昆蟲海藻糖與海藻糖酶的特性及功能研究

秦加敏，羅術(shù)東，和紹禹，吳 杰*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，昆明 650201;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，農(nóng)業(yè)部授粉昆蟲生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100093)

世界昆蟲種類繁多，分布廣，幾乎存在于每一個角落，它們生存的環(huán)境不乏高溫、高寒、干燥失水等惡劣的條件，昆蟲之所以能在這樣惡劣的環(huán)境中生存下來，與體內(nèi)海藻糖密切相關(guān)，對許多處于逆境的生命體而言，海藻糖的存在與否意味著生存或死亡(于彩虹等，2008)。海藻糖酶對海藻糖有著重要的分解作用，海藻糖的含量及海藻糖酶的活性對昆蟲的整個生命過程有著重要的影響。鑒于二者在昆蟲體內(nèi)的重要作用，對其進(jìn)行深入的研究顯得十分必要。

1 海藻糖的研究現(xiàn)狀

1.1 海藻糖的特性

海藻糖(Trehalose)，又叫酵母糖，蕈糖，既是一種貯藏性碳水化合物，又是應(yīng)激代謝的重要產(chǎn)物。最初是Wiggers 等于1832年在黑麥的麥角菌中發(fā)現(xiàn)的，它還廣泛存在于微生物、酵母、藻類、低等蕨類植物、昆蟲及無脊椎動物體內(nèi)，尤其在霉菌、蘑菇中含量甚高。海藻糖是由兩個葡萄糖分子經(jīng)半縮醛羧基結(jié)合形成的非還原性二糖(圖1)，白色晶體，熔點(diǎn)高，甜味較弱，無毒無臭，能溶于水、冰醋酸和熱乙醇，不溶于乙醚、丙酮。其結(jié)構(gòu)相當(dāng)穩(wěn)定，它能在細(xì)胞表面形成特殊的保護(hù)膜，有效地保護(hù)生物分子結(jié)構(gòu)，從而能夠使生物體在寒冷、高溫、干燥失水等惡劣條件下有效維持生命活動及生物特征。

圖1 海藻糖的分子結(jié)構(gòu)(李鐳等，2007)Fig.1 The molecular structure of trehalose(Li et al.，2007)

昆蟲是人們最早在動物界發(fā)現(xiàn)有海藻糖存在的生物物種，同時在美洲野蠶Antheraea polyphemus的蛹和沙漠蝗Schistocerca gregaria 中發(fā)現(xiàn)海藻糖，后期的研究發(fā)現(xiàn)海藻糖是昆蟲血淋巴中最主要的糖類物質(zhì)，有“生命之糖”的美譽(yù)，幾乎存在于昆蟲所有的組織和器官中，由于其重要性又有人稱之為“血糖”(于彩虹等，2008)。在昆蟲的整個變態(tài)過程中，海藻糖主要存在于幼蟲到成蟲的發(fā)育階段(唐斌等，2012)。正常狀態(tài)下，昆蟲血液中的葡萄糖濃度很低，昆蟲取食后血液中的葡萄糖濃度會暫時升高，隨即在脂肪體中被合成為海藻糖，然后擴(kuò)散到血淋巴中，經(jīng)分解后為昆蟲生命活動提供能量(王軍娥和劉靜，2009)。

1.2 海藻糖對昆蟲的重要作用

1.2.1 遷飛時的能量供應(yīng)

大多數(shù)昆蟲體內(nèi)儲備的碳水化合物以海藻糖和糖原的形式存在。Evans 等(1957)研究發(fā)現(xiàn)昆蟲飛行過程中海藻糖含量會急劇下降，表明海藻糖可以作為昆蟲飛行時的能量來源。但是昆蟲體內(nèi)儲存的海藻糖只能支持短期的飛行，長期飛行所需的能源，就需要通過脂肪體將各種單糖轉(zhuǎn)變成葡萄糖，合成海藻糖以維持血淋巴中血糖含量，血淋巴中海藻糖濃度決定飛行時的能量利用率(James and Evans，1961;雷朝亮和榮秀蘭，2003)。Zhao 等(2011)研究發(fā)現(xiàn)10 ppm 的吡蟲啉能使雌性褐飛虱Nilaparvata lugens 飛行持續(xù)時間增加140%;40 ppm的三唑磷能使雌性褐飛虱飛行速度增加154%，雄性飛行速度增加73%，飛行距離也明顯提高。深入的研究表明褐飛虱在受到上述低濃度藥劑誘導(dǎo)時，海藻糖含量會升高，使得褐飛虱得到更多的能量支持，從而使得飛行持續(xù)時間和飛行速度均得到一定的增加;還有研究證實(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)(＜80 ppm)，隨著三唑磷濃度的增加，昆蟲體內(nèi)的海藻糖含量逐漸降低，葡萄糖含量卻逐漸升高(Ge et al.，2011)，這也從側(cè)面印證了海藻糖是昆蟲飛行活動中重要的能源物質(zhì)。綜上所述，海藻糖作為昆蟲的血糖，對昆蟲的飛行能量代謝具有重要作用。

1.2.2 取食及抗性方面的作用

海藻糖可以通過濃度的高低調(diào)節(jié)味覺感受器和中樞神經(jīng)系統(tǒng)從而影響昆蟲對食物的選擇和取食行為(Thompson，2003)，還能作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，以保護(hù)昆蟲躲避滲透和熱壓力等惡劣環(huán)境(Wyatt，1967)。亞洲玉米螟Ostrinia furnacalis、棉鈴蟲Helicoverpa armigera、甜菜夜蛾 Spodoptera exigua 等幼蟲進(jìn)入取食階段后隨著齡期的增加，海藻糖酶的活性呈增高趨勢，進(jìn)入化蛹期后海藻糖酶的活性降低，這可能是由于蟲體對能量的需求而增加對海藻糖的水解(于彩虹等，2013)。嗜眠搖蚊Polypedilum vanderplanki 能夠在干燥脅迫條件下通過提高6-磷酸海藻糖合成酶和6-磷酸海藻糖磷酸酯酶的活性，并同時降低海藻糖酶的活性，以大量積聚海藻糖來保護(hù)昆蟲免受干燥條件的迫害(Mitsumasu et al.，2010)。

1.2.3 越冬和滯育方面的作用

在漫長的進(jìn)化過程中，昆蟲受自然環(huán)境的選擇，進(jìn)化出滯育的特性。滯育是指昆蟲受不良環(huán)境影響時生理、生化變化的編碼過程，隨后誘導(dǎo)的發(fā)育停止，滯育幫助昆蟲度過各種不良環(huán)境，從而維持了物種的延續(xù)(劉流等，2010)。

在越冬和進(jìn)入滯育時，海藻糖可被迅速轉(zhuǎn)化成甘油、山梨醇等多元醇，以提高蟲體的抗寒性，保護(hù)昆蟲免受寒冷的迫害，一些昆蟲在-85℃的低溫條件下仍能存活。仵均祥(2004)在研究麥紅吸漿蟲Sitodiplosis mosellana 幼蟲滯育期間糖類物質(zhì)變化時發(fā)現(xiàn)滯育中的昆蟲海藻糖含量一直較高，且不同時期或同一時期不同狀態(tài)的滯育幼蟲海藻糖含量均存在明顯的差異，表明海藻糖是幼蟲滯育過程中重要的貯藏物質(zhì)，同時也說明了海藻糖在幼蟲體內(nèi)易隨幼蟲的狀態(tài)而發(fā)生變化。海藻糖是美鳳蝶Papilio memnon 滯育期間能量代謝的主要物質(zhì)，還可能作為能量貯備用于滯育解除后成蟲的各項(xiàng)生命活動(易傳輝等，2009)。

此外，海藻糖作為昆蟲的血糖對于開放式循環(huán)系統(tǒng)極其有利。因?yàn)樯锬Ｔ逄蔷哂胁煌ㄍ感裕芊乐估ハx腸壁滲漏，有效保證昆蟲對糖類的吸收及代謝調(diào)節(jié);海藻糖的滲透壓效應(yīng)小，便于在血漿中貯存和運(yùn)輸;其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)比較穩(wěn)定，一般不受專一性酶轉(zhuǎn)葡基作用的影響，不會干擾昆蟲開放式循環(huán)系統(tǒng)中正常的生化過程和其他物質(zhì)(雷朝亮和榮秀蘭，2003)。

1.3 海藻糖的合成與分解

1.3.1 海藻糖合成途徑

目前已在不同的生物體中發(fā)現(xiàn)5種合成海藻糖的途徑(Becker et al.，1996;崔淑燕，2008;郭春磊，2011;李源等，2013)，分別是以葡萄糖為底物的TPS-TPP 途徑、TreY-TreZ 途徑、以麥芽糖為底物的TreS 途徑、以ADP-葡萄糖為底物的TreT 途徑、TreP 途徑(海藻糖磷酸化酶途徑)。但研究最主要的是TPS-TPP 途徑，在6-磷酸海藻糖合成酶(TPS)的催化作用下，尿苷二磷酸(UDP)葡萄糖和6-磷酸葡萄糖合成6-磷酸海藻糖(Tre6P)，然后在6-磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP)的作用下發(fā)生去磷酸化生成海藻糖。這個合成途徑在大多數(shù)生物體內(nèi)都有報道，包括酵母、昆蟲及植物，是目前已知的昆蟲體內(nèi)海藻糖合成最主要的途徑。反應(yīng)式如下:

1.3.2 海藻糖分解代謝

對昆蟲海藻糖的研究表明，昆蟲體內(nèi)的海藻糖濃度會根據(jù)環(huán)境條件的不同，生理狀態(tài)和營養(yǎng)情況的差異而發(fā)生變化。與海藻糖的合成相似，在不同生物體內(nèi)有 4種不同的分解途徑(Arguelles，2000;任媛媛等，2003)，但它不被一般的酶水解，海藻糖酶是昆蟲體內(nèi)唯一能夠水解海藻糖的酶，因而海藻糖酶在昆蟲體內(nèi)具有重要的作用。一般而言，海藻糖在海藻糖酶的催化作用下，將1 分子海藻糖水解為2 分子的葡萄糖，然后參與體內(nèi)的糖酵解途徑生成丙酮酸，進(jìn)而參與三羧酸循環(huán)，最終氧化生成CO2和水，這也是海藻糖最普遍的降解途徑(圖2)。其代謝過程如下:

圖2 海藻糖的分解及代謝途徑Fig.2 Catabolism and metabolic pathways of trehalose

2 海藻糖酶的研究現(xiàn)狀

2.1 海藻糖酶的特性

海藻糖水解酶，又稱海藻糖酶，國際酶學(xué)編號為(EC:3.2.1.28)，首先是在1893年由Bourquelot 在黑曲霉中發(fā)現(xiàn)的，廣泛存在于微生物、植物、昆蟲和哺乳動物中。海藻糖酶由海藻糖酶基因Trehalase 編碼，以兩種不同形式存在于昆蟲組織中，一種是可溶型海藻糖酶Tre-1;另一種是膜結(jié)合型海藻糖酶Tre-2。Tre-1 是1992年最先在黃粉蟲Tenebrio molitor 中被克隆出來的第一個由海藻糖酶基因編碼的海藻糖酶，主要存在于消化系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)中(Takiguchi et al.，1992)，在腸道、馬氏管、卵巢和唾液腺等部位表達(dá)(Raman et al.，2013;Tan et al.，2014;Wang et al.，2014)。Su 等(1994)遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)蟬中腸可溶型海藻糖酶與卵巢膜結(jié)合型海藻糖酶來自同1個遺傳子;于彩虹等(2013)研究發(fā)現(xiàn)亞洲玉米螟O.furnacalis 等幼蟲隨著日齡的增加，海藻糖酶活性呈現(xiàn)增加趨勢，不同昆蟲各組織海藻糖酶的活性有明顯差異;這項(xiàng)研究為我國開展農(nóng)業(yè)害蟲海藻糖酶方面的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。Tre-2 是2005年在家蠶Bombyx mori 中獲得的第一個海藻糖酶基因編碼的海藻糖酶，主要存在于肌肉中(Mitsumasu et al.，2005)，在飛行肌肉相關(guān)組織、腸道、馬氏管、脂肪體、腦組織、卵巢和唾液腺中都有表達(dá)(Santos et al.，2012;Wang et al.，2014)。該基因包含一個20個氨基酸的跨膜區(qū)域，而Tre-1 則不存在跨膜區(qū)。最近，陳靜等(2013)、Tan 等(2013)利用同源克隆及RACE 技術(shù)，從白背飛虱Sogatella furcifera、綠盲蝽Apolygus lucorum 中克隆獲得膜結(jié)合型海藻糖酶基因，為研究其在昆蟲體內(nèi)的表達(dá)與生物學(xué)功能奠定了良好基礎(chǔ)。目前已在多種昆蟲中克隆獲得這兩種海藻糖酶基因，它們所編碼的蛋白具有2個“標(biāo)簽序列”PGGRFREFYYWDSY 和QWDYPNAW PP 及一個甘氨酸富集區(qū)(GGGGEY)(Lee et al.，2007;Tang et al.，2008;Chen et al.，2010;Forcella et al.，2012;劉 曉 健 等，2012;Raman et al.，2013)。

海藻糖酶是昆蟲體內(nèi)重要的糖酶，存在于昆蟲幾乎所有的組織中，海藻糖酶把1 分子的海藻糖水解為2 分子的葡萄糖，用于組織細(xì)胞的糖酵解，為各組織器官提供能量，使昆蟲的各項(xiàng)生命活動得以維持和發(fā)展。

2.2 海藻糖酶在昆蟲中的作用

2.2.1 海藻糖酶對昆蟲能量代謝的調(diào)控作用

早在20 世紀(jì)60年代，張清剛(1964)在研究蓖麻蠶變態(tài)期間代謝作用時就發(fā)現(xiàn)血淋巴和脂肪體中糖代謝與海藻糖酶活力變化之間存在一定的聯(lián)系。近年來很多研究表明大量昆蟲飛行、肌肉劇烈運(yùn)動所需的能量由能源物質(zhì)海藻糖和糖原代謝產(chǎn)生，當(dāng)海藻糖酶活性受到抑制時，海藻糖酶催化海藻糖分解的過程也會受到抑制，昆蟲的各種能量供應(yīng)及血糖的濃度都會受到制約(Asano，2003;唐斌等，2012)。還有研究表明一些殺蟲劑亞致死劑量能夠增強(qiáng)褐飛虱體內(nèi)海藻糖酶活性，有效促進(jìn)海藻糖的降解(Ge et al.，2011;趙克非，2011)。相反，岡霉亞基胺A、井岡霉素A 及海藻唑啉(trehazolin)等能夠有效抑制海藻糖酶的活性(范柯琴等，2009;Liebla et al.，2010)，致使以海藻糖為能源物質(zhì)的能量供應(yīng)受到抑制。

2.2.2 海藻糖酶在昆蟲幾丁質(zhì)合成中的調(diào)控作用

海藻糖酶還能抑制昆蟲幾丁質(zhì)的合成，進(jìn)而影響昆蟲的生長發(fā)育。Tre-1 對于昆蟲表皮中幾丁質(zhì)的合成、碳水化合物的攝取以及體內(nèi)營養(yǎng)的動態(tài)平衡具有重要意義，對昆蟲表皮的幾丁質(zhì)合成影響更大;Tre-2 則主要影響中腸的幾丁質(zhì)合成以及生長發(fā)育過程(張文慶等，2011)。Chen等(2010)揭示了兩種不同類型海藻糖酶對甜菜夜蛾生長發(fā)育過程中幾丁質(zhì)合成功能的影響，當(dāng)用Tre-1 的RNA 感染片段干擾后，昆蟲幾丁質(zhì)合成酶A 基因的表達(dá)和幼蟲表皮幾丁質(zhì)的含量受到顯著影響，表現(xiàn)為影響甜菜夜蛾幼蟲到蛹的蛻皮變態(tài);而Tre-2 則在蛹到成蟲的發(fā)育階段中具有重要作用，主要表現(xiàn)為影響幾丁質(zhì)合成酶B 基因的表達(dá)和幼蟲中腸幾丁質(zhì)含量。魏蘋(2013)對赤擬谷盜Tribolium castaneum 的5個海藻糖酶基因進(jìn)行單個基因的RNA 干擾后，發(fā)現(xiàn)大量基因表達(dá)下降，TcTre1-1 通過調(diào)節(jié)幾丁質(zhì)的合成通路對其生長進(jìn)行調(diào)控，其他4個基因都是通過調(diào)節(jié)能量通路對其發(fā)揮作用。由此可見，海藻糖酶是昆蟲表皮幾丁質(zhì)合成通路中一個重要的酶。

2.2.3 海藻糖酶在昆蟲滯育中的作用

海藻糖酶是昆蟲滯育激素調(diào)控代謝過程中的關(guān)鍵酶，昆蟲滯育期間海藻糖酶活性的下降保證了海藻糖在昆蟲體內(nèi)的累積，使其安全度過滯育期的不良環(huán)境。家蠶海藻糖酶基因是一種非組織特異性表達(dá)基因，可以在卵巢、中腸、馬氏管和脂肪體等多種組織中表達(dá)，其表達(dá)受滯育激素(DH)的誘導(dǎo)調(diào)控，DH 通過心側(cè)體、咽側(cè)體釋放到血淋巴中，誘導(dǎo)卵巢中海藻糖酶基因的表達(dá)，家蠶卵母細(xì)胞通過位于膜內(nèi)的海藻糖酶，將血液中海藻糖降解成葡萄糖，然后吸收到細(xì)胞內(nèi)，最后合成糖原，從而誘導(dǎo)蠶卵滯育，而在其他組織中滯育激素對海藻糖酶的活性沒有影響(Ikeda et al.，1993;Su et al.，1997)。隨后，趙巧玲(2003)從海藻糖酶基因的分子水平上對家蠶滯育機(jī)理也進(jìn)行了探索。種種研究都表明，海藻糖酶對昆蟲的滯育過程具有重要的作用。

此外，海藻糖酶活性受抑制后，會影響昆蟲生殖腺和生殖細(xì)胞的發(fā)育，因此昆蟲的生殖能力也會被抑制，還會導(dǎo)致昆蟲變態(tài)時的異常(Wegener et al.，2010)。Kamei(2011)研究還發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)家蠶膜結(jié)合型海藻糖酶的活性能夠有效促進(jìn)滯育激素誘導(dǎo)卵巢產(chǎn)生滯育卵，利于提高抗寒性。

3 展望

海藻糖是昆蟲體內(nèi)重要的血糖，是能量的主要供給者，在昆蟲的各種生理活動和行為中具有重要的作用。海藻糖酶是唯一能水解海藻糖的酶，是當(dāng)前昆蟲學(xué)界的一個研究熱點(diǎn)，一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)通過抑制海藻糖酶的活性能引發(fā)昆蟲“低血糖癥”，以達(dá)到殺死害蟲或防治病害的效果。近年來，許多生物學(xué)家致力于研究海藻糖合成酶及海藻糖酶抑制劑，掌握它們在害蟲變態(tài)過程中產(chǎn)生的一些影響，試圖阻斷生物體內(nèi)海藻糖的合成和分解來達(dá)到控制害蟲和殺菌的目的(范柯琴等，2009;Tatun et al.，2009;Liebl et al.，2010;Wegener et al.，2010)，不久的將來完全有可能研制出高效、低毒、特異性強(qiáng)、低污染的新型生物農(nóng)藥。人們對海藻糖酶的研究不限于此，張倩等(2012)、陳靜等(2010)利用飼喂法RNAi 研究海藻糖酶基因dsRNA 時，發(fā)現(xiàn)dsRNA 可明顯影響昆蟲的蛻皮變態(tài)，抑制海藻糖酶的活性，還能顯著抑制昆蟲的生長，大幅度增加死亡率;譚永安等(2013)在克隆獲得綠盲蝽海藻糖酶基因的基礎(chǔ)上構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒，并成功在大腸桿菌中高效表達(dá)，經(jīng)純化后獲得重組蛋白。這些研究為開發(fā)防治害蟲、篩選合適的轉(zhuǎn)基因植物候選基因及海藻糖酶分子調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

隨著國內(nèi)外人們對昆蟲海藻糖和海藻糖酶生理功能的研究，進(jìn)一步認(rèn)識到海藻糖的利用、濃度的變化以及海藻糖酶的活性深深影響著昆蟲的生長發(fā)育、能量代謝、取食行為、蛻皮過程幾丁質(zhì)合成、抗逆和滯育等重要生理活動。但對于傳粉類昆蟲海藻糖酶的研究主要集中在蜜蜂屬蜜蜂海藻糖酶的純化、水解機(jī)制以及基因克隆等方面(Lee et al.，2001;Cardona et al.，2010;Forcella et al.，2010)，海藻糖酶對蜜蜂的生長發(fā)育和授粉行為方面的影響很少報道，對設(shè)施農(nóng)業(yè)的主要傳粉昆蟲海藻糖和海藻糖酶的研究則沒有相關(guān)的報道。鑒于海藻糖酶在昆蟲體內(nèi)的重要作用，研究授粉昆蟲海藻糖酶對于改進(jìn)其繁育技術(shù)、提高一些瀕危植物的授粉效率、維持生態(tài)系統(tǒng)的多樣性具有重要意義。但是，海藻糖酶在授粉昆蟲生長發(fā)育過程中有何重要的功能還有待進(jìn)一步研究。

References)

Arguelles JC.Physiological role of trehalose in bacteria and yeasts:a comparative analysis［J］.Archives Microbiology，2000，174(4):217-224.

Asano N.Glycosidase inhibitors:update and perspectives on practical use［J］.Glycobiology，2003，13(10):93-104.

Becker A，Schl?der P，Steele JE，et al.The regulation of trehalose metabolism in insects［J］.Birkh?user Verlag Basel，1996:433-439.

Cardona F，Goti A，Parmeggiani C，et al.Casuarine-6-O-alpha-D-glucoside and its analogues are tight binding inhibitors of insect and bacterial trehalases［J］.Chemical Communications，2010，46:2629-2631.

Chen J，Tang B，Chen HX，et al.Different functions of the insect soluble and membrane-bound trehalase genes in chitin biosynthesis revealed by RNA interference［J］.PLoS One，2010，5:e10133.

Chen J，Zhang JH，Guo YS，et al.Cloning and bioinformatics analysis of Treh-2 gene from Sogatella furcifera［J］.Journal of Northeast Agricultural University，2013，44(5):1-4.［陳靜，張建華，郭玉雙，等.白背飛虱海藻糖酶Treh-2 基因克隆及生物信息學(xué)分析［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013，44(5):1-4］

Chen J，Zhang WQ.Functional analysis of membrane-bound trehalase gene of Nilaparvata lugens by RNA interference［OL］.［陳靜，張文慶.褐飛虱膜結(jié)合型海藻糖酶基因的RNAi 研究［OL］.［2010-08-05］.http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201008-80］

Cui SY.Research progress of trehalose metabolism in insects［J］.Journal of Anhui Agricultural Sciences，2008，36(23):9998-9999.［崔淑燕.昆蟲中海藻糖代謝的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(23):9998-9999］

Evans DR，Dethier VG.The regulation of taste thresholds for sugars in the blowfly［J］.Insect Physiology，1957，1:3-17.

Fan KQ，Jin LQ，Zheng YG.The enzymatic properties of trehalase and its exploitation as a target of new pesticides［J］.Chemistry and Bioengineering，2009，26(4):7-11.［范柯琴，金利群，鄭裕國.海藻糖酶的酶學(xué)特性及其作為新農(nóng)藥靶標(biāo)的開發(fā)應(yīng)用［J］.化學(xué)與生物工程，2009，26(4):7-11］

Forcella M，Cardona F，Goti A，et al.A membrane-bound trehalase from Chironomus riparius larvae:purification and sensitivity to inhibition［J］.Glycobiology，2010，20:1186-1195.

Forcella M，Mozzi A，Bigi A，et al.Molecular cloning of soluble trehalase from Chironomus riparius larvae，its heterologous expression in Escherichia coli and bioinformatic analysis［J］.Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2012，81(2):77-89.

Ge LQ，Zhao KF，Huang LJ，et al.The effects of triazophos on the trehalose content，trehalase activity and their gene expression the brown planthopper Nilaparvata lugens(St?l)(Hemiptera:Delphacidae)［J］.Pesticide Biochemistry and Physiology，2011，100(2):172-182.

Guo CL.TheFunctional Analysis of Trehalose Phosphorylase TRP in Arabidopsis under Salt Stress［D］.Kaifeng:Master's thesis of Henan University，2011.［郭春磊.鹽脅迫下擬南芥海藻糖磷酸化酶TRP 的功能分析［D］.開封:河南大學(xué)碩士學(xué)位論文，2011］

Ikeda M，Su Z，Satito H，et al.Induction of embryonic and stimulation of ovary trehalsase activity in the silkworm，Bombyx mori［J］.Insect Physiology，1993，39:889-895.

James SC，Evans DR.Blood and flight metabolism in the blowfly［J］.Science，1961，134(3471):54-55.

Kamei Y，Hasegawa Y，Niimi T，et al.Trehalase-2 protein contributes to trehalase activity enhanced by diapausehormone in developing ovaries of the silkworm，Bombyx mori［J］.Insect Physiology，2011，157(5):608-613.

Lee JH，Saito S，Mori H，et al.Molecular cloning of cDNA for trehalase from the European honeybee，Apis mellifera，and its heterologous expression in Pichia pastoris［J］.Bioscience，Biotechnology and Biochemistry，2007，71(9):2256-2260.

Lee JH，Tsuji M，Nakamura M，et al.Purification and identification of the essential ionizable group of honeybee，Apis mellifera，trehalase［J］.Bioscience，Biotechnology and Biochemistry，2001，65:2657-2665.

Lei ZL，Rong XL.General Entomology［M］.Beijing:China Agriculture Press，2003，222-223，252-253.［雷朝亮，榮秀蘭.普通昆蟲學(xué)［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2003，222-223，252-253］

Li L，Ding HB，Yu XB，et al.Enzymatic synthesis of trehalose and genetic engineering research［J］.Biotechnology Bulletin，2007，3:80-83.［李鐳，丁宏標(biāo)，余曉斌，等.海藻糖酶法合成途徑及其酶基因的重組表達(dá)研究［J］.生物技術(shù)通報，2007，3:80-83］

Li Y，Hao YJ，Zhang YJ，et al.Cloning，bioinformatics analysis and diapause-related expression of trehalose-6-phosphate synthase gene fromthe onion maggot，Delia antiqua(Diptera:Anthomyiidae)［J］.Acta Entomologica Sinica，2013，56(4):329-338.［李源，郝友進(jìn)，張玉娟，等.蔥蠅海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滯育相關(guān)表達(dá)［J］.昆蟲學(xué)報，2013，56(4):329-338］

Liebla M，Nelius V，Kamp G，et al.Fate and effects of the trehalase inhibitor trehazolin in the migratory locust(Locusta migratoria)［J］.Journal of Insect Physiology，2010，56:567-574.

Liu L，He LF，Liu H，et al.Research progress of insects diapause［J］.Journal of Anhui Agricultural Sciences，2010，38(14):7409-7411.［劉流，賀莉芳，劉暉，等.昆蟲滯育的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(14):7409-7411］

Liu XJ，Zhang HH，Li DQ，et al.Sequence characterization and mRNA expression profiling of a soluble trehalase gene in Locusta migratoria(Orthoptera:Acrididae)［J］.Acta Entomologica Sinica，2012，55(11):1264-1271.［劉曉健，張歡歡，李大琪，等.飛蝗可溶型海藻糖酶基因的序列分析及mRNA 表達(dá)特［J］.昆蟲學(xué)報，2012，55(11):1264-1271］

Mitsumasu K，Azuma M，Niimi T，et al.Membrane-penetrating trehalase from silkworm Bombyx mori，Molecular cloning and localization in larval midgut［J］.Insect Molecular Biology，2005，14(5):501-508.

Mitsumasu K，Kanamori Y，F(xiàn)ujita M，et al.Enzymatic control of anhydrobiosis-related accumulation of trehalose in the sleeping chironomid Polypedilum vanderplanki［J］.The FEBS Journal，2010，277:4215-4228.

Raman B，Rouf MA，Omprakash M，et al.Molecular characterization and expression analysis of soluble trehalase gene in Aphis glycines，a migratory pest of soybean［J］.Bulletin of Entomological Research，2013，103:286-295.

Ren YY，Liu JF，Dai XY，et al.Genes involved in biosynthes is and metabolism of trehalose and their use in biotechnology［J］.Acta Microbiologica Sinica，2003，43(6):821-825.［任媛媛，劉景芳，戴秀玉，等.海藻糖代謝途徑相關(guān)基因及生物工程［J］.微生物學(xué)報，2003，43(6):821-825］

Santos R，Alves BM，Rosas OR，et al.Gene identification and enzymatic properties of a membrane-bound trehalase from the ovary of Rhodnius prolixus［J］.Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2012，81(4):199-213.

Su Z，Ikeda M，Saito Y，et al.Molecular characterization of ovary trehalase of the silkworm Bombyx mori and its transcriptional activation by diapause hormone［J］.Biochimica Biophysica Acta，1994，1218:366-374.

Su ZH，Ikeda M，Sato Y，et al.Structure of trehalase gene of the silkworm，Bombyx mori and phylogenic relationship of trehalases［J］.Sericulture Science of Japan，1997，66:457-464.

Takiguchi M，Niini T，Su Z，et al.Trehalase from male accessory gland of an insect，Tenebrio molitor cDNA sequencing and developmental profile of the gene expression［J］.Biochemistry Journal，1992，288:19-22.

Tan YA，Xiao LB，SunY，et al.Prokaryotic expression，purification and functional activity assay in vitro of soluble trehalse from Apolygus lucorum［J］.Scientia Agricultura Sinica，2013，46(17):3587-3593.［譚永安，肖留斌，孫洋，柏立新.綠盲蝽水溶性海藻糖酶ALTre-1 基因原核表達(dá)純化與酶學(xué)特性［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46(17):3587-3593］

Tan YA，Xiao LB，Bai LX，et al.Expression，purification and enzymatic activity of a membrane-bound trehalse gene from Apolygus lucorum［J］.Cotton Science，2013，25(5):396-402.［譚永安，肖留斌，柏立新，孫洋.綠盲蝽膜結(jié)合型海藻糖酶AlTre-2 基因表達(dá)、純化及酶學(xué)特性［J］.棉花學(xué)報，2013，25(5):396-402］

Tan YA，Xiao LB，Sun Y，et al.Molecular characterization of soluble and membrane-bound trehalases in the cotton mirid bug，Apolygus lucorum［J］.Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2014，86(2):107-121.

Tang B，Chen XF，Liu Y，et al.Characterization and expression patterns of a membrane-bound trehalase from Spodoptera exigua［J］.BMC Molecular Biology，2008，9:51.

Tang B，Wei P，Chen J，et al.Progress in gene features and functions of insect trehalases［J］.Acta Entomologica Sinica，2012，55(11):1315-1321.［唐斌，魏蘋，陳潔，等.昆蟲海藻糖酶的基因特性及功能研究進(jìn)展［J］.昆蟲學(xué)報，2012，55(11):1315-1321］

Tatun N，Singtripop T，Osugi S，et al.Possible involvement of proteinaceous and non-proteinaceous trehalase inhibitors in the regulation of hemolymph trehalose concentration in Bombyx mori［J］.Applied Entomology and Zoology，2009，44(1):85-94.

Thompson SN.Trehalose-the insect‘blood' sugar［J］.Advance in Insect Physiology，2003，31:205-285.

Wang J，He WB，Su YL，et al.Molecular characterization of soluble and membrane-bound trehalases of the whitefly，Bemisia tabaci［J］.Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2014，85(4):216-233.

Wang JE，Liu J.Research progress of insect trehalase［J］.Guizhou Agricultural Sciences，2009，37(4):88-90.［王軍娥，劉靜.昆蟲海藻糖酶的研究進(jìn)展［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(4):88-90］

Wegener G，Macho C，Schl?der P，et al.Long-term effects of the trehalase inhibitor trehazolin on trehalase activity in locust flight muscle［J］.Indian Journal of Experimental Biology，2010，213:3852-3857.

Wei P.Regulation function of trehalase in pathway of energy metabolism and chitin biosynthesis in Tribolium castaneum revealed by RNA interference［D］.Hangzhou:Master's thesis of Hangzhou Normal University，2013.［魏蘋.赤擬谷盜海藻糖酶基因調(diào)節(jié)幾丁質(zhì)合成及能量代謝的功能研究［D］.杭州:杭州師范大學(xué)碩士學(xué)位論文，2013］

Wu JX，Yuan F，Su L.Change of carbohydrate contents in larvae of the wheat midge，Sitodiplosis mosellana(Gehin)during mature and diapause stage［J］.Acta Entomologica Sinica，2004，47(2):178-183.［仵均祥，袁鋒，蘇麗.麥紅吸漿蟲幼蟲滯育期間糖類物質(zhì)變化［J］.昆蟲學(xué)報，2004，47(2):178-183］

Wyatt GR.The biochemistry of sugars and polysaccharides in insect［J］.Insect Physiology，1967，4:287-360.

Yi CH，Chen XM，Shi JY，et al.Study on changes of contents of carbohydrate and fat in Papilio memnon during diapause stage［J］.Journal of Anhui Agricultural Sciences，2009，37(12):5516-5517，5558.［易傳輝，陳曉鳴，史軍義，等.美鳳蝶滯育期間糖類物質(zhì)與脂肪含量變化研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(12):5516-5517，5558］

Yu CH，Huang Y，Lin RH，et al.Comparative tests of soluble trehalase activitives of five insects［J］.Plant Protection，2013，39(4):5-9.［于彩虹，黃瑩，林榮華，等.五種昆蟲可溶性海藻糖酶活性比較［J］.植物保護(hù)，2013，39(4):5-9］

Yu CH，Lu D，Lin RH，et al.Trehalose-the blood sugar in insects［J］.Chinese Bulletin of Entomology，2008，45(5):832-837.［于彩虹，盧丹，林榮華，等.海藻糖——昆蟲的血糖［J］.昆蟲知識，2008，45(5):832-837］

Zhang Q，Lu DH，Pu J，et al.Cloning and RNA interference effects of trehalase genes in Laodelphax striatellus(Homoptera:Delphacidae)［J］.Acta Entomologica Sinica，2012，55(8):911-920.［張倩，魯鼎浩，蒲建，等.灰飛虱海藻糖酶基因的克隆及RNA 干擾效應(yīng)［J］.昆蟲學(xué)報，2012，55(8):911-920］

Zhang QG，Liu F，F(xiàn)eng H.Metabolism in abnormal period in Philosamia cynthia［J］.Acta Entomologica Sinica，1964，13(4):494-502.［張清剛，劉芳，馮慧.蓖麻蠶在變態(tài)期間代謝作用的研究［J］.昆蟲學(xué)報，1964，13(4):494-502］

Zhang WQ，Chen XF，Tang B，et al.Insect chitin biosynthesis and its regulation［J］.Chinese Journal of Applied Entomology，2011，48(3):475-479.［張文慶，陳曉菲，唐斌，等.昆蟲幾丁質(zhì)合成及其調(diào)控研究前沿［J］.應(yīng)用昆蟲學(xué)報，2011，48(3):475-479］

Zhao KF，Ge LQ，Cheng Y，et al.Effects of three insecticides on trehalose content and trehalase activity in the brown planthopper，Nilaparvata lugens(St?l)(Homoptera:Delphacidae)［J］.Acta Entomologica Sinica，2011，54(7):786-792.［趙克非，戈林泉，程耀，等.三種殺蟲劑對褐飛虱海藻糖含量和海藻糖酶活性的影響［J］.昆蟲學(xué)報，2011，54(7):786-792］

Zhao KF，Shi ZP，Wu JC.Insecticide-induced enhancement of flight capacity of the brown planthopper Nilaparvata lugens(St?l)(Hemiptera:Delphacidae)［J］.Crop Protection，2011，30:476-482.

Zhao QL，Zhang ZF，He JL.Cloning and bioinformatics analysis of the 5'-flanking region of trehalase genes in wild silkworm and Bombyx mori［J］.China Sericulture，2003，4:91-93.［趙巧玲，張志芳，何家祿.野生蠶、家蠶海藻糖酶基因5'側(cè)翼區(qū)的克隆與序列分析［J］.中國蠶業(yè)，2003，4:91-93］