乙肝患者HBsAg 定量與乙肝病毒DNA定量及谷丙轉氨酶水平的相關性研究

張衛云，任廣立，伍令燦，孫朝暉，李林海

廣州軍區廣州總醫院a.檢驗科；b.兒科；廣東 廣州 510010

全球約有20 億人曾感染過乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV），其中3.5億人為慢性HBV感染者，幾乎一半在中國。我國作為乙型肝炎的高感染區，嚴重威脅著人們的身體健康。急性乙肝中有20%會轉為慢性，進而可能發展為肝硬化和肝癌。因此，準確、迅速的診斷對乙肝的療效和預后極為重要。HBV對肝功能的損害機制非常復雜[1-2]，臨床中常將外周血中HBV-DNA含量作為病毒復制活躍最可靠和直接的指標[3]，其高低能直接反映肝炎患者的病毒水平；而常常將血清中谷丙轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）水平作為反映肝細胞功能的指標，因為通常此酶在肝細胞漿內含量最為豐富，當肝炎病毒損害肝細胞時其從胞漿內釋放到血清中，使血清中的含量升高[4]。本研究探討乙型肝炎患者血清中乙肝表面抗原（HBsAg）定量與HBV-DNA 定量及ALT 水平的相關性，旨在為進一步研究HBC 復制、感染性及臨床抗病毒的治療提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 研究對象

收集廣州軍區廣州總醫院2014年10月至12月乙肝患者血清124 例，檢測HBsAg、HBV-DNA 及ALT的血清水平。患者平均年齡為39.6±13.4歲，同時排除其他疾病的干擾。

1.2 研究方法

HBsAg 定量采用化學發光法檢測，儀器為雅培公司的i-2000 全自動化學發光儀，試劑為原裝配套試劑，操作過程嚴格按照SOP文件執行。HBV-DNA定量采用實時熒光定量PCR 法檢測，儀器為美國Bio-Rad PCR 儀，試劑盒購于上海科華生物科技有限公司，血清HBV-DNA陽性（＞500拷貝/mL）作為病毒復制的標準。血清ALT 采用日立7600 全自動生化分析儀檢測，試劑采用廣州科方生物技術有限公司提供的試劑盒。

根據HBsAg 水平把乙肝患者分成3 組，即≤1000 IU/mL 組、1000～10 000 IU/mL 組和≥10 000 IU/mL 組。按照HBV-DNA 含量的高低分成4組，即≤500 拷貝/mL（Ⅰ級）組、500～104拷貝/ml（Ⅱ級）組、104～106拷貝/mL（Ⅲ級）組和≥106拷貝/ml（Ⅳ級）組。根據ALT 水平分成3 組，即≤40 U/L 組、41～100 U/L組和＞100 U/L組。

1.3 統計學方法

采用Excel軟件建立數據庫，應用SPSS19.0統計學軟件對數據進行統計學處理。差異性比較兩組資料時采用t檢驗，多組采用χ2分析，相關分析采用Spearman。

2 結果

2.1 乙型肝炎患者HBsAg 定量與ALT 水平的相關分析

124例乙型肝炎患者HBsAg 定量與ALT水平的統計結果見表1。經檢驗，χ2=0.918＜9.49（χ20.05，4），P＞0.05，3 組不同HBsAg 水平的患者血清ALT 含量無顯著性差異。經Spearman 秩相關檢驗，等級相關系數為0.117（P=0.195），說明患者血清HBsAg 水平與ALT含量無明顯的相關關系。

2.2 乙型肝炎患者HBsAg 定量與HBV-DNA 含量的相關分析

124 例乙型肝炎患者HBsAg 定量與HBV-DNA含量的統計結果見表2。經檢驗，χ2=23.85＞22.46（χ20.001，6），P＜0.001,說明HBsAg 水平與患者血清HBV-DNA 含量有相關性。經Spearman 秩相關檢驗，等級相關系數為0.286（P＜0.01），表明乙肝患者血清HBsAg 水平與HBV-DNA 含量存在正相關關系，即HBsAg含量越高，HBV-DNA水平越高。

表1 124例HBV患者HBsAg定量與ALT水平分組結果

2.3 乙型肝炎患者HBV-DNA含量與ALT水平的相關分析

124 例乙型肝炎患者HBV-DNA 含量與ALT 水平的統計結果見表3。經檢驗，χ2=22.89＞22.46（χ20.001，6），P＜0.001，說明HBV-DNA含量與患者血清ALT 水平有相關性。經Spearman 秩相關檢驗，等級相關系數為0.387（P＜0.01），表明乙肝患者的血清HBV-DNA 含量與ALT 水平存在正相關關系，即HBV-DNA含量越高，ALT水平越高。

表2 124例HBV患者HBsAg定量與HBV-DNA含量分組結果

表3 124例HBV患者HBV-DNA含量與ALT水平分組結果

3 討論

血清HBsAg、HBV-DNA 含量和ALT 水平都是反映乙肝患者肝功能的重要指標。HBsAg主要反映機體的乙肝感染狀態；HBV-DNA 含量能直接而真實地體現機體內乙肝病毒復制程度和傳染性；ALT主要存在于肝細胞漿中，是反映肝損害極為敏感的生化指標[5]，當大量肝實質細胞損傷時，肝細胞膜的通透性增大，使血清中的ALT水平顯著升高，因此其血清水平的改變能反映肝損傷程度，同時也能反映機體對HBV的免疫強度。

本研究選取124 例HBsAg 定量檢測陽性標本，檢測其HBV-DNA 含量和ALT 水平，分析HBsAg 與HBV-DNA 和ALT 的相關性。研究發現，乙肝患者的血清HBsAg 水平與ALT 含量無明顯的相關性，等級相關系數為0.117（P=0.195）；而HBsAg 與HBVDNA 含量存在正相關關系，等級相關系數為0.286（P＜0.01）；同時HBV-DNA 含量與ALT 存在正相關性，等級相關系數為0.387（P＜0.01）。乙肝患者的血清HBsAg 水平與ALT 含量的相關性不明顯，可能與患者免疫狀態存在差異或抗病毒治療相關，因此單獨用HBsAg 水平判定肝細胞的損害程度須慎重[6]。乙肝病毒進入被感染的肝細胞后立即在細胞中不同部位開始裂解復制，產生許多病毒“零件”：含有DNA 和酶類的核心，病毒的外殼。外殼有3 種顆粒形式，一是含有外膜和核衣殼的完整病毒粒子，稱作Dane（丹氏）顆粒，直徑45 nm；二是由空心包膜組成的球形顆粒，直徑20 nm，其含量一般要超過Dane顆粒10 000～1 000 000倍；三是少量由空心包膜構成的管狀顆粒，直徑20 nm，斷裂后可形成小球形顆粒[7]。3種病毒外殼顆粒都有共同的HBV表面抗原，外殼的數量總比核心的數量要多，過剩的病毒外殼釋放到血液中，以小球形或管形顆粒的形式存在于血液中并隨之循環，這些小顆粒就是在血清中檢查到的表面抗原。由此可見，HBsAg 含量受HBVDNA 翻譯為外殼蛋白質的量和肝臟組織釋放乙肝病毒外殼的數量的影響，即與HBV-DNA 的含量有相關性，與本次研究相符。肝臟細胞不被破壞，同樣可大量釋放乙肝病毒外殼（即HBsAg），所以乙肝患者的血清HBsAg 水平與ALT 含量無明顯的相關性。定量檢測血清中的HBV-DNA含量主要來自兩部分，一為肝細胞分泌的完整乙肝病毒，二為機體清除乙肝病毒的同時啟動了宿主針對HBV 的免疫應答，造成肝細胞的破壞而釋放的大量乙肝病毒，所以HBV-DNA 含量與ALT 水平存在相關性受機體的免疫狀態影響。

由表1 可見，124 例HBsAg 定量陽性中HBVDNA定量陰性的有55例，占44%，這表明雖然HBVDNA 定量檢測提示病毒復制已得到抑制，但它不足以反映表面抗原的清除[8]。HBV-DNA 陰性時肝功能正常可以說明病情處于較為穩定的階段，表示乙肝病毒復制不活躍，處于低復制或不復制的狀態。另外，由于肝臟組織中的乙肝病毒每時每刻釋放到血液中的數量都在變化之中，每天檢測血液中的乙肝病毒核酸含量也不盡相同。其次，HBV-DNA 的定量采用了實時熒光PCR 檢測法，最低檢測限只有500 拷貝/mL，如果服用抗病毒藥物，可抑制HBVDNA 的復制，而由于HBV-DNA 整合到肝細胞基因組中，不影響其翻譯蛋白質外殼，使血清中HBVDNA含量小于500拷貝/mL，同樣導致HBsAg定量陽性而HBV-DNA 陰性的結果。有文獻報道，HBV 基因的S區發生有意義的點突變或插入、缺失突變，亦可導致PCR結果陰性[9]。

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[2]李偉,宋秀軍,陳舒,等.HBV-DNA與血清標記物及ALT之間的關系[J].中華疾病控制雜志,2010,14(11):1167-1168.

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[4]胡旭,劉紅霞,任東方.乙型肝炎病毒感染患者的聯合檢測臨床意義[J].中華醫院感染學雜志,2014,24(15):3890-3892.

[5]王元,朱亞洲,種瑩,等.乙肝患者血清的HBV-DNA 含量與ALT 水平的關系研究[J].現代生物醫學進展,2014,14(29):5735-5737.

[6]曹軍皓,黃前川.乙型肝炎病毒外膜大蛋白與病毒復制及肝臟受損的相關性[J].現代檢驗醫學雜志,2012,27(3):148-150.

[7]裴彥禎,韓濤,馬曉艷,等.HBsAg及HBV DNA定量水平在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中的變化[J].中華肝臟病雜志,2014,10(3):743-746.

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