教學實驗中不同方法測定安痛定注射液中安替比林含量的比較

郁韻秋+李霞+李嫣

摘要：教學實驗中有關安痛定注射液中安替比林的測定方法采用的是雙波長法，現采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）對其進行了測定，并對兩種方法的結果進行了比較和評價。采用t檢驗法對兩組數據進行了比較，說明在學生實驗中可以以HPLC法代替雙波長法進行安替比林的含量測定。此項實驗的目的：（1）使學生更深入地理解分析方法的原理，并且懂得同樣的化合物可選擇不同的分析方法;（2）使學生將統計檢驗的方法運用到具體案例中。

關鍵詞：雙波長法;高效液相色譜法;安痛定注射液;安替比林;教學實驗

中圖分類號：G642.41 ? ? 文獻標志碼：A ? ? 文章編號：1674-9324（2015）20-0214-02

分析化學是醫、藥學院校本科教學的必修課，也是一門基礎課程，其理論知識和實驗技能是藥物分析學、藥物化學、天然藥物化學、藥劑學、藥理學和中藥學等各學科的必備基礎[1]。分析化學教學不僅要求學生掌握有關的基礎知識和基本原理，而且要求學生學習和掌握基本的實驗操作和技能，將分析化學的原理與分析實驗有機地融合是至關重要的。因此，我們在教學過程中進行了多方面的探索，啟迪學生積極思考，提高其分析問題和解決問題的能力。在學習基本知識的同時，學會融會貫通，用學到的知識去指導實驗設計，反之，對于具體的分析對象要懂得如何選擇分析方法。

對于某些藥品（比如復方制劑）的測定，雙波長法可以消除干擾組分而達到測定目的;HPLC法具有分離分析的功能，也可以消除干擾而進行目標組分的測定。因此，我們采用HPLC法對安痛定注射液中安替比林的含量進行了測定，并將測定結果與原來教學實驗中采用的雙波長法進行了比較和分析。

一、試劑

氨基比林、安替比林對照品均購自中國藥品生物制品檢定所，甲醇（色譜純）購自德國默克化工試劑公司，鹽酸（分析純）購自國藥集團化學試劑有限公司，去離子水由Millipore Direct-Q純水發生器制得。

二、高效液相色譜法

1.色譜條件。

儀器：Agilent_HPLC_1200系列

色譜柱：Welch Ultimate○AQ-C18（4.6x250mm，5μm）

流動相：甲醇∶水（60∶40）

流速：0.8mL/mim

柱溫：30℃

檢測波長：260nm

進樣體積：10μL

色譜分析工作站：Agilent ChemStation

2.溶液制備。

（1）儲備液。精密稱取氨基比林和安替比林各50mg，分別置于50mL容量瓶，加甲醇溶解，制得氨基比林甲醇溶液，1mg/mL;氨替比林甲醇溶液，1mg/mL。4℃儲藏。

（2）標準曲線。用60∶40（v/v）的甲醇水溶液將儲備液稀釋成含氨基比林2、5、10、15、20、25、30μg/mL（含10μg/mL的氨基比林）的溶液。

（3）樣品。取安替比林和氨基比林儲備液適量，用流動相稀釋成含安替比林10μg/mL（含10μg/mL的氨基比林）的溶液5份。

3.方法學驗證及樣品測定。在上述色譜條件下安替比林和氨基比林得到完全分離，峰形對稱性好且無明顯的干擾峰。安替比林和氨基比林的保留時間分別為5.12分鐘和6.62分鐘。

（1）線性范圍。依照上述標準曲線配置法，配制成含氨基比林2、5、10、15、20、25、30μg/mL，并含10μg/mL的氨基比林的溶液。依照上述色譜條件進行HPLC分析，記錄色譜圖。以色譜圖峰面積為縱坐標（y），氨基比林濃度（μg/mL）為橫坐標（x），以最小二乘法進行回歸分析，得標準曲線。結果顯示，安替比林在2～30μg/mL的范圍內，線性良好。其中回歸方程為y=35.441x-1.4319，R=0.9996。

（2）準確度和精密度。配制含氨基比林5、15、30μg/mL（含10μg/mL氨基比林）的低（L）、中（M）、高（H）三個水平的標準液，每個濃度水平各5份，依照上述色譜條件，連續進樣三天，記錄色譜圖，以進行日內和日間精密度與準確度的考察。其中精密度以相對標準差（relative standard deviation，RSD）來表示，準確度以相對誤差（relative error，RE）來表示。結果如表1所示。

（3）樣品測定。依照上述樣品制備法制備含安替比林10μg/mL（含10μg/mL的氨基比林）的溶液5份，依照上述色譜條件進行HPLC分析。結果如表2所示。

三、雙波長法

1.測定條件。儀器：HITACHI U-2900

2.測定方法及結果。

（1）λ1與λ2的選定。用HCl（0.1mol/L）為溶劑，將氨基比林儲備液稀釋至約5μg/mL，以HCl為空白測定吸光度，在230nm附近和265nm附近各找5個不同波長的吸光度，找出吸光度相等的λ■與λ■。根據實驗結果選擇的兩個波長為：λ■=231nm，λ■=268nm。

（2）安替比林標準品及模擬樣品的測定。用HCl（0.1mol/L）為溶劑，將氨替比林儲備液稀釋至約5μg/mL，以HCl為空白測定吸光度，測定其在λ1與λ2處的吸光度A1和A2。用HCl（0.1mol/L）為溶劑，將氨基比林和安替比林儲備液稀釋至含氨基比林和安替比林各10μg/mL的模擬樣品溶液，以HCl為空白測定吸光度，測定其在λ1與λ2處的吸光度A■′和A■′。以上測定步驟重復進行5次，記錄結果，以下式計算安替比林濃度。結果如表2所示。

四、F檢驗和t檢驗

由HPLC法和雙波長法測定濃度為10μg/mL的安替比林樣品，結果如表3所示。

F檢驗F=1.36，查表得F■=5.05，F

t檢驗t=0.617，查表得雙側檢驗t■=2.228，t

五、討論

雙波長法和高效液相色譜法都可用于多組分的含量測定，在有些分析工作中兩種方法是互相驗證或替代的。作為現代化的分析檢測手段，HPLC法的應用日益廣泛，《中國藥典》中涉及HPLC法進行含量測定的項目，已從1985版中的8項增加到2010版中的千余項[2]。在測定安痛定注射液中安替比林的含量時，應用HPLC法和雙波長法的結果說明：高效液相色譜法快速、靈敏，適合批量樣品多種成分的同時、快速測定;雙波長法簡單、準確，適合少量樣品的快速測定。在學生實驗中，采取兩種方法測定安痛定注射液中安替比林的含量，并且運用統計檢驗手段對方法進行簡要評價，不僅可以使學生了解儀器分析的原理，而且要關注儀器分析方法和應用的進展和動態，對于給定的分析任務，可以結合方法原理選擇不同的分析方法，逐步培養靈活、多元化的思維方式。

參考文獻：

[1]李玲，劉健，周踐，等.從歷版中國藥典分析方法的統計與研究看我國藥物分析方法的發展[J].藥物分析雜志，1998，18（05）：349-352.

[2]劉紅云，鄭舉，張莉，等.HPLC法同時測定安痛定注射液中氨基比林和安替比林的含量[J].中國獸藥雜志，2009，43（9）：5-7.