秦嶺產宜昌蛇菰生藥學特征與抗氧化活性研究

孫 曉，郭耀武，劉 越，王國海

(1.陜西中醫學院，陜西咸陽 712046;2.陜西省食品藥品檢驗所，陜西西安 710065)

蛇菰是具有地方特色的民間草藥。據《本草綱目》記載，蛇菰又稱“葛花菜”、“葛乳”，李時珍曰“諸名山皆有之，惟太和山采取，云乃葛之精華也。秋霜浮空，如芝、菌涌生地，其色赤脆，蓋蓋蕈類也”［1］。蛇菰屬植物為全寄生植物，寄主多分布在海拔500～2 600 m的多種林木，植株大多在中秋前后露出地面，生長季節性強，生長期短，資源稀少［2-3］。文獻記載多分布于江西、湖北、湖南、廣西、四川、云南、臺灣、福建等省區。本文研究所采的宜昌蛇菰，是首次在秦嶺北坡發現。文獻報道蛇菰屬植物具有保肝補肝［4］，益腎壯陽［5］，止血生肌［6］，調經活血，清解酒毒之功效［7］，近年來發現其還具有抗疲勞，抗衰老［8-9］，抗氧化活性［10］。本文對蛇菰屬宜昌蛇菰的生藥學特征做了系統觀察;同時采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分析法對其體外抗氧化活性進行研究［11］，對指導宜昌蛇菰的藥用研究具有積極意義。

1 材料與試劑

宜昌蛇菰，2013年9月采于陜西秦嶺北坡周至縣境內，經郭耀武主任藥師鑒定為宜昌蛇菰;水合氯醛、稀甘油均為分析純;維生素C標準品(批號:100425-201103)，購于中國食品藥品檢定研究院;DPPH，Sigma-Aldrich公司;水(純化水)，石油醚，乙酸乙酯，正丁醇，無水乙醇等，均為分析純。

德國賽多利斯Sartorius BP系列天平;奧林巴斯雙目生物顯微鏡。UV2550-紫外分光光度計，日本島津公司;電熱套;旋轉蒸發儀，德國Heidolph公司。

2 宜昌蛇菰生藥學研究

2.1 藥材性狀 宜昌蛇菰，植株矮小成圓柱狀，頂端膨大類圓形，根莖褐紅色，表面粗糙外被鱗苞片，紅色。花雌雄異株，雄花花被裂片3片;聚藥雄蕊，花藥3個;質地較脆，易折斷，氣微，味甘、苦。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 莖橫切面 表皮細胞單列，類圓形體積較小，排列緊密。表皮內側幾乎全部為基本薄壁組織，無皮層、中柱和髓部的分化。薄壁細胞呈類圓形或橢圓形，直徑35～90 μm，排列較疏松。外韌型維管束散在，形成層不明顯，油細胞散在于薄壁細胞中。見圖1。

2.2.2 鱗葉橫切面 彎曲呈新月形。表皮細胞1列，排列緊密。葉肉組織無柵欄組織和海綿組織的分化，薄壁細胞類圓形，直徑43～129 μm，維管束散偏向于上表皮一側，橫切面觀呈現類似等面葉的特征，這可能與植株生長在林下陰濕環境有關，區別與一般雙子葉植物異面葉特征。見圖2。

2.2.3 根部切面 根部呈不規則團塊，與寄主緊密連接。切面可見寄主的組織，薄壁細胞類圓形，維管束散在，無明顯特征規律。

3 宜昌蛇菰各部位不同溶劑提取物抗氧化活性測定比較

3.1 樣品處理 藥材晾干，手工分成根、莖葉、花三部分，各自粉碎，用75%乙醇回流提取3次，每次2 h，提取液旋轉蒸發至無醇味，得宜昌蛇菰乙醇提取物水溶液［12］。各部位水溶液依次用石油醚萃取至無色得到石油醚層萃取液，乙酸乙酯萃取至無色得到乙酸乙酯層萃取液，正丁醇萃取至無色得到正丁醇層萃取液。將各萃取液合并后旋轉蒸發至成浸膏狀，分別轉移到蒸發皿中，置烘箱中干燥，干燥后得到各固體待測樣品，保存于干燥器中備用。

精密稱定各待測樣品50 mg，維生素C標準品50 mg，分別用無水乙醇溶解定容至50 mL容量瓶中，配制成質量濃度為1 g·L-1的儲備溶液。

DPPH是穩定的自由基，當有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數量成定量關系，因此廣泛用于定量測定生物試樣和食品的抗氧化能力［13-14］。精密稱取DPPH 100 mg，無水乙醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶，配制成質量濃度為1 g·L-1的DPPH儲備試液。無水乙醇稀釋到所需各個濃度，并做吸收曲線，結果表明DPPH在517 nm處有最大吸收。在0.005～0.150 g·L-1間線性良好，線性方程:Y=15.893 93X+0.000 01，r2=0.999 97。

3.2 各部位提取物抗氧化性活性測定 將各待測樣品儲備液1 g·L-1分別用無水乙醇稀釋到所需各濃度，分別精密吸取2 mL各濃度待測樣品溶液，分別加入到2 mL質量濃度為0.08 g·L-1的DPPH試液中，室溫避光反應10 min，于517 nm平行測三次取平均值，得到各個樣品不同濃度的溶液吸光度Ai;同法以無水乙醇為空白加入到DPPH試液中，測得空白吸光度A0;同法用無水乙醇代替DPPH試液與樣品反應測得樣品本地吸光度Aj。同法用維生素C代替樣品作為陽性對照。得到各個數據求出DPPH清除率，并進一步計算其自由基清除率IC50值。見表1。

表1 宜昌蛇菰各部位提取物對DPPH的清除率/%

3.3 實驗結果與小結 各濃度實驗結果差異顯著，具有統計學意義。結果表明宜昌蛇菰各部位提取物對DPPH的清除效果隨濃度增大而呈增大趨勢，但當樣品濃度到達一定濃度后，對DPPH清除率雖然也隨濃度增大而增加，但是逐漸趨于平緩。同一溶劑條件，宜昌蛇菰花、莖葉、根等三部位對DPPH清除作用無明顯差異。宜昌蛇菰同一部位用不同溶劑萃取，所得提取物對DPPH清除效果有明顯差異，乙酸乙酯提取物活性和維生素C相似，正丁醇提取物活性小于維生素C，乙酸乙酯提取物活性大于正丁醇提取物活性。

4 討論

秦嶺產宜昌蛇菰的莖與鱗葉橫切面顯示其具有初生構造的特征，莖橫切面表皮以內為基本薄壁組織，無皮層、中柱和髓部的分化，維管束不規則散在，莖特征與單子葉植物莖的顯微構造類似，可能與其生長周期較短，僅保留初生生長有關;葉肉組織中無海綿組織和柵欄組織的分化，這些均區別于雙子葉植物異面葉特征，可能與其陰暗潮濕的生長環境有關。借助于這些結構特征，對以后宜昌蛇菰的品種鑒定提供參考依據。

秦嶺產宜昌蛇菰具有明顯的體外抗氧化活性，且各部位活性相當，故提示其藥用部位應為全株入藥。不同溶劑間的抗氧化活性比較有所差異，本實驗的抗氧化活性成分多聚集在乙酸乙酯層，提示提取時應選擇合適溶劑，盡可能完全溶出所需成分。

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