龍眼果實揮發性成分比較分析

馬 錁，張瑞萍，谷 超，尹君樂，胡銳清，李建國，羅 詩*

(1.東莞市農業科學研究中心，廣東東莞 523086;2.東莞市盛唐化工有限公司，廣東東莞 523086;3.華南農業大學園藝學院，廣州 510642;)

桔小實蠅Bactrocera dorsalis 又名東方果實蠅，屬雙翅目實蠅科果實蠅屬，危害46個科250 多種水果和蔬菜，并且極易隨果蔬傳播蔓延，是國際上重要的檢疫性害蟲(Clarke et al.，2005)。雌蟲產卵于果皮下，幼蟲取食果肉為害，直接影響是產量減少和田間控制成本增加，間接影響是需要采取控制措施，而且產品品質降低(Clarke et al.，2011)。目前主要是靠化學農藥和性引誘劑甲基丁香酚誘殺來防治桔小實蠅。化學農藥不利于水果安全生產和環境保護，特別是近年來，桔小實蠅田間種群已對有機磷殺蟲劑、擬除蟲菊酯和阿維菌素等農藥產生了嚴重的抗藥性，因此對桔小實蠅進行誘殺是一種較好的防治策略(潘志萍等，

2005;Jin et al.，2011;Pagadala et al.，2012);甲基丁香酚只能引誘雄蟲，而且是一種致癌物質，一定劑量的甲基丁香酚能夠誘導哺乳動物產生肝癌腫瘤并能誘導真核生物的染色體產生結構異常(Schiestl et al.，1989)。

因此，尋找一種安全有效且能引誘桔小實蠅雌蟲的物質對防治桔小實蠅具有重要意義。桔小實蠅雌性成蟲對寄主瓜果的選擇，主要根據瓜果本身和氣味(Prokopy，1990)，筆者在調查中發現，裂開的龍眼果實上有桔小實蠅在產卵、取食，這說明龍眼裂果中存在引誘桔小實蠅的揮發性成分。本研究選取正常的龍眼果實和裂開的龍眼果實作為研究材料，利用利用固相微萃取-氣相色譜-質譜聯用技術對不同龍眼的揮發性成分進行比較分析，旨在找出二者的差異，為進一步探索對桔小實蠅有引誘活性的物質及引誘劑的開發提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

龍眼(石硤)采自廣東省東莞市厚街龍眼果園，裂果為在樹上自然裂開的果實，正常果與裂果均為成熟果，采集時間為2013年7月，采果過程隨機并快速完成。

內標(癸酸乙酯，為色譜純)，美國Sigma公司。

1.2 試驗方法

采取頂空固相微萃取(SPME)-氣相色譜-質譜(GC-MS)聯用儀(Agilent 7980A/5975C)分析法。

樣品處理:首先將頂空固相微萃取裝置的萃取纖維頭在氣相色譜的進樣口老化，老化溫度為270℃，載氣流量為1 mL/min，老化時間1 h。取50 g 龍眼，置于15 mL 樣品瓶中，將萃取針頭通過聚四氟乙烯隔墊插入到樣品瓶中，推出纖維頭進行吸附，等吸附完畢立即縮回纖維頭，從樣品瓶中拔出萃取針頭，再將萃取針頭直接插入氣質聯用儀，推出纖維頭解析，同時啟動儀器采集數據。

氣相色譜條件:DB-5 MS 毛細管柱(122-5532;30 m;I.D:0.25 mm;film:0.25μm，安捷倫);程序升溫:起始溫度35℃，停留5 min，3℃/min 升至150℃，10℃/min 升至240℃，停留2 min;進樣口溫度250℃;載氣為氦氣。

質譜條件:質譜接口溫度280℃，離子源溫度230℃，電離方式EI，電子能量70 eV，質譜檢測器條件為1 sec/scan，m/z 35-500，1 kV。

揮發性物質的定性和定量分析:龍眼果實揮發性物質經過GC-MS 分析鑒定后，其結果經計算機在NIST 08 標準譜庫的檢索及分析，結合相關的文獻資料確定各個揮發性物質。龍眼果實的揮發性物質的定量采用內標法，加入濃度1∶500 的內標物癸酸乙酯1μL 于15 mL 頂空瓶中，用面積歸一化法將內標物的峰面積和每個組分的峰面積進行比對，計算每個峰的具體含量，計算公式如下:含量=(單峰面積/內標峰面積)×內標物含量(Li et al.，2009;Zhang et al.，2010)。

2 結果與分析

龍眼正常果、裂果揮發性物質的總離子流色譜圖見圖1-圖2，各組分的含量見表1。兩種龍眼果實中共檢出81種揮發性物質，其中17種物質為二者共有，分別是:羅勒烯、別羅勒烯、α-蒎烯、亞甲基環丁烷、乙酸乙酯、對二甲苯、β-月桂烯、1，3，8-對三烯、(1S)-3，7，7-三甲基雙環［4.1.0］庚-3-烯、萜品油烯、鄰二甲苯、對乙基芐醇、1-氯-4，4-二甲基-2-戊炔、十六烷、石竹烯、香葉烯、杜松烯。

圖1 龍眼裂果揮發物的總離子流圖Fig.1 Total ion current of volatile from split longan fruit

圖2 龍眼正常果揮發物的總離子流圖Fig.2 Total ion current of volatile from longan fruit

裂果中檢出52種化學成分，烯類最多，29種，相對含量93.27%;醇類3種，相對含量0.46%;芳香類2種，相對含量0.31%;酚類1種，相對含量0.16%;酮類1種，相對含量0.04%;烷4 類種，相對含量0.86%;酯類1種，相對含量0.18%;其它11種，相對含量2.3%。相對含量超過1%的有9種，分別是羅勒烯(61.2%)、別羅勒烯(7.55%)、石竹烯(7.01%)、α-蒎 烯(5.24%)、杜松烯(1.42%)、γ-欖香烯(1.81%)、1，3，8-對三烯(1.36%)、(1S)-3，7，7-三甲基雙環［4.1.0］庚-3-烯(1.2%)、1，2，3，4，4a，7-六氫-1，6-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(1.07%)。

正常果中檢出49種化學成分，烯類最多，20種，相對含量86.48%;酯類，6種，1.56 %;芳香類，9種，相對含量0.87%;醇類，4種，相對含量0.3%;酚類，1種，相對含量0.25%;烷類，4種，相對含量0.1%;酮類，2種，相對含量0.07%;其它2種，相對含量0.61%。相對含量超過1%的有5種，分別是羅勒烯(69.55%)、別羅勒烯(9.27%)、1，3，8-對三烯(1.7%)、乙酸乙酯(1.25%)、(1S)-3，7，7-三甲基二環［4.1.0］庚-3-烯(1.2%)。

裂果中的羅勒烯、別羅勒烯、α-蒎烯、石竹烯在裂果中的含量均大于正常果200 ng/g/h 以上。香葉烯、γ-欖香烯、β-月桂烯、1，3，8-對三烯在裂果中的含量高于正常果。而α-桉葉烯、α-石竹烯在裂果中的含量高于30 ng/g/h，但在正常果中沒有檢測到。

表1 龍眼揮發物的成分及含量Table 1 Volatile components in 2 Longan samples

(續上表)

(續上表)

(續上表)

3 結論與討論

桔小實蠅主要通過雌蟲將卵產于寄主果實表皮下，幼蟲在果實內取食、危害。桔小實蠅的產卵習性導致了藥劑防治上的困難。因此，控制桔小實蠅產卵便成為防治其危害的重要措施。研究發現龍眼對桔小實蠅具有引誘作用(涂蓉，2012)，而是桔小實蠅不能在健全的龍眼果實上產卵成功，但可以在受傷的果實傷口處成功產卵(梁廣勤等，2001)。筆者發現桔小實蠅能在裂開的龍眼果實上成功產卵，說明龍眼的揮發性成分中有引誘桔小實蠅產卵的物質。本研究對龍眼裂果和龍眼正常果揮發性成分的比較分析，發現裂果中的羅勒烯、別羅勒烯、α-蒎烯、石竹烯、香葉烯、α-石竹烯、γ-欖香烯、β-月桂烯的含量均比正常果有明顯的增加，裂果中的α-桉葉烯、α-石竹烯在正常果中沒有檢測到。有研究表明，這幾種物質或者其類似物質對實蠅具有引誘作用。桔小實蠅對羅勒烯、別羅勒烯、月桂烯均有較強的電生理活性(Jayanthi et al.，2012);月桂烯、α-蒎烯、反式-β-羅勒烯的混合物能夠吸引西印度實蠅的雌、雄成蟲(Malo et al.，2012);杧果中的β-蒎烯對地中海實蠅有較高引誘作用(Cosse et al.，1995);木瓜中的大根香葉烯對桔小實蠅有引誘作用(涂蓉等，2013);β-石竹烯對桔小實蠅有引誘作用(馬錁等，2011)。

昆蟲與植物揮發成分的關系一直以來是關注研究重點，植物的揮發成分誘導昆蟲產生寄主定向行為、逃避行為、產卵行為、產卵場所的選擇行為、刺激雌雄交配、取食、聚集和傳粉行為等(杜家緯，2001)。昆蟲對寄主植物化學指紋圖譜的感知是其對寄主定向行為主要因素，產卵雌成蟲對植物的接受或拒絕主要取決于植物體內的接觸產卵刺激物(唐宇翀等，2010)。因此，桔小實蠅對龍眼裂果的趨向性，可能與龍眼裂果中含量較高的幾種烯類物質有關。本文只是初步分析了龍眼果實的揮發性物質，這些化合物單體或混合物對桔小實蠅的引誘活性尚在進一步研究中。

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