貴州黑山羊FSHR 基因與繁殖性狀相關性研究

王玉金 劉杏

（山東省蒙陰縣畜牧獸醫局276200）

貴州黑山羊FSHR 基因與繁殖性狀相關性研究

王玉金 劉杏

（山東省蒙陰縣畜牧獸醫局276200）

本研究通過探討FSHR基因SNP與貴州黑山羊繁殖性狀關聯性。試驗采用PCR-SSCP技術檢測FSHR基因單核苷酸多態性。結果發現，貴州黑山羊FSHR基因外顯子1檢測到1個SNP位點C1412A。基因型與繁殖性狀關聯分析顯示，貴州黑山羊FSHR基因AA基因型個體產羔數顯著高于與AC和CC基因型個體（P＜0.05）。研究結果提示：FSHR基因可能是影響山羊產羔數的主效基因。

FSHR；基因；關聯性；繁殖性狀；貴州黑山羊

促卵泡素是垂體前葉分泌的一種調控動物繁殖活動的糖蛋白質激素，能促進卵泡的生長發育和分化成熟。由于促卵泡素是大分子，不能透過細胞膜直接發揮其生理作用。因此，FSH的生理作用是通過與特異性受體促卵泡素受體（Follicle stimulating hormone receptor，FSHR）結合來發揮生物學活性[1]。對FSHR基因5'端調控區[2]和第10外顯子[3]的多態性研究表明，FSHR的多態性對動物的產羔（仔）數有重要的影響。國內外對動物和人的FSHR基因有許多報道，但對于貴州黑山羊FSHR基因多態性的研究尚未見報道。本試驗采用PCR-SSCP及PCR產物直接測序技術對FSHR基因在貴州黑山羊的多態性位點進行檢測，以探尋FSHR基因多態性與產羔數之間的相關性，為進一步研究貴州黑山羊繁殖性狀的遺傳機制提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

試驗均采集具有前3胎產羔記錄的貴州黑山羊102只采自貴州省黔西縣。

1.2 主要實驗試劑

Ezup柱式血液基因組DNA抽提試劑盒，聚丙烯酰胺凝膠，瓊脂糖凝膠，2xEs TaqMasterMix，DM2000，Buffer1 xTBE緩沖液均購自貴州鼎國生物工程有限公司。

1.3 引物設計與合成

根據NCBI中GenBank數據庫中綿羊FSHR（登錄號：NC_019460.1）基因序列進行引物設計。利用Primier-BLAST在線軟件設計特異性引物，引物信息見表1。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

表1 引物相關信息

1.4 SSCP分型及測序

PCR反應程序為95℃3min；34個循環（95℃30s，表 1溫度 30s，72℃30min）； 72℃延伸 5min； 4℃保存。PCR 反應體系為 20μL： 2×Taq PCR Master Mix10μL，DNA 模板 2μL，上、下游引物各1.5μL，加水至20μL。SSCP所需PCR產物用10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。取5μLPCR產物于1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。選擇條帶單一的PCR產物送交北京諾賽基因組研究中心有限公司進行雙向測序。用DNAStar軟件對序列結果進行校正，BLAST分析確定SNPs。

2 結果與分析

2.1 PCR-SSCP分型及測序

在貴州黑山羊FSHR-T引物所擴增的PCR產物分別進行SSCP分析，結果顯示擴增序列在貴州黑山羊樣品中均出現3種帶型，純合型定義為AA型和CC型，雜合型定義為AC型（圖1）。

圖1 PCR-SSCP電泳圖譜

選擇貴州黑山羊不同基因型個體PCR產物送交公司測序，通過SepMan程序分析測序結果并比對，在FSHR基因第10外顯子1412bp發生突變，突變前后均未引起氨基酸的改變。

2.2 FSHR基因多態性與繁殖性狀關聯性分析

由表2可知，在貴州黑山羊試驗群體中，AA基因型與AG和GG基因型差異顯著（P＜0.05），而AG基因型與GG基因型差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

圖2 多態位點測序峰圖

目前，對FSHR基因第1和10外顯子多態性與動物繁殖性能的研究表明，這些多態位點對動物的產羔（仔）性狀有一定的相關性。吳井生[4]等對小梅山豬FSHR基因第10外顯子進行多態性分析，結果發現在l～2胎小梅山母豬中，AA和CC基因型母豬的總產仔數低于AB、AC和BC基因型；2胎以上個體中，AA和CC基因型母豬總產子數比BC型分別少0.64（P＞0.05）和0.36頭（P＞0.05）； 雷雪芹[5]等檢測秦川牛和荷斯坦奶牛的雙、單胎母牛FSHR基因第10個外顯子SNP發現，雙胎牛突變型明顯高于單胎牛的突變型。表明該突變對秦川牛、荷斯坦牛的單、雙胎有顯著影響。由此推斷，FSHR基因可能是影響動物繁殖性狀的一個候選基因。本試驗對在FSHR基因上發現的C1412A位點與貴州黑山羊繁殖性狀進行相關性分析發現，在貴州黑山羊群體中AA基因型個體的產羔數與CC和AC基因型個體的產羔數差異顯著（P＜0.05），同樣CA和CC基因型個體產羔數差異不顯著（P＞0.05）。由此可以推斷FSHR基因可能對貴州黑山羊繁殖性能有一定影響，與之前報道FSHR基因參與動物的繁殖調節一致。

表2 G121A位點不同基因型與不同山羊品種與產羔數的相關分析

[1]Ranniki A S,Zhang F P,Huhtaniemi I T.Ontogeny of follicle stimulating hormone receptor gene expression inthetestis and ovary[J].MolCell Endocrinol,1995,107:199-208.

[2]GuoX,LiY,ChuM,et al.Polymorphism of 5'regulatory region of caprine FSHR gene and its association with litter size in Jining Grey goat[J].Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences,2013,37（5）:497-503.

[3]姜懷志.雙羔型遼寧絨山羊FSHR基因SNP分析的研究[J].吉林農業大學學報,2004(5):550-553.

[4]吳井生,張跟喜,戴國俊,等.FSHR基因第10外顯子多態性及其與小梅山豬產仔數的關系[J].畜牧獸醫學報,2012(4):509-515.

[5]雷雪芹,陳宏,袁志發,等.牛 FSHR 基因第10外顯子單核苷酸多態性及其與雙胎性狀的關系[J].中國生物化學與分子生物學報,2004(1):34-37.

王玉金（1986-），本科，助理獸醫師，從事畜牧獸醫方面工作。