凝膠法檢測新生兒溶血病免疫性抗體的臨床價值分析

王申

河南省安陽市婦幼保健院兒內三科，河南安陽 455000

新生兒溶血病為一種免疫性疾病，主要由母嬰血型不合時母體血清中IgG 抗體經由胎盤進入胎兒體內，致使胎兒紅細胞被破壞所引發[1]。新生兒溶血癥不會對母體來造成任何影響，但胎兒會出現嚴重貧血、心力衰竭等問題，嚴重時甚至導致死亡。存活患兒也極易出現運動能力障礙或智力發育低下等后遺癥[2]。基于此，積極診斷新生兒溶血癥意義重大。試管法為臨床傳統檢測方法，通過直接、間接抗人球蛋白試驗及放散試驗測定患兒免疫性抗體，但該方法所需時間長、步驟繁瑣，且結果可重復性差，容易出現假陰性情況。微柱凝膠法為新型檢測方法，有效改善了試管法缺陷，目前已經得到廣泛應用。整群選取2011年6月—2014年6月該院85例溶血病疑似新生兒進行研究，探析凝膠法在新生兒溶血病免疫性抗體檢測中臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該院2011年6月—2014年6月所收治85例溶血病疑似新生兒進行研究，其中男48例，女37例，出生時間在4~10 d，平均(8.2±1.3)d。臨床表現：32例為高膽紅素血癥、20例為血紅蛋白降低、16例為新生兒黃疸，14例為貧血、3例肝脾腫大。

1.2 檢測方法

1.2.1 對照組 試管法：①直接抗人球蛋白試驗：生理鹽水洗滌新生兒紅細胞2 次后配制為濃度5%紅細胞鹽水懸液。取1 滴配制好的紅細胞鹽水懸液于干凈試管中，加入抗人球蛋白血清，混合均勻后離心1 min，觀察凝集反應。②間接抗人球蛋白試驗：取3支干凈試管，均放入2 滴新生兒血清及1 滴配制好的5%紅細胞鹽水懸液，由A、B、O 型血液標本制成。發生凝集表示出存在相應抗體。若未凝集，加入4 滴抗IgG 的抗人球蛋白血清，混合均勻后離心，時間為1 min，觀察凝集反應。③放散試驗。新生兒紅細胞洗滌3 次，加入抗A、B 分型血清，混合均勻后進行離心，將上清液去掉后再洗滌3 次，加入一半體積生理鹽水。之后放入37℃水浴中放散。將放散液與2%的抗人球蛋白混合，進行離心，觀察結果。

1.2.2 觀察組 微柱凝膠法：首先對微柱凝膠試劑卡做標記，取50 μL 患兒血清或紅細胞放散液，分別加入50 μL 配制好的A、B、O 不同血型、血液標本所制成濃度為0.5%的紅細胞鹽水懸液，混合均勻。離心1 min 后取出，肉眼觀察結果。

1.3 觀察指標

比較兩種檢測方法：①直接抗體、游離抗體、放散試驗檢出率；②特異性抗體陽性率，包括IgG 抗體、IgG 抗A、IgG 抗B、IgG抗D、IgG 抗E、IgG 抗cE。

1.4 統計方法

采用SPSS17.0 軟件處理數據，計數資料用百分率（%）表示，行χ2檢驗，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢測HDN 免疫性抗體的比較

觀察組直接抗人球蛋白試驗陽性率為81.2%、抗體游離試驗陽性率為87.1%、抗體放散試驗陽性率為91.8%，符合率為91.8%；對照組對應陽性率分別為64.7%、70.6%、75.3%、75.3%，觀察組陽性率顯著高于對照組，對比差異有統計學意義（P＜0.05），詳細見表1。

表1 兩種方法檢測HDN 免疫性抗體比較結果[n(%)]

2.2 HDN 免疫性抗體的特異性檢測

兩種檢測方法對免疫性IgG 抗體、IgG 抗A、IgG 抗B、IgG抗D、IgG 抗E、IgG 抗cE 陽性率接近，比較差異無統計學意義（P＞0.05），詳細見表2。

表2 HDN 免疫性抗體特異性檢測結果[n(%)]

3 討論

HDN 是由母嬰血型不合所引起免疫性溶血性疾病，人體紅細胞表面上分布有多種抗原系統，很多可引起溶血病，以ABO血型不合作為常見，Rh 血型系統比較少見[3-4]。一般情況下，母體為O 型血、父體為非O 型血最容易引發溶血病，原因在于O 型血具有更高效價抗A、抗B 的IgG 抗體[5]。

臨床上常用直接、 間接抗人球蛋白試驗及放散試驗對疑似新生兒溶血病病例進行檢測，其中直接抗人球蛋白試驗可檢測出紅細胞是否出現不完全致敏，而間接抗人球蛋白試驗則可檢測血清中是否存在抗體并明確抗體具體類型，放散試驗則主要檢測紅細胞上抗原類型[6-7]。但該種檢測方法檢測時步驟復雜，且容易受到外界因素干擾，進而導致偏差，引發誤診。本組將試管法與凝膠法進行對比，結果證實，凝膠法抗人球蛋白試驗陽性率、抗體游離試驗陽性率及符合率分別為81.2%、87.1%、91.8%、91.8%，顯著高于對照組64.7%、70.6%、75.3%、75.3%，HDN 免疫性抗體特異性檢出率則接近。試管法敏感性容易受離心速度及時間、血清與紅細胞比例等因素影響，操作步驟繁多，耗時較長，且需對紅細胞進行反復洗滌。抗原和抗體親和力弱，洗滌次數太多容易大致抗體脫落而引發假陰性情況[8]，因此符合率僅為75.3%。微柱凝膠法為一種新型血清檢測方法，將凝膠分子篩技術與抗原抗體反應結合起來，血清檢測過程中，游離紅細胞可穿過凝膠柱，但抗原抗體發生反應后紅細胞會發生凝集而無法穿過分子篩，從而懸浮在凝膠柱上，游離紅細胞與凝集紅細胞就會區分開來[9]。此外，微柱凝膠法的應用可將血型抗體及抗人球蛋白提前放進去，不需逐次加入，因此檢測過程得到大幅簡化[10]，操作更簡單，人為誤差和干擾也因此得到控制，優勢得到凸顯，這是其符合率高達91.8%的原理基礎。再有，其通過調節凝膠濃度對凝膠間隙進行控制，讓細胞在離心力作用下發生凝集而分為上下2層，區分陽性與陰性。與試管法相比，不用頻繁洗滌紅細胞，易于標準化，影響因素少，靈敏度得以提高。有臨床研究單獨對Rh 血型免疫性抗體進行檢測，結果顯示單一抗體產生頻率抗E 最高，抗e 最低，混合抗體中，抗Ce 最高，抗cD 最低。且女性免疫性抗體陽性率明顯高于男性，且被檢者中以孕產婦居多，多數存在反復妊娠、流產史，說明母嬰血型不合妊娠免疫同樣也是導致Rh血型免疫性抗體重要原因。另外，也有研究提出微柱凝膠法敏感性偏高，對于血清中含有高效價冷凝集素及自身抗體患者，抗體篩查試驗可能因此導致假陽性結果的出現。為確保臨床輸血有效性、安全性，可聯合凝聚胺法、酶法等予以確認。

綜上，凝膠法檢測新生兒溶血病免疫性抗體所受影響因素少，敏感性高，操作更簡單，具有較高臨床應用價值。

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