奧美拉唑對小鼠胸腺、脾臟免疫功能的影響

齊東江，徐阿曼，2

(1.安徽醫科大學第四附屬醫院普外科，安徽合肥 230032;2.安徽醫科大學第一附屬醫院普外科，安徽合肥 230022)

奧美拉唑(omeprazole，OME)是一類治療胃食管反流病、慢性胃炎、消化性潰瘍等疾病的重要藥物，并普遍用于根除幽門螺桿菌(helicobacter pylori，Hp)感染，其作用機制是阻斷胃壁細胞分泌管上H+/K+-ATP酶的活性從而阻斷刺激因素引起的胃酸分泌。近年來有研究顯示長期使用OME可引起一系列的不良反應［1-3］，如:胃壁細胞增生、腺囊腫、高胃泌素血癥及胃底腺息肉、胃癌等。目前對OME對溶酶體膜上Ⅴ-ATP酶是否具有抑制作用的研究較少。本研究通過長期給予小鼠OME，觀察其是否會抑制小鼠溶酶體膜上的Ⅴ-ATP，從而影響小鼠的免疫功能，以期為臨床合理用藥提供理論依據。

1 實驗動物與試劑

清潔級昆明種小鼠，雄性，30只，體質量24～26 g，購自安徽醫科大學實驗動物中心(動物合格證號SCXK(皖)2005-001號)。奧美拉唑由山東新時代藥業有限公司提供，批號:009131003。酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)ELISA 檢測試劑盒、N-乙酰-β-D-氨 基 葡 萄 糖 苷 酶 (N-acetyl-β-D-glucosaminidase，NAG)ELISA檢測試劑盒購自蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號分別為 E20141031A、E20141031A;TDZ42WS低速臺式離心機購自長沙湘儀離心機儀器有限公司;FA2204B電子天平購自上海精科天美科學儀器有限公司;Sunrise-Basic tecan酶標儀購自瑞士Tecan公司。

2 試驗方法

2.1 動物模型建立與分組 小鼠飼養聚丙烯籠內標準條件下飼養，溫度維持在24℃，自由進食飲水。30只小鼠隨機分為對照組、OME低劑量組、OME高劑量組。OME低劑量、高劑量組小鼠每天給予OME灌胃，低劑量組為(6 mg·kg-1·d-1)、高劑量為(30 mg·kg-1·d-1)。每周稱量體質量1次，24周后處死小鼠，收取標本，處死前小鼠禁食24 h。

2.2 小鼠脾重量指數測定 小鼠稱量體質量后脫頸椎處死，取出小鼠脾臟，濾紙吸干殘留血液，分析天平稱重。計算脾重量指數，脾重指數=脾臟重量(mg)/體質量(g)。

2.3 小鼠胸腺重量指數測定 小鼠稱量體質量后脫頸椎處死，取出小鼠胸腺，濾紙吸干殘留血液，分析天平稱重。計算脾重量指數，胸腺重指數=胸腺重量(mg)/體質量(g)。

2.4 小鼠血清中ACP及NAG含量測定 小鼠眼眶取血，離心后取上清，-80℃凍存備用。采用ELISA法測定血清及組織中ACP和NAG含量，實驗步驟嚴格按照操作說明書操作，450 nm處測定吸光度值。

2.5 統計方法 采用SPSS17.0軟件包進行數據分析。觀測資料均為計量資料，以均數±標準差表示(±s)，均通過正態性檢驗。多組間比較采用one-way ANOVA，兩兩多重比較為LSD-t檢驗。以P＜0.05為顯著性差異意義。

3 結果

3.1 OME對小鼠脾重量指數的影響 各組小鼠體重和脾重指數見圖1。從圖1可見，長期使用OME均導致小鼠脾重指數下降(F=11.848，P＜0.01)。與對照組相比，OME組小鼠脾重指數均呈現下降趨勢，其中OME高劑量組與對照組相比小鼠脾重指數明顯下降，差異有統計學意義(P＜0.05)。

3.2 OME對小鼠胸腺指數的影響 各組小鼠胸腺指數見圖2。圖2可見，長期使用OME均可導致小鼠胸腺指數下降(F=2.804，P ＜0.01)。與對照相比，OME低劑量組小鼠脾重指數下降，但差異無統計學意義，OME高劑量組小鼠脾重指數下降，差異有統計學意義(P＜0.05)。

3.3 OME對小鼠血清中ACP及NAG含量影響OME組給藥24周后小鼠血清中ACP及NAG含量均減少(F=2.959，P ＜ 0.01;F=13.984，P ＜0.01)。與對照組相比，OME低劑量組ACP及NAG含量均有下降的趨勢，但差異無統計學意義，OME高劑量組與對照組相比明顯降低，差異有統計學意義(P ＜0.05)(見圖3，4)。

4 討論

溶酶體是一種參與細胞分解代謝的酸性細胞器(pH 4.5～5.5)，普遍存在于哺乳動物的各種細胞中，除了成熟的紅細胞［4］。在細胞免疫中T細胞抗原呈遞、T淋巴細胞清除病原微生物、受損的細胞及腫瘤細胞以都需要溶酶體酶的參與［5-6］。細胞自噬發揮其正常的功能同樣也需要溶酶體及其蛋白酶的參與，因此它在人體防御及免疫反應中扮演重要的角色［7］。溶酶體蛋白水解酶的活性需要高酸環境來維持(pH在4.5到5.0之間)。溶酶體通過一種質子泵V-ATP酶消耗ATP將H+逆電子梯度轉入溶酶體內，從而形成和維持pH梯度的穩定［8］。

ACP及NAG均是溶酶體內水解酶，而且ACP又是溶酶體的特征性酶，分析兩者的含量可以直接反應溶酶體酶的含量。本實驗中發現OME組小鼠血清中ACP及NAG水平均較對照組低，并呈現一種劑量依賴性。這提示小鼠體內溶酶體呈一種抑制狀態，這可能是OME抑制溶酶體膜上的V-ATP酶，破壞了溶酶體內的高酸環境，抑制溶酶體內蛋白酶的活化。抑制V-ATP酶的活性同時也會損壞細胞的內吞作用和自噬，甚至是溶酶體酶功能的喪失［9］。

本研究同時顯示長期使用OME組小鼠脾臟指數及胸腺指數較對照組均呈現下降趨勢，其中高劑量組脾臟指數及胸腺指數下降明顯。胸腺及脾臟是重要免疫器官，胸腺是T淋巴細胞分化成熟的中樞免疫器官，能誘導胸腺細胞分化成熟為功能不同的T細胞亞群;脾臟是體內最大的免疫器官，是具有免疫活性的T細胞和B細胞依據和接受抗原刺激產生免疫應答的重要場所［10］。因此脾臟指數及胸腺指數可直接體現機體的免疫水平并可衡量藥物對免疫器官的抑制作用。說明長期高劑量服用OME對小鼠的免疫存在一定的損傷。機體的免疫功能狀態是影響腫瘤治療轉歸的重要因素［11］，對提高腫瘤患者的生存率、改善生活質量具有重要作用，它與腫瘤的發生、發展有關系密切。因此，長期使用OME可能是通過抑制溶酶體功能從而引起系統性的免疫功能損傷，這可能也是其導致胃癌發生一個主要因素。

目前臨床醫師對質子泵抑制劑(proton pump inhibitors，PPIs)使用指征把握不準和大量不規范用藥導致奧美拉唑使用泛濫。在澳大利亞、愛爾蘭和英國使用PPIs的患者中，分別有63%、33%和67%的患者沒有按照標準使用該藥［12］。武航海等［13］統計所屬醫院2011—2012年 OME使用情況發現10 000張含OME的處方，其中1 752張為不合理處方。因此，對于需要長期使用OME的患者，建議定期完善相關檢查，如胃鏡等。同時本研究存在一定的不足，實驗樣本量較小，有待大樣本實驗近一步探索研究。本研究對于合理、規范化使用PPIs具有一定的臨床指導意義。

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