新疆維吾爾族患者CYP2C9和VKORC1基因多態性分布及不同種族間的比較Δ

安琳娜，曹紅，林筱琦（新疆醫科大學第一附屬醫院藥學部，烏魯木齊830054）

華法林為口服抗凝藥，可廣泛用于血栓栓塞性疾病。大量研究表明，CYP2C9和VKORC1基因多態性是影響華法林維持劑量的主要遺傳因素[1]。CYP2C9是人體重要的代謝酶，攜帶CYP2C9*2或CYP2C9*3突變基因的患者比攜帶CYP2C9*1的患者應給予更低的華法林維持劑量[2-3]。VKORC1是維生素K依賴性凝血因子生成過程的限速酶，華法林可通過抑制該酶而產生抗凝作用。研究表明，該基因與華法林的劑量相關，CYP2C9和VKORC1的基因變異頻率在不同人群中差異較大[1]。在本研究中筆者對新疆維吾爾族患者CYP2C9和VKORC1的基因多態性進行了研究，以為建立適合此類患者的華法林個體化給藥模型提供研究基礎。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選取2011年7月－2014年6月我院住院的無血緣關系的維吾爾族患者200例，入院后開始服用華法林。排除標準：肝、腎血清白蛋白水平異常；充血性心力衰竭；服用阿司匹林、氯吡格雷及維生素K等影響國際標準化比值（INR）的藥物；入組前3周服用過利福平；進食不佳；妊娠期或哺乳期婦女。本研究方案經我院醫學倫理委員會批準，所有患者均簽署了知情同意書。

1.2 藥品與儀器

華法林鈉片，規格：2.5 mg/片，生產廠家：上海信誼九福藥業；血液基因組DNA提取試劑盒、華法林敏感性基因檢測試劑盒、聚合酶鏈式反應擴增儀、e-Hyb全自動雜交儀、BE-2.0生物芯片識讀儀均由上海百傲科技股份有限公司提供。

1.3 研究方法

1.3.1 DNA提取方法 采集所有患者術前2 d外周靜脈血2 ml，加入乙二胺四乙酸-k2抗凝，置－20℃冰箱保存。使用血液基因組DNA提取試劑盒快速提取基因組DNA，置－20℃保存。采用基因芯片法檢測CYP2C9基因和VKORC1基因的基因型。

1.3.2 用藥方法 所有患者于每日16：00時口服華法林，起始劑量為2.5 mg/d，3 d后根據INR調整用藥劑量。

1.4 觀察指標

觀察患者CYP2C9和VKORC1基因型及等位基因頻率分布、不同種族人群基因型及等位基因頻率分布。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析。采用頻數計數法計算各基因型及等位基因頻率。采用R×C列表的χ2檢驗比較不同種族間基因型頻率及基因頻率之間的差異。所有統計檢驗均為雙側概率檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者基本資料

本研究共納入患者200例，其中男性89例，女性111例；年齡19～77歲，平均44.02歲；身高147～185 cm，平均167.27 cm；體質量47～88 kg，平均66.23 kg。

2.2 CYP2C9基因型及等位基因頻率分布

200例患者中，CYP2C9基因型以*1/*1最為多見，*3/*3基因型頻率較低，未發現*2/*2和*2/*3突變型，結果詳見表1。

表1 CYP2C9基因型及等位基因頻率分布Tab 1 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of CYP2C9

2.3 VKORC1基因型及等位基因頻率分布

200例患者中，VKORC1-1639G＞A基因型以AA型較為多見，GG型較少；VKORC1-1173C＞T基因型以TT型較為多見，CC型較少，-1639G＞A與-1173C＞T兩個多態性位點呈現完全連鎖不平衡，結果詳見表2。

表2 VKORC1基因型及等位基因頻率分布Tab 2 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of VKORC1

2.4 不同種族CYP2C9基因型及等位基因頻率分布

新疆維吾爾族*1/*1基因型頻率低于中國漢族、日本、韓國、美國，高于土耳其（P＜0.05），與瑞典、英國比較差異無統計學意義（P＞0.05）；*1/*2雜合突變型頻率低于土耳其、瑞典、英國，高于中國漢族、日本、韓國（P＜0.05），與美國比較差異無統計學意義（P＞0.05）；*1/*3雜合突變型頻率高于中國漢族、日本、韓國、英國、美國（P＜0.05），與土耳其、瑞典比較差異無統計學意義（P＞0.05）；未檢出*2/*2、*2/*3基因型；*3/*3基因頻率高于上述人群（P＜0.05）。新疆維吾爾族*1等位基因頻率明顯低于中國漢族、日本、韓國、美國，高于土耳其（P＜0.05），與瑞典、英國比較差異無統計學意義（P＞0.05）；*2等位基因高于中國漢族、日本、韓國，低于土耳其、瑞典、英國（P＜0.05），與美國比較差異無統計學意義（P＞0.05）；*3等位基因高于中國漢族、日本、韓國、瑞典、英國和美國（P＜0.05），與土耳其比較差異無統計學意義（P＞0.05），結果詳見表3。

2.5 不同種族VKORC1基因型及等位基因頻率分布

表3 不同種族CYP2C9基因型及等位基因頻率分布（%）Tab 3 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of CYP2C9 in different ethnic populations（%）

新疆維吾爾族AA基因型頻率高于美國、瑞典、英國，低于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡；AG型頻率明顯高于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡，與美國、瑞典、英國比較差異無統計學意義（P＞0.05）；GG型頻率高于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡，低于美國、瑞典、英國；新疆維吾爾族A型等位基因低于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡，高于美國、瑞典、英國；G型等位基因高于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡，明顯低于美國、瑞典、英國（P＜0.05），詳見表4。

表4 不同種族VKORC1基因型及等位基因頻率分布（%）Tab 4 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of VKORC1 in different ethnic populations（%）

3 討論

華法林已被廣泛用于血栓栓塞性疾病或有血栓栓塞高危的患者，目前臨床尚無其他抗凝藥物可代替華法林。由于華法林治療窗窄，其治療劑量非常接近發生抗凝過量的劑量，但維持劑量個體間差異大，其劑量范圍可能為0.5～10 mg/d。華法林藥物基因組學的研究解釋了華法林個體差異存在的原因，與華法林作用通路相關的基因變異都可能會影響華法林的穩定維持劑量，CYP2C9和VKORC1基因的多態性是影響華法林維持劑量的主要遺傳因素。

本研究結果顯示，CYP2C9基因型以*1*1最為多見，*3/3基因型頻率較低，未發現*2/*2和*2/*3突變型；與世界其他地區人群相比，*1/*2雜合突變型頻率低于土耳其、瑞典、英國，高于中國漢族、日本、韓國；*1/*3雜合突變型頻率高于中國漢族、日本、韓國、英國、美國。這表明，CYP2C9基因多態性分布具有顯著的地區和種族差異，攜帶CYP2C9*2或CYP2C9*3突變等位基因的患者需要降低華法林維持劑量。因此，如果不考慮其他基因因素，僅考慮CYP2C9基因型，新疆維吾爾族患者服用華法林時，可能需要比亞洲其他地區人群更低的給藥劑量。

本研究結果還顯示，VKORC1-1639A/G的AA、AG、GG基因型頻率與VKORC1-1173T/C的TT、TC、CC基因型頻率完全一致。這表明，在今后的研究中，只需對其中一個位點進行檢測。此外，新疆維吾爾族AA型頻率高于美國、瑞典、英國，低于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡；AG型頻率高于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡；GG型頻率高于中國漢族、中國臺灣、日本、新加坡，低于美國、瑞典、英國。有研究表明，在不考慮其他變異基因的影響下，GG基因型患者所需華法林劑量最高，AG基因型劑量次之，AA基因型最低[13]。因此，如果不考慮其他基因因素，僅考慮VKORC1基因型，新疆維吾爾族患者服用華法林時，可能需要比亞洲其他人群更高的給藥劑量。

綜上所述，建議臨床有必要在探討CYP2C9和VKORC1基因對華法林維持劑量和抗凝治療效果影響的同時，考慮藥物基因組學、人口學特征和臨床資料等因素，建立新疆維吾爾族患者華法林個體劑量預測模型，以更精確地評估不同患者的用藥劑量，減少華法林劑量調整時間，降低治療初始階段因華法林過量而導致的嚴重出血風險。

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