日照麻雞禽白血病凈化技術試驗

韓勇李英王海洲

（1，山東省日照市動物疫病預防控制中心 276800；2，山東省五蓮縣畜牧獸醫局 262300；3，山東省日照市畜牧站 276800）

日照麻雞禽白血病凈化技術試驗

韓勇1李英2王海洲3

（1，山東省日照市動物疫病預防控制中心 276800；2，山東省五蓮縣畜牧獸醫局 262300；3，山東省日照市畜牧站 276800）

根據某公司禽白血病（ALV）流行病學調查結果，本試驗參考國際ALV凈化方案，針對禽白血病在日照麻雞上流行的特點，開展了禽白血病的凈化研究。經過一個世代的凈化，雞群的p27抗原陽性率由11.2%下降到5.5%，A/B抗體陽性率由4.5%下降到0，J抗體陽性率由1.7%下降到0，病毒分離陽性率由4.5%下降到0.2%。以上結果表明通過凈化程序的實施，雞群ALV陽性率大幅下降，凈化效果成效顯著。

禽白血病；疫病凈化；抗原檢測；差異；日照麻雞；試驗

禽白血病（Avian leucosis，AL）是由反轉錄病毒科（Retroviridae）禽白血病/肉瘤病毒群（Avian leucosis/sarcoma virus）引起的以造血細胞增生為主的一類腫瘤性疾病，包括淋巴細胞性白血病、成紅細胞性白血病、成髓細胞白血病和髓細胞性白血病[1]。該病是當前嚴重危害我國養禽業的重要疫病之一。病毒可通過種群的種蛋垂直傳播給后代。該病尚無疫苗可供使用，其預防控制措施主要依賴種群的凈化措施[2]。

日照麻雞是一個歷史悠久、遺傳性能穩定的優良地方品種，它具有體型小、肉質風味好、產蛋量較高、蛋品質好、覓食能力強、抗病力和適應性強等突出特點，是一個十分寶貴的地方品種資源。1977年被列為山東省地方畜禽良種，2009年被山東省畜牧獸醫局列入《山東省畜禽遺傳資源保護名錄》。其中心產區為膠南市南部與日照市東北部相連接的沿海一帶，分布于膠南、東港區、五蓮等縣。上世紀八、九十年代，由于外來品種的引進和雜交改良，日照麻雞感染禽白血病的病例報道逐漸增多，楊鳳等在山東采集255份蘆花、日照麻雞等地方品種，P25抗原陽性率為50.98%，采集41份病料用PCR檢測，33份呈ALV-J陽性（80.49%）[3]。隨著致病力極強的ALV-J的出現并廣為傳播，加之該病又無疫苗免疫，感染禽白血病雞群不斷出現患病死亡雞、生產性能下降和免疫抑制，給養禽業造成了嚴重損害[4]。因此，開展日照麻雞禽白血病凈化工作刻不容緩。

自2010年以來，日照市動物疫病預防控制中心選擇某自繁自養原種雞場，參照國際禽白血病凈化標準，結合日照麻雞特點進行了禽白血病凈化探索試驗，并取得了較好的成效。

1 材料與方法

1.1 主要檢測試劑和儀器

ALV p27抗原檢測試劑盒、ALV A/B亞群抗體檢測試劑盒、ALV J亞群抗體檢測試劑盒均購自美國IDEXX公司；酶標儀購于美國伯樂公司，DF1細胞為本室保存。

1.2 檢測方法

ALV p27抗原檢測、ALV A/B亞群抗體檢測、ALV J亞群抗體檢測按照試劑盒說明書進行。

1.3 凈化程序

根據對該公司麻雞ALV流行病學調查，研究出日照麻雞ALV感染的3個敏感期，按程序進行凈化。

1.3.1 后備種雞檢測（6周齡）

采集6周齡雞血漿，分離培養ALV。選出陰性雞，隔離飼養，作為后備種雞。

1.3.2 初產種雞檢測（23周齡）

選擇每只種雞開產蛋，取蛋清的混合樣品，用ELISA方法檢測蛋清中的p27抗原，淘汰抗原陽性雞。其余雞采集血漿接種DF-1細胞分離病毒，用ELISA方法檢測p27抗原，淘汰陽性雞。

1.3.3 種雞檢測（43周齡）

選擇每只種雞蛋，取蛋清的混合樣品，用ELISA方法檢測蛋清中的p27抗原，淘汰抗原陽性雞。其余雞采集血漿檢測p27抗原、ALV A/B亞群抗體、ALV J亞群抗體，檢測陰性的接種DF-1細胞分離病毒，用ELISA方法檢測p27抗原，淘汰陽性雞。

1.3.4 雛雞檢測

收集陰性種雞的種蛋，同一只種雞來源的種蛋放在一起，分群孵化。采集全部1日齡雛雞的胎糞，檢測p27抗原。有一只雛雞為陽性，則同一種雞來源的雛雞均判為陽性，不作種用。

連續進行多個世代種雞的ALV檢測與凈化，直至p27抗原、A-B亞群抗體和J亞群抗體達到凈化標準。

2 結果

（1）分別對零世代的核心群進行流行病學調查后進行凈化，結果見表1。

（2）2.2對第一世代的日照麻雞種雞群的拭子、血清和全血進行p27抗原、血清學抗體及病毒分離的檢測，結果顯示經過一個世代的凈化，禽白血病的感染率大幅下降。

（3）核心群凈化效果評估。經過一個世代的凈化淘汰，雞群的p27抗原、A/B亞群抗體、ALV J抗體、病毒分離陽性率較零世代均有顯著下降。

表1 零世代種雞群ALV凈化檢測結果（單位：%）

表2 第一世代種雞群ALV感凈化檢測結果（單位：%）

3 討論

（1）采用ALV p27抗原檢測、ALV A/B亞群抗體檢測、ALV J亞群抗體檢測、病毒分離等方法分別對相同個體進行檢測，不同方法的檢測結果存在差異。因此，單獨使用一種方法對雞群進行檢測，診斷結果是不可靠的，因此，應在經濟條件允許的情況下，同時使用至少2種不同檢測方法[5]。本試驗在國際金標準p27抗原檢測基礎上，在43周檢測時段增加了p27抗原、ALV A/B亞群抗體和ALV J亞群抗體檢測，最大限度的提高檢測的敏感性，剔除陽性感染雞，成效顯著。

（2）根據不同雞群調查ALV的感染水平，并選擇合適的監測時間段尤為重要。本試驗對前期雞群ALV流行病學調查選擇了6周齡、22周齡和43周齡3個敏感點進行檢測，分析雞群的排毒情況。

（3）由于本技術方法尤其是病毒分離對技術要求較高，成本高，一定程度上限制了本技術的推廣。因此，探索適合我國國情的凈化檢測方法，逐步實現禽白血病在我國的凈化勢在必行。

[1]卡爾尼克 BW.禽病學[M].第10版.高福,蘇敬良,譯.北京:中國農業出版社,1999.

[2]吳天威,林光津,等.廣西麻雞白血病凈化研究初報[J].廣西畜牧獸醫,2011,27（1）:6-7.

[3]楊鳳,孫洪磊,倪偉,等.山東不同品系蛋雞禽白血病流行病學調查[J].畜牧獸醫學報,2011,42（5）:696-703.

[4]Fairfull R W,Garwood V A,Spencer J L,et al.The effects of geographical area,rearing method,caging density and lymphoid leucosis infection on adult performance in egg stocks of chicken[J].Poult Sci,1983,62:2360-2370.

[5]秦愛建.禽白血病防控的思考[J].中國家禽,2011,33（12）:37.

韓勇（1980.9-），男，漢族，山東省日照市人，預防獸醫學研究生，研究方向為動物傳染病和動物分子生物學。