335例外周血EB病毒DNA檢測的結(jié)果分析及臨床意義

朱嬋虹，鄭錦利，劉先鴻，郭建峰

(1、福建醫(yī)科大學附屬閩東醫(yī)院檢驗科，福建福安355000；2、福建醫(yī)科大學附屬閩東醫(yī)院腎內(nèi)科，福建福安355000)

335例外周血EB病毒DNA檢測的結(jié)果分析及臨床意義

朱嬋虹1，鄭錦利1，劉先鴻2，郭建峰1

(1、福建醫(yī)科大學附屬閩東醫(yī)院檢驗科，福建福安355000；2、福建醫(yī)科大學附屬閩東醫(yī)院腎內(nèi)科，福建福安355000)

目的探討EB病毒DNA檢測在疑似EB病毒感染者的臨床應(yīng)用價值。方法應(yīng)用熒光定量PCR反應(yīng)方法，定量檢測335例疑似EB病毒感染者的外周血單個核細胞（PBMC）中EB病毒DNA載量。結(jié)果檢測335例疑似EB病毒感染者PBMC中，檢出陽性病例數(shù)109例，其中兒童97例，陽性率為31.7%（97/306）；成人12例，陽性率41.4%（12/29）。患兒以呼吸道感染及肺炎為診斷的最為常見。結(jié)論兒童是EBV感染的主要人群，并隱匿于上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎和扁桃體炎等疾病中較為常見，對此類人群進行外周血EB病毒DNA檢測，有利于EBV相關(guān)疾病的早期診斷和治療，減少重癥疾病的發(fā)生。

EB病毒；DNA；上呼吸道感染

1 資料與方法

1.1 資料來源選取2015年4月-7月醫(yī)院就診疑似EBV感染者335例，其中兒童306例（其中年齡為0～3歲，220例，平均年齡17.98±10.6月；年齡＞3歲，86例，平均年齡7.03±2.64歲），成人29例。

1.2 儀器與試劑ABI7500PCR分析儀（美國ABI公司）EBV-DNA檢測試劑盒購自中山大學達安基因有限公司，人外周血淋巴細胞分離液購自天津灝洋華科生物。

1.3 方法

1.3.1 標本制備用一次性無菌真空采血管（EDTA抗凝）抽取靜脈血2ml，輕輕混勻。取EDTA抗凝全血1ml置于滅菌離心管中，加入生理鹽水1ml輕搖混勻，取另一滅菌離心管，加入1ml淋巴細胞分離液，將稀釋好的全血用加樣器緩慢加入到加有淋巴細胞分離液的試管中（沿管壁滴加，速度宜慢），應(yīng)用水平離心機，2000r/min離心20min。吸取白細胞層，加入1.5ml離心管中。

1.3.2 EB病毒核酸提取制備好的外周血單個核細胞，12000r/min離心5min，去上清，沉淀加入50μl提取液充分混勻，100℃恒溫處理（10±1）min。12000r/min離心5min，上清液即為模板，留取備用。

1.3.3 熒光定量PCR檢測PCR反應(yīng)管中加入2μlDNA模板提取液，用已知EBV-DNA含量的標準陽性對照品制備標準曲線，置于熒光PCR儀檢測，結(jié)果低于5000拷貝/ml判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，率的比較采用卡方檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兒童和成人PBMC中EBV-DNA檢測結(jié)果見表1。

表1 兒童和成人PBMC中EBV-DNA陽性率的比較

2.2 兒童疑似感染者中（0～3歲）組及（＞3歲）組的檢測結(jié)果見表2。

2.3 兒童疑似感染者的初步診斷分布情況見表3、表4。

表2 兒童疑似感染者中0～3歲組及＞3歲組陽性率的比較

表3 年齡＜3歲EB病毒陽性兒童疾病分布情況

表4 年齡＞3歲EB病毒陽性兒童疾病分布情況

3 討論

EBV屬于γ皰疹病毒亞科淋巴濾泡病毒屬，主要感染人類口咽部的上皮細胞和B淋巴細胞。EBV長期潛伏在淋巴細胞內(nèi)，以環(huán)狀DNA形式游離在胞漿中，并整合在染色體內(nèi)。對于免疫功能正常的個體，由于EBV特異性的免疫監(jiān)視作用，EBV并不會大量復制導致疾病，而在細胞免疫功能受損后，EBV復制可加速，引起一系列臨床病變[3]。大多數(shù)實驗室采用ELISA方法檢測各項抗體輔助臨床診斷EBV感染，但它實際上是檢測人體對EBV感染的免疫狀態(tài)，無法檢測病毒自身（的真實含量），也就無法更準確靈敏地反映EBV感染的情況。本資料應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測EBV載量，具有高特異性、高靈敏度的特點。

從本資料可以看出就診的疑似EB感染患者335例中，兒童占大多數(shù)（306/335），陽性率為31.7%(97/306)；成人占（29/335），陽性率為41.4%（12/29）。成人的陽性率比兒童高，不過成人病例數(shù)較少，準確性有待進一步確證。

兒童防御能力低下是EBV感染的重要原因，EBV感染者年齡以嬰幼兒和學齡前兒童較為多見[4]。在我國3~5歲兒童感染率超過90%[5]，發(fā)現(xiàn)EB病毒感染患兒首先以呼吸道感染為主[6]。本資料陽性患兒中，主要以小于3歲（70/97）的幼兒為主，主要臨床表現(xiàn)為上呼吸道感染27例(38.57%)、肺炎16例（22.86%）、支氣管炎14例（20.0%），另外，扁桃體炎9例（12.86%），皰疹性咽炎等。同樣，大于3歲的27例EBV感染患兒中，主要臨床表現(xiàn)亦為肺炎7例（25.92%）、上呼吸道感染6例（22.22%）和扁桃體炎6例（22.22%）。與陳倩等報道一致[7]。戴偉[8]報道反復上呼吸道感染患兒EB病毒陽性25.8%，遠高于單純呼吸道感染的患兒EB病毒陽性10.2%，和本資料結(jié)果一致。熒光定量PCR方法對EB病毒感染的檢測具有早期、快速等優(yōu)點并易于推廣應(yīng)用。李素娥等報道[9]EB病毒感染與兒童原發(fā)性腎病綜合征有一定的關(guān)聯(lián)，本文中統(tǒng)計的EBV陽性患兒，有診斷為腎炎的，亦可能為[10]EB病毒在侵犯B淋巴細胞后，使B淋巴細胞發(fā)生抗原性改變，并進一步引起T淋巴細胞的防御性反應(yīng)，形成細胞毒效應(yīng)，導致受感染機體細胞的溶解和死亡。

綜上所述，成人疑似患者的病例較少，需增加病例數(shù)進一步比較。而在兒童方面，EBV感染的隱匿性及致癌性對兒童的健康構(gòu)成威脅，臨床予以EB病毒DNA檢測，有利于EBV相關(guān)疾病的早期診斷和治療，從而減少患兒痛苦，改善患兒的預(yù)后及減輕經(jīng)濟負擔。

[1]謝正德，申昆玲.重視兒童非腫瘤性EB病毒感染的研究[J].首都醫(yī)科大學學報，2010，31（2）：213-216.

[2]李金明.EB病毒實時PCR監(jiān)測.實時熒光PCR技術(shù)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2007：291-298.

[3]段紅梅，謝正德，申昆玲.慢性活動性EB病毒感染的研究進展[J].臨床兒科雜志，2007，25（2）：153-156.

[4]竇蕾，張斌，賈娜兒，等.烏魯木齊地區(qū)住院呼吸道感染患兒EB病毒感染的調(diào)查[J].臨床兒科雜志，2012，30（8）：757-759.

[5]陳麗芳.小兒EB病毒感染92例臨床分析[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2010，26（5）：712-713.

[6]廖細生，朱慶雄.EB病毒感染患兒的診療體會[J].江西醫(yī)藥，2014，49（10）：1058-1060.

[7]陳倩，胡正，張其華.761例住院兒童EB病毒感染分析[J].中國當代兒科雜志，2013，15（3）：183-186.

[8]戴偉.小兒反復上呼吸道感染誘發(fā)相關(guān)因素分析[J].白求恩軍醫(yī)學院學報，2013，11(5)：406-407.

[9]李素娥，唐駿，吳樂天.EB病毒感染與兒童原發(fā)性腎病綜合征關(guān)系的研究[J].新醫(yī)學，2014，45（5）：342-344.

[10]張慧，李雙杰，袁遠宏，等.兒童EB病毒感染不同臨床疾病類型免疫功能研究[J].中國實用兒科雜志，2013，28（6）：464-466.

R446.62

A

1674-1129(2015)06-0749-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.020 EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一個具有復雜基因組的人類皰疹病毒，EB病毒感染在全球均較普遍，并且是兒科常見的一種感染性疾病[1]，大多數(shù)的初次感染發(fā)生在幼兒時期，且多數(shù)感染后無明顯癥狀，或引起輕癥咽炎和上呼吸道感染，但終身攜帶病毒[2]。機體感染EBV后，可以產(chǎn)生傳染性單核細胞增多癥、EBV相關(guān)性嗜血細胞綜合征等，免疫缺陷患者容易發(fā)生淋巴組織增殖性疾病，常合并一系列的并發(fā)癥。此外，EBV感染與鼻咽癌和淋巴瘤的發(fā)病密切相關(guān)。本研究應(yīng)用熒光定量PCR反應(yīng)方法定量檢測了335例疑似EBV感染者的外周血EB病毒DNA載量，以探討EBVDNA檢測的臨床應(yīng)用價值和了解兒童及成人的EBV感染狀況。

2015-06-08；

2015-07-09)