不同花期野葛花總黃酮、花青素和總多酚含量的研究

譚娟，劉良科，謝夢涵，陳思嫻

（懷化學(xué)院，1.生物與食品工程學(xué)院；2.民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗室；3.湘西藥用植物與民族植物學(xué)湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗室，湖南懷化418008）

不同花期野葛花總黃酮、花青素和總多酚含量的研究

譚娟1，2，3，劉良科1，2，3，謝夢涵1，陳思嫻1

（懷化學(xué)院，1.生物與食品工程學(xué)院；2.民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗室；3.湘西藥用植物與民族植物學(xué)湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗室，湖南懷化418008）

采用紫外－分光光度法測定了野葛花中的總黃酮、花青素和總多酚的含量，為野葛花深入開發(fā)利用提供理論依據(jù).研究結(jié)果表明，野葛花在花蕾期、盛花期和終花期時總黃酮、花青素和總多酚含量存在顯著差異，在盛花期時均達(dá)到最大值，分別是1.61%、2.12%和4.11%.提取野葛花的總黃酮、花青素和總多酚時，適宜在盛花期采收.

野葛花；花期；總黃酮；花青素；總多酚

野葛花為豆科植物野葛（Pueraria Lobate（Willd.）ohwi）的花，異名葛條花.在我國葛花用于解酒已有愈千年歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等均有記載，其性甘、涼，用于解酒醒脾，治傷酒發(fā)熱，煩渴，吐血，腸風(fēng)下血等癥狀［1］.近年來隨著人們生活水平的提高，飲酒成為部分人生活的一種方式，大量或長期飲酒，則易導(dǎo)致急、慢性酒精中毒.葛花解酒具有簡、便、效、廉的特點(diǎn)，備受人們關(guān)注［2］.不僅如此，大量研究表明葛花具有保肝護(hù)肝作用，野葛花能夠在乙醇的腸胃吸收及代謝兩個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，其水提取物通過激活乙醇脫氫酶活性來降低乙醇的濃度，從而有效地降低血液中乙醇濃度，對酒精引起的肝細(xì)胞損害有保護(hù)作用［3，4］.同時，野葛花還具有保護(hù)心肌、擴(kuò)張腦血管、心血管和外周血管以及抗氧化、降血糖等作用［5，6］.已有研究表明，葛花主要化學(xué)成分為黃酮類化合物，還包括皂苷類化合物、花青素、總多酚、揮發(fā)油等，并分離得到葛花苷、鳶尾異黃酮等多種有效成分化合物［7，8］.但植物的花有一定的生長周期，不同時期的花中化學(xué)成分及含量不盡相同.為獲得藥效成分含量較高的野葛花，也為促進(jìn)藥材原材料使用規(guī)范化，本文通過比較測定不同花期的野葛花的主要成分總黃酮、花青素以及總多酚的含量，為野葛花這一藥用資源的進(jìn)一步規(guī)范化開發(fā)與應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗材料

野葛材料屬懷化學(xué)院生物園人工栽培品種.于2014年7～8月采摘花蕾期（花被未張開）、盛花期（花朵綻放，花被片張開角度最大）和終花期（花朵凋零，凋落在地）的野葛花，并及時將各花期樣品洗凈后，40－50℃干燥至恒重，粉碎，過60目篩得葛花粉末，備用.

1.2 方法

1.2.1 總黃酮含量的測定

1.2.1.1 對照液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

準(zhǔn)確稱取蘆丁對照品20 mg，加85%乙醇30 ml，微熱溶解，加乙醇稀釋至100 ml，搖勻，即0.2 mg/ml的蘆丁對照液.吸取對照液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分別置于25ml試管中，加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml，6 min后，加10%氯化鋁溶液1.0 ml，6 min后，加1.0 mol/LNaOH 10 ml，85%乙醇稀釋至刻度.用蒸餾水作空白，在510 nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），回歸方程為y＝0.4331x－0.0039，R2＝0.9996，其中x為提取液中總黃酮含量（mg/ml），y為吸光值.

1.2.1.2 待測品溶液制備及總黃酮含量測定

參考李勝華等［9］的方法，采用硝酸鋁－亞硝鈉，此色法測定總黃酮含量.準(zhǔn)確稱取不同花期5 g干葛花各3份，加125 ml分析純甲醇，索氏提取法萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，85%乙醇溶液溶解過濾，定容至100ml，即得待測品溶液.量取1ml待測品溶液至25ml試管中，加入5%亞硝酸鈉1 ml，混勻，6 min后加5%氯化鋁1ml，混勻，6 min后加1 mol/LNaOH 10 ml，加85%乙醇至刻度，搖勻，15min后用分光光度法在510 nm波長處測定吸光值，根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線中的回歸方程計算樣品中總黃酮的含量.

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

式中：c代表樣品中總黃酮的濃度（mg/ml），n代表樣品的稀釋倍數(shù)，w代表干樣品的質(zhì)量（g）.

1.2.2 總多酚含量的測定

1.2.2.1 對照液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

稱取10 mg沒食子酸，定容至100 ml，搖勻作為沒食子酸對照液（0.1 mg/ml）.取1 ml不同濃度沒食子酸對照液，分別加入5ml福林酚試劑，搖勻.反應(yīng)3～8 min，加4 ml7.5%碳酸鈉，加水定容，搖勻.室溫下放置60 min.以蒸餾水作空白，在765 nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），回歸方程為y＝3.8998x＋0.0081，R2＝0.9992，其中x為提取液中總多酚含量（mg/ml），y為吸光值.

圖2 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2.2 待測品溶液制備及總多酚含量測定

參考?xì)W陽玉祝等［10］的方法，采用福林－酚（Folin－ciocalteu）法測定野葛花提取液中的總多酚含量.取樣品1 ml于25 ml試管內(nèi)，加入5 ml福林酚試劑，搖勻，按上述方法測定吸光值.根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算樣品中總多酚的含量.設(shè)置3次重復(fù)，取平均值.

1.2.3 花青素含量的測定

1.2.3.1 對照液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

稱取兒茶素對照品20mg，70%乙醇定容至100ml，搖勻，即為0.2 mg/ml的兒茶素對照液.吸取對照液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分別置于25 ml試管中，依次加入6 ml 4%的香草醛－甲醇溶液和3 ml濃鹽酸，搖勻，30±1℃避光條件下反應(yīng)15 min后，70%的乙醇定容至25 ml，以70%乙醇代替樣品溶液作空白對照，500 nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3），回歸方程為y＝0.0323x－0.0001，R2＝0.9995，其中x為提取液中花青素含量（mg/ml），y為吸光值.

圖3 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.3.2 待測品溶液制備及花青素含量測定

參考鮑俊竹［11］的方法，使用香草醛－甲醇溶液和鹽酸等試劑，采用分光光度法測定花青素的含量.量取1 ml樣品液稀釋，同上方法依次加入同樣藥品處理，測定吸光度，根據(jù)兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算樣品中花青素的含量.設(shè)置3次重復(fù)，取平均值.

2 結(jié)果與分析

野葛花3個不同時期包括花蕾期、盛花期和終花期的總黃酮、花青素和總多酚含量如圖4所示.本實(shí)驗結(jié)果表明，野葛花中總黃酮、花青素和總多酚含量在不同的花期差異較大，從花蕾期到終花期，總黃酮、花青素和總多酚的含量均呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢.在盛花期野葛花中總黃酮、花青素和總多酚含量均達(dá)到最高，分別為1.61%、2.12%和4.11%，顯著高于花蕾期和終花期（P＜0.05），花蕾期和終花期時總黃酮含量和花青素含量沒有顯著性差異（P＞0.05），而總多酚含量在花蕾期時顯著高于終花期（P＜0.05）.

圖4 不同花期野葛花的總黃酮、花青素和總多酚含量

3 結(jié)論與討論

野葛花主要成分為黃酮類化合物，還含有皂苷類化合物、花青素、總多酚、揮發(fā)油、無機(jī)元素等.黃酮類化合物不僅數(shù)量種類繁多，而且結(jié)構(gòu)類型復(fù)雜多樣，對哺乳動物和其它類型的細(xì)胞具有許多重要的生理、生化作用，是許多中草藥的有效成分.研究表明，不同植物種類在不同花期時體內(nèi)有效成分含量存在顯著差異［12－14］.本研究表明，野葛花的總黃酮、花青素和總多酚含量在不同花期存在一定差異，其中盛花期時這三種成分含量都達(dá)到最高值.與不同花期狀態(tài)下的金銀花（Lonicera japonica Thunb）［12］、白玉蘭（Michelia alba DC）［13］、玉蘭（Magnolia denudata Desr.）［14］等中的總黃酮含量和總多酚含量測定的結(jié)果基本一致，這可能與生物合成過程中酶的含量有關(guān).也有研究表明，植物液泡中的花青素合成受外部環(huán)境因素的刺激，包括光照、低溫、紫外線A、紫外線B、缺水、蔗糖等，外部因素誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)，進(jìn)而激活花青素合成途徑中結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)［15］.因而推測野葛花在不同花期，它的狀態(tài)不一，盛花期的花朵張開的最大，即表面積最大，接受外界環(huán)境的刺激最大，盛花期的花青素含量最高.

本實(shí)驗結(jié)果表明，不同花期野葛花的總黃酮、花青素和總多酚的含量存在一定差異，其中盛花期時其有效成分含量較高.在用野葛花加工飲料、保健品、藥品等時，建議在盛花期采收，使其總黃酮、花青素和總多酚等有效成分含量達(dá)到最大，提高資源利用率.?

［1］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（4）［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

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Study on the Contents of Total Flavonoids，Anthocyanin and Total Phenols from Flower of Flos Pueraria in Different Florescence

TAN Juan1，2，3，LIU Liang-ke1，2，3，XIEMeng-han1，CHEN Si-xian1
（1.College of Biological and Food Engineering；
2.Key Laboratory of Research and Utilization of Ethnic Medicinal Plant Resources of Hunan Province；
3.Key Laboratory of XiangxiMedicinal Plant and Ethnobotany of Hunan Higher Education，Huaihua University，Huaihua，Hunan 418008）

The contents of total flavonoids，anthocyanin and total phenols from flower of flos pueraria in different florescence had been detected by using the ultraviolet－spectrophotometry，in order to provide the theoretical basis for further developmentand utilization of flos pueraria.The results showed that the content of total flavnoid，anthocyanins and total polyphenolswere different in Flospueraria in different florescence，and in full flowering stage the contentswere the highest，reaching1.61%，2.12%and 4.11%.When extracting the total flavonoids，anthocyanin and total phenols from flower of Flos pueraria，we should choose the full flowering stage for collection.

flos pueraria；florenscence；total flavonoids；anthocyanin；total polyphenols

R282

A

1671－9743（2015）11－0012－03

2015－08－21

民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗室開放項目資助（HHUW2015－13）；湖南省重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項目資助“植物學(xué)”（2011－42）；湖南省大學(xué)生創(chuàng)新性項目資助“葛花提取物對CCl4誘導(dǎo)肝損傷的修復(fù)效果研究”（2014）.

譚娟，1982年生，女，湖南株洲人，講師，研究方向：藥理學(xué).