云南省某大學新生中嗜吞噬細胞無形體感染的血清流行病學調查

崔宇暉王艷紅宣 群楊志芬何瑞云柳愛華寶福凱▲

1.昆明醫科大學熱帶醫學研究所 病原生物學與免疫學系，云南昆明 650500；2.昆明醫科大學校醫院，云南昆明650500；3.昆明醫科大學生物化學與分子生物學系，云南昆明 650500

云南省某大學新生中嗜吞噬細胞無形體感染的血清流行病學調查

崔宇暉1△王艷紅1宣 群1楊志芬2何瑞云2柳愛華3▲寶福凱1▲

1.昆明醫科大學熱帶醫學研究所 病原生物學與免疫學系，云南昆明 650500；2.昆明醫科大學校醫院，云南昆明650500；3.昆明醫科大學生物化學與分子生物學系，云南昆明 650500

目的 評估云南省某大學新生嗜吞噬細胞無形體的感染情況，間接了解人嗜粒細胞無形體感染在云南省的發生情況。 方法 采集來自云南滇中、滇東北兩地區于某大學新生血樣標本，用間接熒光免疫法檢測Anaplasma phagocytophilum IgG抗體，計算抗體陽性率。 結果 共檢測大學新生血清標本45份，檢出嗜吞噬細胞無形體血清 IgG抗體陽性7份，其中滇中4份，滇東北3份，陽性率為15.56%。 結論 云南省存在人感染嗜吞噬細胞無形體的情況，滇中地區學生的抗體陽性率與滇東北地區無統計學差異，應進一步加強對人嗜粒細胞無形體病的監測與控制。

嗜吞噬細胞無形體；人嗜粒細胞無形體病；大學新生；云南省

人粒細胞無形體病（HGA）是由嗜吞噬細胞無形體（Anaplasma phagocytophilum）感染引起的新發蜱傳人獸共患病，主要臨床表現包括發熱、頭痛、疲勞，白細胞、血小板減少，肝酶輕度增高等[1]。本病廣泛分布于世界熱帶和亞熱帶地區，在南北美洲、非洲、南歐、澳大利亞、中東等地流行，是美國第二大流行的蜱傳播疾病[2]。傳統認為無形體只感染動物，早在1952年英國科學家Foggie等報道了無形體引起牛、羊感染，經蜱傳染的病原體命名為嗜吞噬細胞埃立克體（ehrlichia phagocytophilum）[3]。20世紀90年代后，無形體病流行區擴大，并有人類發病的情況。此時期，第1例人粒細胞無形體病由美國報道[4]。后來發現嗜吞噬細胞無形體對人致病的情況，該病的臨床表現無明顯特異性，可出現發燒、肌肉痛、頭痛、嗜睡、關節痛、白細胞減少以及血液學的異常等。主要傳播媒介為蜱蟲，在美國以肩突硬蜱和太平洋硬蜱為主；在歐洲和亞洲，以篦子硬蜱和全溝硬蜱為主；我國以全溝硬蜱為主[5]。2006年，我國在安徽省首次發現人嗜吞噬細胞無形體病的病例[3-6]。最近研究顯示我國吉林、青海、湖南、甘肅、貴州、河南等8省均有嗜吞噬細胞無形體感染人的情況[7]。2009年邊長玲等[8]檢測西南地區小型獸類嗜吞噬細胞無形體基因，發現云南香格里拉雪山等林區小型獸類標本無形體檢出陽性率為4.44%，證明了當地野生動物攜帶有無形體。此實驗對云南某大學新生中進行了血清流行病學調查，以明確云南地區嗜吞噬細胞無形體感染人類的情況，間接了解人嗜吞噬細胞無形體病在云南省的分布情況。

1 材料與方法

1.1 調查對象

選擇云南某大學入學（2008年9月）的本省新生45人，入學體檢行外周靜脈采集血液樣本，分離血清樣本于-20℃保存。按地理位置分為滇中、滇東北兩組，各組樣本數分別為19、26份。滇中地區包括玉溪、昆明、楚雄；滇東北地區包括曲靖和昭通。

1.2 試劑

Focus Technilogies HGA IFA IgG Test Kit購自美國FOCUS公司（Cypress CA USA。REF IF1450G）。

1.3 實驗設備

微量移液器（BIOHIT公司）；NW Ultra-pure Water System（Heal Force公司）；SC-316立式冷藏柜（青島海爾特種電冰柜有限公司）；BC/BD-519HAN臥式冷藏冷凍轉換柜（青島海爾特種電冰柜有限公司）；隔水式電熱恒溫培養箱（上海市躍進醫療器械一廠）；立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）；熒光顯微鏡NIKON90i（尼康公司）。

1.4 方法

采用間接熒光免疫法，測定檢測對象血清中嗜吞噬細胞無形體IgG抗體。操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，陰性、陽性對照均設復孔，置于熒光顯微鏡下觀察。

2 結果

2.1 Anaplasm phagocytophi IgG檢測結果的判斷方法

顯微鏡的光學系統、光源條件和類型決定了整個熒光強度和端點滴度。按說明書以如下標準讀取每個加樣孔中桑椹胚的熒光強度和等級見圖1。（1）陽性：中度到強度的蘋果綠色熒光的桑椹胚。（2）陰性：無熒光或熒光相當于陰性對照的強度。

圖1 嗜吞噬細胞無形體IgG抗體間接熒光免疫檢測示例

2.2 嗜吞噬細胞無形體IgG檢測結果

本次試驗共檢測45份云南籍新生血清標本，IgG抗體陽性7份，抗體陽性率為15.56%。其中滇中地區陽性4份；滇東北的陽性3份（表1）。

2.3 滇中與滇東北地區陽性率的比較

滇中與滇東北地區某大學入學新生無形體陽性率的比較，用Prism6.0軟件做方差分析，差異無統計學意義（P＞0.05）。尚不能認為滇東北地區比滇中地區的發病率高。結果見表1。

表1 云南省部分地區新生嗜吞噬細胞無形體IgG抗體間接熒光免疫檢測果及兩地陽性率的比較

3 討論

本實驗對嗜吞噬細胞無形體特異性IgG抗體檢測，獲得滇中、滇東北入學新生IgG血清陽性率分別為16.67%和14.09%。上述感染率略高于天津的農村普通人群感染率8.8%[9]，以及程周祥[10]提出的與死亡病例（首例患者）病后有過密切接觸的人員感染率14.3%等。但低于福建北部林區人群感染率17.1%[11]，以及近來報道的新疆和碩、石河子、博樂3個地區人群IgG血清陽性率分別為42.6%、35.2%、56.0%[12]。該病的發生受多種因素的影響，如蜱蟲的分布、密度與種群類別，云南是典型的立體氣候分布地區，熱帶、亞熱帶地區占全省很大比例，植物覆蓋率高，利于蜱蟲的生長繁殖。目前，普通人群對蜱蟲傳播疾病缺少了解，防護意識低，對人嗜吞噬細胞無形體病臨床表現認識不夠，治療不及時，延長感染窗口期，也會影響嗜吞噬細胞無形體的感染情況。該實驗目前僅是一個初步實驗，實驗標本數量仍有不足，后續實驗有待改善。本實驗進一步證明云南省存在嗜吞噬細胞埃立克體感染人的情況。關于HGA在云南省的流行特征和疫源地性質，有待進一步研究。

熱帶蟲媒傳染病遠距離傳播的情況越來越常見，一些熱帶蟲媒傳染病在東南亞嚴重流行。云南是典型的立體氣候分布地區，熱帶、亞熱帶地區占全省很大比例。加之有漫長的國境線，國外傳染病容易傳入。隨著云南改革開放力度加大、橋頭堡建設提速，以及面對全球氣候變暖，新發和再發熱帶蟲媒傳染病有隨時暴發的可能[13]。熱帶蟲媒傳染病不僅危害人類健康，而且給發展中國家和地區的畜牧業、旅游業造成毀滅性打擊，造成極大的經濟損失。所以，我們必須重視和加強對新發和再發熱帶蟲媒傳染病的預防和控制[14]。

[1] 張麗娟.中國嗜吞噬細胞無形體及無形體病研究進展[J].疾病監測，2014，29（5）：409-414.

[2] Aureli S，Foley JE，Galuppi R，et al. Anaplasma phagocytophilum in ticks from parks in the Emilia-Romagna region of northern Italy [J]. Vet Ital，2012，48 （4）：413-423.

[3] 寶福凱，柳愛華，施明.人類無漿體病的臨床表現診斷和治療研究進展[J].中國熱帶醫學，2009， 9（12）：2322-2324.

[4] Kiewra D，Zaleny G，Czuowska A. The prevalence of Anaplasma phagocytophilum in questing Ixodes ricinus ticks in SW Poland[J].Pol J Microbiol，2014，63（1）：89-93.

[5] 寶福凱，柳愛華，馬海濱.人類無漿體病的病原學和流行病學研究[J].熱帶醫學雜志，2008，8（11）：1193-1195.

[6] Zhang L，Liu H，Xu B，et al. Rural residents in China are at increased risk of exposure to tick-borne pathogens Anaplasma phagocytophilum and Ehrlichia chaffeensis[J]. Biomed Res Int，2014，2014：313867.

[7] Hao Q，Geng Z，Hou XX，et al.Seroepidemiological investigation of Lyme Disease and Human Granulocytic Anaplasmosis among people living in forest areas of eight provinces in China[J].Biomed Environ Sci，2013，26（3）：185-189.

[8] 邊長玲，龔正達，張麗云，等.中國西南橫斷山區小型獸類嗜吞噬細胞無形體基因的檢測及序列測定[J].中華流行病學雜志，2009，20（12）：1277-1280.

[9] Zhang LJ，Shan AL，Mathew B，et al.Rickettsial seroepidemiology among farm workers Tianjin people’s republic of China[J].Emerg Infect Dis，2008，14（6）：938-940.

[10] 程周祥，楊小祥，李群，等.皖南地區2006年一起人傳“粒細胞無形體病”疫情的流行病學特征[J].中華疾病控制雜志，2009，13（1）：4-7.

[11] 林光宇，張守印，謝克錦，等.福建省北部林區人群人粒細胞無形體血清流行病學檢測[J].中國人獸共患病學報，2008，24（12）：1179-1180.

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[14] Coker RJ，Hunter BM，Rudge JW，et al.Emerging infectious diseases in southeast Asia： regional challenges to control[J]. Lancet，2011，377（9765）：599-609.

Serological seroepidemiological investigation of Anaplasma phagocytophilum in newly-enrolled college students in yunnan province

CUI Yuhui1WANG Yanhong1XUAN Qun1YANG Zhifen2HE Ruiyun2LIU Aihua3BAO Fukai1
1.Department of Pathogen Biology and Immunology,the Insitute for Tropical Medicine,Kunming Medical University,Kunming 650500,China; 2.Hospital for Staff and Students, Kunming Medical University, Kunming 650500,China; 3.Department of Biochemistry and Molecular Biology,Kunming Medical University, Kunming 650500,China

Objective To assess the prevalence and characterization of Anaplasma phagocytophilum infection in new college students from two regions of Yunnan province. Methods Serum samples were collected from newlyenrolled college students, The IgG antibody against Anaplasm phagocytophilum in samples was detected with indirect immunofluorescence assay, positive rates were calculated. Results The total 45 newly-enrolled college students from two regions of Yunnan Province were enrolled in this study. The positive rate of A. phagocytophilum IgG was 15.56%. The positive rate of central region of Yunnan was 16.67%. The positive rate of northeast region of Yunnan was 14.09%. Conclusion There are Anaplasma phagocytophilum infection cases in Yunnan province. The positive rate of A. phagocytophilum IgG from two regions was insignificance. The surveillance, prevention and control for Human granulocytic anaplasmosis (HGA) should be strengthened.

Anaplasma phagocytophilum; Human granulocytic anaplasmosis; Newly-enrolled college students; Yunnan province

R978

A

2095-0616（2015）07-214-03

2014-11-27）

國家自然科學基金項目（81060134，81371835）；云南省自然基金項目（2007C069M）。

△昆明醫科大學2012級碩士研究生

▲通訊作者