新型生物殺菌劑新奧霉素對七種蔬菜病原菌的室內毒力測定

崔林開　劉精精　王樹和　顧廣杰　李法新　林曉民

摘要：為明確新奧霉素對蔬菜病原菌的抑制活性，采用菌絲生長速率法測定了新奧霉素對7種蔬菜病原菌的毒力。結果表明，新奧霉素對7種蔬菜病原菌均具有一定的抑制作用，其中對疫霉菌表現出較強的抑制作用，對大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）、茄綿疫病菌（Phytophthora parasitica）和辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）的EC50分別為7.18、11.17、76.90 mg/L；而對茄子褐紋病菌（Phomopsis vexans）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）和番茄早疫病菌（Alternaria solani）的抑制作用較弱，其EC50分別為83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L。

關鍵詞：新奧霉素；蔬菜病原菌；疫霉菌；毒力測定

中圖分類號：S482.2+8 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）22-5596-03

Abstract： The toxicity of Xinaomycin to 7 vegetable pathogens was determined by the methods of mycelial growth inhibition to ascertain its inhibitory activity against vegetable pathogens. The results showed that Xinaomycin had certain extent inhibition effect on 7 vegetable pathogens which had strong inhibition effect on Phytophthora. The EC50 were 7.18， 11.17， 76.90 mg/L for Phytophthora sojae， Phytophthora parasitica and Phytophthora capsici respectively. It had weak inhibition effect on Phomopsis vexans， Botrytis cinerea， Fusarium oxysporum and Alternaria solani and its EC50 were 83.85，105.20，178.29，195.28 mg/L respectively.

Key words： Xinaomycin； vegetable pathogens； phytophthora； toxicity test

中國科學院成都生物研究所從攀西地區土壤中篩選得到一株諾爾斯鏈霉菌（Streptomyces noursei），該菌能產生一種新型核苷類農用抗生素，命名為新奧霉素，是一種具有新化學結構的尿嘧啶核苷肽類抗生素，相對分子量為445，分子式C16H23N5O10[1]。經多輪誘變選育獲得遺傳改良菌株諾爾斯鏈霉菌XiAo-3，并通過優化提取工藝，成功獲得4%新奧霉素水劑[2]。田間藥效試驗表明，該藥劑對煙草花葉病毒病具有較好的防治效果，1 800 mL/hm2處理的防治效果高達75.69%[1]；對人參果病毒病也具有較好的防治效果，4%新奧霉素水劑500倍液處理的防治效果達79.33%[3]；同時對黃瓜細菌性角斑病和黃瓜霜霉病也具有一定的防效[4]。

新奧霉素是一種新的核苷類抗生素，具有低毒、安全、環保等優點。該藥劑目前對植物病毒表現出較高的抑制活性。為了進一步開發該藥劑防治其他植物病害的應用價值，明確該藥劑對其他植物病原菌的抑制活性，本實驗室在前期測定新奧霉素對7種作物病原真菌毒力的基礎上[5]，測定了該藥劑對7種蔬菜病原菌的室內毒力。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）、茄綿疫病菌（Phytophthora parasitica）、辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）、茄子褐紋病菌（Phomopsis vexans）、番茄早疫病菌（Alternaria solani）和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea），均由河南科技大學林學院菌物資源及有害生物管理重點實驗室提供。供試藥劑為4%新奧霉素水劑由河南省濟源白云實業有限公司提供。

1.2 培養基的制作

所用培養基為PDA培養基[6]和V8培養基[7]。PDA培養基：將200 g去皮的馬鈴薯切成薄片，加去離子水1 000 mL煮沸0.5 h，用紗布濾去馬鈴薯，加去離子水補足至1 000 mL，然后加15 g葡萄糖和15 g瓊脂粉，加熱使瓊脂完全融化，然后分裝在5個三角瓶中，121 ℃滅菌20 min。V8培養基：用紗布過濾V8蔬菜汁100 mL，加入0.2 g碳酸鈣和15 g瓊脂粉，加去離子水補足至1 000 mL，加熱使瓊脂完全融化，然后分裝在5個三角瓶中，121 ℃滅菌20 min。

1.3 含藥培養基的配制

將供試藥劑用去離子水配制成所需系列濃度的100倍母液，以1∶99的比例與熔化的PDA或V8培養基混合均勻，即為配制所需濃度梯度的含藥培養基。

1.4 測定方法

為準確測定新型生物殺菌劑新奧霉素對7種蔬菜病原菌的毒力，采用菌絲生長速率法測定供試菌株的EC50[8]。將供試菌株接種在PDA或V8平板上，25 ℃培養5 d后，用直徑為6 mm的打孔器在菌落邊緣內側打取菌餅，菌絲面朝下移接到含不同濃度藥劑的PDA或V8平板上，25 ℃黑暗培養5 d左右，十字交叉法測定菌落直徑，每處理重復3次，計算抑制率。抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-0.6 cm）×100%。將抑制率換算成概率值（y），藥劑濃度換算成濃度對數（x），求得線性回歸方程y=a+bx，并以回歸方程計算抑制中濃度EC50。

2 結果與分析

2.1 新奧霉素對不同病原菌菌絲生長的抑制作用

從表1可知，隨著新奧霉素濃度的增加，對7種蔬菜病原菌菌絲生長的抑制率也隨之增大，藥劑濃度與抑制率之間呈正相關。當新奧霉素濃度為50 mg/L時，對大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌、辣椒疫病菌、茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、黃瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌的抑制率分別為91.08%、67.47%、36.75%、43.40%、17.97%、28.77%和17.80%。新奧霉素對大豆疫霉根腐病菌和茄綿疫病菌表現出較強的抑制作用。

2.2 新奧霉素對不同病原菌的毒力比較

通過線性回歸分析，求出毒力回歸方程，相關系數均在0.94以上，說明菌絲生長抑制幾率值和藥劑的濃度對數之間呈現較好的線性相關性（表2）。依據毒力回歸方程計算出EC50，新奧霉素對7種蔬菜病原菌的毒力由大到小依次為大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌、辣椒疫病菌、茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、黃瓜枯萎病菌。同時，從表2中可以看出，新奧霉素對大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌和辣椒疫病菌3種疫霉菌具有較強的毒力，其EC50分別為7.18、11.17、76.90 mg/L，表現出較強的抑制作用，特別是對大豆疫霉根腐病菌的毒力最強。對茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、黃瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌的毒力較弱，其EC50分別為83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L，表現出較弱的抑制作用。

3 小結與討論

室內毒力測定結果表明，新奧霉素對供試的7種蔬菜病原菌的菌絲生長均具有一定抑制作用，其中對大豆疫霉根腐病菌、茄綿疫病菌和辣椒疫病菌3種疫霉菌表現出較強的抑制作用，特別是對大豆疫霉根腐病菌的毒力最強，其EC50為7.18 mg/L；而對茄子褐紋病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌和黃瓜枯萎病菌4種病原真菌的抑制作用較弱，其EC50在83.85～195.28 mg/L之間。

新奧霉素是一種新的核苷類抗生素，是一種新開發的生物農藥。目前的田間試驗發現其對植物病毒具有較好的防治效果，對黃瓜細菌性角斑病和黃瓜霜霉病也具有一定的防效[1，3，4]。本實驗室前期測定了新奧霉素對7種作物病原真菌的抑制效果，發現其對油菜菌核病菌和小麥紋枯病菌具有較好的防效[5]；本試驗測定了新奧霉素對7種蔬菜病原菌的毒力，發現其對疫霉菌具有較強的抑制作用，特別是對大豆疫霉根腐病菌的毒力最強。這對進一步開發新奧霉素防治植物病害的應用潛力提供了理論基礎。同時本實驗室初步研究了新奧霉素對黃瓜細菌性角斑病菌的毒力，發現幾乎沒有抑制作用，而吳焜玥等[4]的田間試驗結果顯示新奧霉素對黃瓜細菌性角斑病具有一定的防效，分析可能是由于新奧霉素可以顯著提高黃瓜初花期和結果期株高、莖粗、葉片數、葉面積和葉綠素含量，使植株生長健壯，從而提高黃瓜的抗病性，減輕植物病害的發生程度。

參考文獻：

[1] 馮振群，盧 清.新型生物殺菌劑新奧霉素防治煙草花葉病毒病的田間藥效[J].現代農業，2011，10（4）：50-52.

[2] 寧停波，張 婷，周金燕，等.新奧霉素發酵液的理化性質和提取方法研究[J].湖南農業科學，2011（13）：23-25，28.

[3] 俞潤萍，劉海建，呂新文，等.4種藥劑防治日光溫室人參果病毒病效果研究[J].現代農業，2014，13（2）：47-48.

[4] 吳焜玥，張 燕，蒙 靜，等.S-誘抗素和新奧霉素在日光溫室黃瓜栽培中的應用研究[J].農業科學研究，2013，34（4）：39-43.

[5] 顧廣杰，崔林開，王樹和，等.新奧霉素對7種植物病原真菌的室內毒力測定[J].農藥，2013，52（4）：293-294.

[6] 方中達.植病研究法[M].第三版.北京：中國農業出版社，1998.

[7] 鄭小波.疫霉菌及其研究技術[M].北京：中國農業出版社，1997.

[8] 牛芳勝，馬志強，畢秋艷，等.不同作用機制殺菌劑對番茄灰霉病菌拮抗木霉菌的毒力測定[J].農藥，2012，51（8）：601-604.

（責任編輯 丁艷紅）