附紅細(xì)胞體和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染的診治

代振江，劉 釗，曾智勇，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

附紅細(xì)胞體病是由附紅細(xì)胞體寄生于人和動(dòng)物紅細(xì)胞表面、血漿及骨髓中所引起的一種人畜共患病。最初該病被命名為附紅細(xì)胞體，并將其歸為立克次氏體目，在其16S rRNA 基因序列鑒定后又將其重新分類為支原體類微生物，但該分類還存在異議。本病臨床上以發(fā)熱、貧血或黃疸等癥狀為主要特征，并有隱性感染、慢性遷延、條件致病、急性發(fā)病時(shí)致死率高等特點(diǎn)。近年來，隨著人附紅細(xì)胞體病臨床病例的增多和家畜尤其是豬附紅細(xì)胞體病的暴發(fā)流行，該病才逐漸被關(guān)注。本病不僅導(dǎo)致動(dòng)物毛產(chǎn)量及乳、肉產(chǎn)量減少，生育力下降，還引起較嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)及死亡，值得注意的是該病在我國豬、犬等家畜中還有暴發(fā)流行的趨勢(shì)[1-2]。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是20 世紀(jì)80 年代末出現(xiàn)的一種新病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬的高度接觸性傳染病，該病以母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、敗血癥、高熱、高死亡率為主要特征。不同年齡、品種和性別的豬均能感染PRRSV，但以妊娠母豬和1 月齡以內(nèi)的仔豬更易感染，40 日齡以內(nèi)的仔豬病死率高達(dá)100%，育肥豬病死率約為 50%；在一些地區(qū)的豬場(chǎng)，發(fā)病率接近100%，病死率在30%～50%，部分豬場(chǎng)的病死率可達(dá)80%以上[3]。

1 發(fā)病情況

貴州某豬場(chǎng)有存欄商品豬1 萬頭左右，2014 年12 月中旬該豬場(chǎng)從市場(chǎng)收購了500 多頭仔豬，購進(jìn)后未進(jìn)行疫苗免疫。從2014 年12 月下旬開始，這批仔豬陸續(xù)發(fā)病，截至2015 年1 月5 日購進(jìn)豬中有200 多頭發(fā)病，死亡80 多頭。據(jù)述，發(fā)病仔豬臨床癥狀主要表現(xiàn)為黃疸、貧血、消瘦、食欲不振、精神委頓、腹瀉以及高燒不退。曾用抗生素藥物進(jìn)行治療但沒能有效控制病情。

圖1 呈多形性的紅細(xì)胞體

2 臨床癥狀

患病仔豬出現(xiàn)精神不振、消瘦、發(fā)熱，體溫升高達(dá)到40.5～ 41.8 ℃，食欲減退、腹瀉、黃疸、貧血、全身被毛粗亂、采食量明顯下降，后期廢絕；觸摸病豬腹股溝和頜下淋巴結(jié)顯著腫大。

3 病理變化

對(duì)2 只病死豬進(jìn)行剖檢，發(fā)現(xiàn)多器官呈廣泛性病理損傷，主要病變有：全身淋巴結(jié)腫大，淋巴切面呈大理石狀；腸系膜淋巴結(jié)腫大呈索狀，肺門、腹股溝淋巴結(jié)腫大；肺臟廣泛性肉變，間質(zhì)明顯，可見大量出血斑；腎臟表面凹凸不平，紅白相間呈“花斑腎”；脾臟邊緣可見少量輕度梗死病灶；其余臟器無明顯肉眼可見病理變化。

圖2 核酸檢測(cè)結(jié)果

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 血涂片鏡檢

用生理鹽水稀釋經(jīng)病豬前腔靜脈采出的血樣，制成均勻的血涂片。鏡檢可見紅細(xì)胞邊緣呈星芒或鋸齒狀，呈多形性（如圖1）。

4.2 病毒核酸檢測(cè)

分別取適量剖檢病豬的肝、腎、肺臟、淋巴結(jié)和脾臟進(jìn)行碾磨勻漿，反 復(fù) 凍 融3 次 后，12 000 r/min 離心10 min，取上清，用Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0 試劑盒進(jìn)行核酸的提取。根據(jù)臨床癥狀及病理特征，疑為HCV、PRRSV 及PCV2的多重感染，但根據(jù)送檢要求，僅分別對(duì)HCV 和PRRSV 進(jìn)行核酸檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)選用HCV 和PRRSV 的特異性引物，以提取的核酸為模板，參照一步法RT-PCR 試劑盒說明書，對(duì)HCV、PRRSV 進(jìn)行核酸檢測(cè)，其反應(yīng)總體系為50μL：2×1 Step Buffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 個(gè) 循 環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，核酸檢測(cè)結(jié)果如圖2。

5 結(jié)果與分析

根據(jù)發(fā)病仔豬的臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，豬場(chǎng)存在附紅細(xì)胞體和藍(lán)耳病病毒的混合感染。此外，根據(jù)腎臟的病理變化PCV2 共感染的可能性亦較大。附紅細(xì)胞體可使不同品種、年齡的畜禽和人感染，而且感染率相當(dāng)高。在我國部分地區(qū)，豬的感染率為49%左右，有的地區(qū)可達(dá)到80%左右。但附紅細(xì)胞體進(jìn)入機(jī)體后多呈潛伏狀態(tài)，發(fā)病率較低，只有當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)(如分娩、疲勞和長途運(yùn)輸?shù)?時(shí)才可能引起發(fā)病，所以多數(shù)學(xué)者認(rèn)為附紅細(xì)胞體的毒性低、致病性弱，很可能是一種條件性致病微生物。PRRSV 在我國的豬場(chǎng)廣泛存在，大多呈持續(xù)隱性感染。受感染的豬群，即使表面穩(wěn)定，也存在三類豬，即S—易感，M—感染，R—有抵抗力豬。S—M—R 三類豬在群體的比例隨條件變化而變化，在有應(yīng)激因素如霉菌毒素、環(huán)境改變、營養(yǎng)不良等的刺激下，可能誘發(fā)該病的暴發(fā)[4]。PRRSV 是一種免疫抑制性疾病，極易與其他疾病如豬瘟、豬圓環(huán)病毒、豬細(xì)小病毒病等發(fā)生混合感染[5]。豬場(chǎng)從市場(chǎng)購進(jìn)仔豬后未及時(shí)對(duì)其進(jìn)行相關(guān)疫苗的免疫，豬群處于無保護(hù)狀態(tài)，又加之經(jīng)長途運(yùn)輸后處于新的環(huán)境等刺激因素的影響，此時(shí)豬群免疫力下降，這些綜合因素可能導(dǎo)致了豬群的感染發(fā)病。

針對(duì)以上情況建議豬場(chǎng)在購進(jìn)豬只后，應(yīng)先對(duì)豬群進(jìn)行隔離觀察，確定豬只無感染發(fā)病之后再混群飼養(yǎng)。同時(shí)，豬場(chǎng)必須做好疫苗免疫接種工作，并且要定期進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，適時(shí)補(bǔ)免，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高豬體的營養(yǎng)水平，注意環(huán)境衛(wèi)生和消毒，減少豬群的應(yīng)激，從而有效控制疾病的發(fā)生和蔓延，降低豬群死亡率，減少經(jīng)濟(jì)損失。

[1] 王永，馮昕煒，嚴(yán)光文，等. 附紅細(xì)胞體病原學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008(6): 491-494.

[2] 嚴(yán)麗華，袁聰俐，朱凝瑜，等.嗜血支原體(附紅細(xì)胞體)病原學(xué)研究進(jìn)展[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)科學(xué)版，2009(2):177-180.

[3] 李建玲，楊小亮. 高致病性豬藍(lán)耳病的研究進(jìn)展[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2014(6):61-63.

[4] 文麗，趙兵軍.豬藍(lán)耳病的研究進(jìn)展與防控策略[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2013（3）:15-16.

[5] 覃紹敏，梁安莉，王仰杰，等. 豬流感病毒與繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、圓環(huán)病毒、偽狂犬病病毒、副豬嗜血桿菌混合感染的情況調(diào)查[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2008（3）:77-80.