]。該研究通過(guò)回顧性分析2011年6月—2013年6月期間該院住院以及門(mén)診肺結(jié)核患者痰液通過(guò)直接涂片法和溶痰液涂片法檢測(cè)結(jié)果的差異，從而探究溶痰液在抗酸桿菌檢測(cè)中的意義和價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

來(lái)該院檢查患者在不同時(shí)間段（晨痰、即時(shí)痰和夜間痰）以及不同性質(zhì)（唾液痰、黏液痰、血痰和膿性痰）的痰標(biāo)本共計(jì)1100份。

1．2方法與儀器

直接涂片法:將合格的痰液標(biāo)本3 mL左右置于標(biāo)本盒或者廣口容器內(nèi)，將其中0.1 mL左右的膿樣痰液、干酪樣的痰液用竹簽挑取，放置在一塊干凈的載玻片中央，均勻地涂抹為2×2.5 cm大小的卵圓形痰膜。痰液自然干燥、固定、染色以后進(jìn)行鏡檢。

溶痰劑涂片法:將合格的痰液標(biāo)本10 mL左右置于消毒后的廣口容器內(nèi)，加入5倍的無(wú)菌蒸餾水，121 MPa高壓蒸汽滅菌20 min后，將痰檢體和BASO溶痰劑以1：2或者1：3的比例混合均勻，靜置10～20 min，待檢體完全融化后，于10 000轉(zhuǎn)/min下離心，除去上清液，取沉淀涂片染色后進(jìn)行鏡檢。該研究所采用的染色方法為最常用的Ziehl-Neelsen抗酸染色法[3]；經(jīng)過(guò)染色以后抗酸桿菌為紅色，其他細(xì)菌和背景則被染成了藍(lán)色。

1．3 觀(guān)察指標(biāo)

根據(jù)《中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃實(shí)施工作指南》[4]中有關(guān)鏡檢和報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行報(bào)告，具體如下：(1)鏡下計(jì)數(shù)一百個(gè)視野，并且觀(guān)察的時(shí)間不能低于4 min，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌，繼續(xù)觀(guān)察連續(xù)三百個(gè)視野，仍然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有抗酸桿菌，則報(bào)告為抗酸桿菌陰性，用“-”來(lái)表示。(2)鏡檢100～300個(gè)視野，若發(fā)現(xiàn)有1～2條抗酸桿菌，則記錄下所發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌的條數(shù)以及觀(guān)察的的視野數(shù)，報(bào)告為抗酸桿菌可疑（±）。并且對(duì)標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查，重新涂片。(3)鏡檢小于100個(gè)視野，發(fā)現(xiàn)有3～9條AFB，則記錄下100個(gè)視野內(nèi)抗酸桿菌的數(shù)目，報(bào)告為抗酸桿菌陽(yáng)性（1+）。(4)鏡檢小于10個(gè)視野發(fā)現(xiàn)有1～9條抗酸桿菌則報(bào)告為抗酸桿菌陽(yáng)性（2+）。(5)若鏡檢每個(gè)視野都發(fā)現(xiàn)有1～9條抗酸桿菌則報(bào)告為抗酸桿菌陽(yáng)陽(yáng)性（3+）。(6)若鏡檢每個(gè)視野發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌數(shù)量都大于9條，則報(bào)告為抗酸桿菌陽(yáng)性（4+）[5]。

1．4 統(tǒng)計(jì)方法

該研究采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，計(jì)量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 痰標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

2011年6月—2013年6月期間來(lái)該院檢查患者的痰標(biāo)本共計(jì)1100份，不同的去痰時(shí)間段以及標(biāo)本性質(zhì)檢測(cè)，見(jiàn)表1。

表1 1100份痰標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果（份）

2.2 兩種不同涂片方法對(duì)1100份痰液標(biāo)鏡檢結(jié)果

直接涂片法對(duì)1100份痰液鏡檢陽(yáng)性率為1.36%（15/1100）,而溶痰液涂片法進(jìn)行鏡檢陽(yáng)性率為3.09%（35/1100）,溶痰液涂片法的陽(yáng)性率要明顯高于直接涂片法，兩種方法陽(yáng)性檢測(cè)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=16.432，P＜0.05），見(jiàn)表2；即時(shí)痰、夜間痰、晨痰痰液標(biāo)本利用直接涂片法其陽(yáng)性檢測(cè)率分別為0.75%、1.30%、2.69%，而利用溶痰劑涂片法其鏡檢陽(yáng)性檢測(cè)率分別為1.5%、2.60%、6.15%。溶痰液涂片法對(duì)不同性質(zhì)的痰液標(biāo)本鏡檢陽(yáng)性率要明顯高于直接涂片法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=16.432，P＜0.05），見(jiàn)表3。

表2 不同性質(zhì)的痰液標(biāo)本兩種不同涂片方法鏡檢結(jié)果

表3 不同時(shí)間段的痰液標(biāo)本兩種不同涂片方法鏡檢結(jié)果

3 討論

直接涂片法由上個(gè)世紀(jì)開(kāi)始廣泛應(yīng)用，到目前為止仍然是檢測(cè)結(jié)核病菌的主要方法之一。直接涂片法用于檢測(cè)抗酸桿菌得優(yōu)點(diǎn)有報(bào)告時(shí)間短、成本低廉、技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單、特異性高[6]，但是直接涂片法所使用的檢體大多都沒(méi)有經(jīng)過(guò)處理，而是直接做成抹片，進(jìn)行染色工作，因此準(zhǔn)確性較低，而未經(jīng)過(guò)處理的痰液檢體在烘干的過(guò)程中，陽(yáng)性患者痰液中殘存的肺結(jié)核菌很容易被蒸發(fā)到空氣中，這樣就可能會(huì)造成周?chē)藛T以及操作者的感染。而B(niǎo)aso溶痰劑能夠迅速地溶解痰液中的上皮細(xì)胞、粘液，而且也可以滅活非分支桿菌，這樣能夠減少鏡檢時(shí)的干擾，顯著地提高陽(yáng)性檢測(cè)率，降低偽陽(yáng)性的發(fā)生率[7-8]。

該研究結(jié)果表明，雖然規(guī)定唾液是不合格的標(biāo)本，應(yīng)該要求病人重新送檢黏液痰、膿性痰標(biāo)本，但是通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)口水和唾液中存在著抗酸桿菌，所以在工作者對(duì)于少痰或者確實(shí)無(wú)痰的正常體檢人員和患者，為了臨床診斷的需要以及避免矛盾，也可以接受唾液痰，此外在必要時(shí)可以采取超聲霧化取痰[9-10]。直接涂片法共檢測(cè)出15份抗酸菌陽(yáng)性標(biāo)本，陽(yáng)性率為1.36%，而溶痰劑涂片法共檢測(cè)出34份抗酸菌標(biāo)本，陽(yáng)性率為3.09%。溶痰液涂片法的陽(yáng)性率要明顯高于直接涂片法，并且陽(yáng)性等級(jí)也要高于直接涂片法。直接涂片法和溶痰液法對(duì)血痰、膿性痰、黏液痰、唾液痰痰液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)其陽(yáng)性率分別為：（3.06%vs 9.18%）、（2.63%vs 4.61%）、（1.18%vs 1.85%）、（0.78%vs 2.74%）；直接涂片法和溶痰液法對(duì)即時(shí)痰、夜間痰、晨痰痰液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)其陽(yáng)性率分別為 （0.75%vs 1.5%）、（1.30 vs 2.60%）、（2.69%vs 6.15%）。這表明對(duì)于不同性質(zhì)的痰液標(biāo)本以及不同時(shí)間段的痰液標(biāo)本，溶痰液涂片法陽(yáng)性檢查率均要優(yōu)于直接涂片法。

綜上所述，在結(jié)核病的抗酸桿菌的檢測(cè)方法中，溶痰液涂片法陽(yáng)性檢測(cè)率明顯優(yōu)于直接涂片法，可以作為快速診斷結(jié)核病的方法和工具，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

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A

1674-0742（2015）01（b）－0180-02

2014-10-15）

吳建耀（1977-），男，江蘇泗陽(yáng)人，本科，主管檢驗(yàn)師，研究方向:臨床生化。