堿性成纖維細胞生長因子和轉化生長因子-β與病理性近視的相關研究

李雯霖何愛群卓 曉林海波陳慕丹

1.深圳市龍華新區中心醫院，廣東深圳 518000；2.深圳市兒童醫院，廣東深圳 518000

堿性成纖維細胞生長因子和轉化生長因子-β與病理性近視的相關研究

李雯霖1，2何愛群1卓 曉1林海波1陳慕丹1

1.深圳市龍華新區中心醫院，廣東深圳 518000；2.深圳市兒童醫院，廣東深圳 518000

目的 探討病理性近視患者bFGF和TGF-β的表達水平。 方法 對我院門診就診的病理性近視患者、非病理性近視患者和正常對照組的bFGF和TGF-β的表達水平進行檢測，探討其在病理性近視患者和非病理性近視患者中的表達強度。 結果 與正常對照組比較，病理性近視和非病理性近視患者血中bFGF表達明顯低于正常對照組，而這兩組患者血中TGF-β的表達明顯高于正常對照組，差異具有統計學意義（P＜0.01）。 結論 bFGF和TCF-β可能在病理性近視的發生發展過程序中發揮著一定的作用。

堿性成纖維細胞生長因子；轉化生長因子β；病理性近視

病理性近視（pathological myopia，PM）是指屈光度在-6.00D以上的一種變性近視。流行病學研究結果表明，在世界范圍內，病理性近視的患病率為1.7%～2.1%，無論是東亞國家還是西方人群，病理性近視的發病率都有明顯增加[1]。我國近視人口數已超過3億，其中病理性近視的發病率約為1%。隨著病理性近視的不斷發展，常常發生特征性的眼后極部改變，包括視網膜下或脈絡膜新生血管膜[2]、Fuchs斑、近視性黃斑病變[3]，后鞏膜葡萄腫、漆樣裂紋等病變，亦可發生白內障、青光眼、視網膜脫離和玻璃體混濁等多種并發癥，是導致眼視功能損害的重要原因之一。因此對病理性近視的防治已引起眼科同仁的高度重視。為從根本上防治病理性近視，減少病理性近視的發生，揭示病理性近視的發生機制已成為目前眼科醫師需要迫切解決的問題。本課題擬研究病理性近視的患兒血清中堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor， bFGF）和轉化生長因子β（transforming growth factor，TGF-β)的水平，從而初步探討bFGF和TGF-β在病理性近視發病中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月～2014年12月收集病理性近視患者50例，符合病理性近視的診斷標準，非病理性近視患者50例，正常對照組50例，為雙眼視力正常，無屈光不正兒童。兩組對照組年齡與患者組匹配。

1.2儀器與試劑

bFGF和TG-β均采用酶聯免疫吸附法（ELISA）進行檢測。ELISA 檢測試劑盒購置于晶美生物公司。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。細胞因子單位為pg/mL。

1.3方法1.3.1 標本采集 實驗組和對照組均常規采集外周靜脈血8mL，其中2mL用于分離血清，-80℃凍存備用。6mL用肝素抗凝，用于分離外周血單個核細胞。

1.3.2采用ELISA法檢測血中bFGF和TGF-β的表達水平 細胞裂解儀上裂解實驗組和對照組細胞。將裂解液低溫高速離心，上清液分裝，-20℃保存待用。ELISA法檢測血中TGF-β和bFGF含量。操作按試劑盒說明書，具體步驟如下：（1）包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/mL。每個聚本乙稀板的反應孔中加0.1mL，4℃過夜，次日棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3min。（2）加樣：加一定稀釋的上清液0.1mL于上述已包被的反應孔中，置37℃孵育1h，然后洗滌，同時做對照組。（3）加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體0.1mL，37℃孵育1h，然后洗滌。（4）加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配置的TMB底物溶液0.1mL，37℃孵育30min。（5）終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05mL。（6）檢測結果：在ELISA檢測儀上，450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值2.1倍，即為陽性。

1.4統計學處理

采用SPSS16.0統計軟件包進行統計學分析。計量資料以表示，進行t檢驗和方差分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2　結果

血中bFGF和TGF-β的表達：與正常對照組比較，病理性近視和非病理性近視患者血中bFGF表達明顯低于正常對照組，而這兩組患者血中TGF-β的表達明顯高于正常對照組，差異具有統計學意義（P＜0.01）。見下表1。

表1　bFGF和TGF-β在血清中的表達水平

表1　bFGF和TGF-β在血清中的表達水平

組別　bFGF　TGF-β病理性近視組　103.28±14.87　142.81±10.75非病理性近視組　203.18±11.27　76.59±10.11正常對照組　269.68±15.56　4.37± 0.21 F 96.72　148.65 P 0.00　0.00

3　討論

病理性近視發生、發展機制至今尚未完全明了。近年來關于近視的實驗研究發現，在誘導近視發生的雞眼內，鞏膜及視網膜組織的bFGF和TGF-β水平發生變化，并影響體外培養的雞鞏膜成纖維細胞和軟骨細胞的增殖。這些結果表明，一定濃度的bFGF和TGF-β可能影響雞的實驗性近視眼的發生，bFGF、TGF-β可能作為信號分子參與了近視的發生和發展[4-5]。bFGF作為成纖維細胞生長因子家族中的重要一員，能促進多種細胞的生長、增殖和分化，并具有維持神經元存活及神經營養、調控細胞凋亡、促進成纖維細胞增殖改善傷口愈合[6]等多種生物學作用。bFGF還參與細胞外基質的形成，可誘導基質金屬蛋白酶的表達，促進血管生成[7-9]。

TGF-β家族成員包括TGF-β1，TGF-β2和TGF-β3三種類型，是一類具有調節細胞增殖、分化、和遷移的多功能細胞因子[10]，TGF-β對細胞的生長、分化具有雙向調節作用[11]。研究發現TGF-β參與免疫反應和損傷修復等重要的病理生理過程，是細胞外基質的調節因子，可增強膠原的合成，減少基質的降解，從而導致細胞外基質的沉積[12]，影響免疫系統介導的促炎或抗炎反應[13]，促進骨折愈合[10]。

bFGF和TGF-β是怎樣影響實驗性近視？Rohrer等[14]研究發現，bFGF可能通過神經遞質的相互作用在與眼生長相關的神經通路中影響突觸的活性或傳遞而在近視的發生發展過程中發揮作用。Seko等[15]在形覺剝奪性的近視研究表明bFGF在FDM眼后極部鞏膜組織的含量明顯低于對照組，而與對照組比較在鞏膜組織和視網膜—視網膜色素上皮—脈絡膜復合體中TGF-β2含量明顯增加，表明TGF-β2可能在高度近視的發展過程中起著重要作用[16]。Mao J等[4]在雞的形覺剝奪性近視的研究表明玻璃體腔注射bFGF除了能有效改善近視眼眼軸的過度生長，還能顯著降低視網膜神經細胞凋亡的數量和下調caspase-3活性。Chen等[5]對豚鼠實驗性近視模型的研究發現，后極部鞏膜組織的TGF-β2含量明顯增加，隨著實驗性近視誘導時間的延長，TGF-β2含量在眼球所有鞏膜組織中均增加，于此相反，bFGF的含量在所有鞏膜組織中均普遍下降。這些結果表明，在近視發展過程中TGF-β2可能直接對近視的發展產生作用，而bFGF可能間接影響近視的發生

本研究是以臨床病理性近視患者和非病理性近視患者作為研究對象，與正常對照組比較，病理性近視患者和非病理性近視患者血中bFGF明顯低于正常對照組，而TGF-β的表達明顯高于正常對照組，差異具有統計學意義（P＜0.01），表明我們對臨床患者的研究與上述實驗研究結果一致，因此我們推測bFGF和TGF-β在人類近視尤其是病理性近視的發生發展中可能起著重要作用，但其作用機制還有待進一步研究。

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The related research on bFGF and TGF-β with pathological myopia

LI Wenlin1，2HE Aiqun1ZHUO Xiao1LIN Haibo1CHEN Mudan1
1.Department of Ophthalmology，Shenzhen Longhua New District Central Hospital,Shenzhen 518000,China; 2.Department of Ophthalmology,Shenzhen Children Hospital,Shenzhen 518000,China

Objective To explore the expression of bFGF and TGF-β and the relationship with pathological myopia. Methods The level of bFGF and TGF-β were detected in patients with pathological myopia and nonpathological myopia and healthy controls. Results The expression level of bFGF were lower in patients with pathological myopia than non-pathological myopia andhealthy controls,and the expression level of TGF-β were higher in patients with pathological myopia than non-pathological myopia and healthy controls,the difference was significant(P＜ 0.01). Conclusion Conclusion bFGF and TGF-β may play a certain role in the occurrence and development of pathological myopia.

Basic fibroblast growth factor(bFGF );Transforming growth factor-β(TGF-β);Pathological myopia

R329

B

2095-0616（2015）10-192-03

廣東省深圳市科技計劃項目（201302104）。

（2015-03-23）