應(yīng)用藥物動力學(xué)原理分析規(guī)模豬場后備母豬豬瘟間接血凝抗體消長動態(tài)

徐慶安，韓永剛，劉 浩，李成虎

（1.漢中市漢臺區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西 漢中 723000；2.漢中市漢臺區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，陜西 漢中 723000；3.陜西省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西 710014）

應(yīng)用藥物動力學(xué)原理分析規(guī)模豬場后備母豬豬瘟間接血凝抗體消長動態(tài)

徐慶安1，韓永剛2*，劉 浩3，李成虎2

（1.漢中市漢臺區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西 漢中 723000；2.漢中市漢臺區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，陜西 漢中 723000；3.陜西省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西 710014）

漢中市A、B兩豬場各提供32～35日齡的35頭后備母豬作為豬瘟抗體檢查供試豬，分別注射豬瘟疫苗后按試驗設(shè)計的規(guī)定時間采集血清樣品259份，依照農(nóng)業(yè)部指定的豬瘟正向間接血凝試驗方法，檢測豬瘟抗體效價并詳細記錄。運用藥物動力學(xué)中的殘數(shù)法分析模豬場后備母豬豬瘟間接血凝抗體消長動態(tài)，求算出A、B兩豬場后備母豬豬瘟抗體（效價）消長動態(tài)參數(shù)ka、k、t1/2（a）和t1/2分別是0.077 17/d 、0.006 99/d、8.978 d、99.14 d及0.071 34/d、0.008 186 8/d、9.714 d、84.65 d。通過比較2豬場的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)B豬場的疫病防控效果與A豬場相比存在一定差距，需要進一步加強和改進。

后備母豬；豬瘟抗體；代謝動力學(xué)；研究

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病，被國際獸醫(yī)局（OIE）列為A類傳染病，我國也將該病列為一類傳染病[1]。由于豬瘟在豬病防控中的重要性和基礎(chǔ)性地位，建立后備母豬豬瘟間接血凝抗體消長動態(tài)模型，并以該數(shù)學(xué)模型參數(shù)作為考查豬場日常疫病防控狀況的重要指標，具有一定的參考意義和實用價值。殘數(shù)法是代謝動力學(xué)中把一條曲線分解成若干指數(shù)成分的一種常用方法，該法又稱羽毛法、削去法或剩余法等。在單室或雙室模型中應(yīng)用均較普遍。凡是血藥濃度（或抗體效價）曲線由多項指數(shù)式表示時，均可用殘數(shù)法逐個求出各指數(shù)項的參數(shù)[2]。為了在生產(chǎn)中對A、B兩豬場的疫病防控效果進行評估，筆者運用了殘數(shù)法對規(guī)模豬場后備母豬豬瘟抗體（效價）消長動態(tài)進行了研究。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗豬

由漢中市A、B兩豬場提供，選擇兩場32～35日齡的后備母豬各35頭作為豬瘟抗體檢查供試豬。

1.1.2 疫苗

供試豬使用的豬瘟疫苗均為政府采購的豬瘟脾淋苗，由四川華派生物制品廠生產(chǎn)，批準文號為（2011）270021001，批號為：20120706，規(guī)格為20頭份/瓶，每頭份脾淋苗的組織毒不少于0.01 g。按說明書用生理鹽水稀釋后，每頭供試豬注射2頭份。

1.1.3 診斷試劑

豬瘟正向間接血凝試驗診斷抗原購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，抗原批號：20121025；陽性血清20120902；陰性血清2012090；稀釋液20121007。

1.2 試驗方法

1.2.1 豬瘟抗體監(jiān)測

采集免疫當日及免疫后7、14、21、28、60、90、120、150及180 d供試豬血液，分離血清置冰箱-15 ℃以下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 血清學(xué)試驗

采用正向間接血凝試驗進行后備母豬豬瘟抗體檢測。將待檢血清置常溫下解凍搖勻后，每樣取50μL，按農(nóng)業(yè)部豬瘟正向血凝試驗操作規(guī)程進行試驗檢測。

表1 后備母豬豬瘟抗體檢測數(shù)值

1.2.3 結(jié)果判定

按照農(nóng)業(yè)部和陜西省豬瘟免疫計劃判定標準進行判定：豬瘟正向間接血凝試驗抗體效價大于等于5 log 2（1∶32）判定為合格。群體豬抗體合格率大于等于70%判定為合格。

2 檢測結(jié)果與分析

2.1 后備母豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

70頭供試豬豬瘟抗體滴度均可檢出，介于3 log 2～11 log 2之間。詳細檢測結(jié)果見表1。所有豬只注射疫苗后抗體均呈現(xiàn)不同程度上升，且群體免疫合格率大于70%，符合農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準。說明使用的豬瘟疫苗質(zhì)量穩(wěn)定，均能使后備母豬在免疫后一段時期內(nèi)對豬瘟產(chǎn)生免疫力。

圖1 A豬場 抗體效價對數(shù)—免疫后時間圖

圖2 B豬場 抗體效價對數(shù)—免疫后時間圖

2.2 豬瘟抗體代謝動力學(xué)分析

2.2.1 A豬場豬瘟抗體代謝動力學(xué)分析

供試后備母豬采集血樣259份。

在此我們結(jié)合單室模型血管外給藥途徑分析如下，其中以抗體效價代替血藥濃度。單室模型血管外給藥途徑血藥濃度（抗體效價）曲線的多項指數(shù)表達式為：

其中C表示抗體效價，ka代表抗體效價上升常數(shù)，k代表抗體效價消除常數(shù)；若ka遠大于k，當t充分大時，則e-kat首先趨向于零，則上式簡化為：

此式描述抗體效價--時間曲線的生成后相（即此時抗體生成很少），兩端取對數(shù)，得：

以抗體效價對數(shù)對時間作圖得二項指數(shù)曲線，其尾端為一條直線，直線的斜率為-k/2.303，該直線外推至零時間的截距為log 〔（kaFX0）/V(ka-k)〕，因此從直線的斜率可求出消除速度常數(shù)k值和t1/2值。若F、V已知，從截距中可繼續(xù)求出ka值，一般情況下F、V是未知的，因此可應(yīng)用殘數(shù)法求出吸收速度常數(shù)ka值。方法如下：

將(1)式展開得：

兩端取對數(shù)得：

設(shè)｛〔（kaFX0）/V(ka-k)〕*e-kt-C｝=Cr

則（5）式可寫成：

式中Cr為殘數(shù)效價，以log Cr-t作圖，得第二條直線，稱為“殘數(shù)線”，該直線的斜率為-ka/2.303：從該斜率求出ka值和t1/2（a）值[1]。

A豬場供試后備母豬抗體檢測時間和數(shù)值見表2（根據(jù)效價、時間數(shù)據(jù)列表）：

表2 A豬場后備母豬抗體檢測時間和數(shù)值

在對數(shù)圖坐標上，以抗體效價對數(shù)對時間作圖，尾端為一直線，斜率為：

（0.6 8 1 2 4-0.8 6 3 3 2）/ (1 5 0-9 0)=-0.0 0 3 0 3， 則k=2.303*(0.003 03)=0.006 99d-1

由此得：t1/2=(0.693)/k=(0.693)/ (0.00699)=99.14(d)

將尾端直線外推到與縱軸相交，從圖中找出前一段時間的外推線上的濃度即上表中第3列，將外推線上的濃度減去相應(yīng)時間的血藥濃度（即第3列減去第2列相應(yīng)數(shù)字）得到殘數(shù)效價（及第4列數(shù)字）。在該對數(shù)坐標圖中，以殘數(shù)效價對時間作圖，即以log Cr-t作圖，得到另一條直線，即為殘數(shù)線，殘數(shù)線的斜率為：

{(1.1417-0.9590)-(1.333-0.6812)}/(28-14)=-0.033 50

因 此，ka= 2.303*（-0.03307）=0.077 17 d-1

吸收半衰期 t1/2（a）=(0.693)/ ka=( 0.693)/0.07717=8.978(d)

2.2.2 B豬場后備母豬抗體代謝動力學(xué)分析

B豬場后備母豬抗體檢測時間、數(shù)值及外推線數(shù)值見表3。

同理，B豬場在對數(shù)圖坐標上，以抗體效價對數(shù)對時間作圖，尾端為一直線，斜率為：

（0.6 1 2 7 8 3-0.8 2 6 0 7 4）/ (1 5 0-9 0)=-0.0 0 3 5 5 5， 則k=2.303*(0.003555)=0.0081868d-1

由此得： t1/2=(0.693)/k=(0.693)/ (0.0081868)=84.65(d)

將尾端直線外推到與縱軸相交，從圖中找出前一段時間的外推線上的濃度即上表中第3列，將外推線上的濃度減去相應(yīng)時間的血藥濃度（即第3列減去第2列相應(yīng)數(shù)字）得到殘數(shù)效價（及第4列數(shù)字）。在該對數(shù)坐標圖中，以殘數(shù)效價對時間作圖，即以log Cr-t作圖，得到另一條直線，即為殘數(shù)線，殘數(shù)線的斜率為：

{(0.9759-0.9345)-(1.1379-0.6628)}/(28-14)=-0.03097

表3 B豬場后備母豬抗體檢測時間、數(shù)值及外推線數(shù)值

因 此，ka= 2.303*（-0.0.03098）=-0.07134 d-1

吸收半衰期 t1/2（a）=(0.693)/ ka=( 0.693)/0.07134=9.714(d)

3 討論

1)豬瘟是由豬瘟病毒（SFV）引起的一種急性熱性高度接觸性傳染病，常呈地方性和散發(fā)性流行。科學(xué)合理的疫苗免疫，避免出現(xiàn)免疫空白期并保持較高水平的抗體，是預(yù)防豬瘟的暴發(fā)和流行重要條件。但是體內(nèi)原有抗體的存在同時也是導(dǎo)致豬瘟補免效果不好的一個重要因素[3]，確定正確的補免時間非常重要。通過本次后備母豬豬瘟抗體代謝動力學(xué)研究，A、B兩場分別在前次豬瘟免疫后160和145日對后備母豬進行補免，可獲得滿意的合格免疫率。

2)抗體消長動態(tài)參數(shù)ka、t1/2（a）是考察疫苗注射后抗體效價上升情況的重要指標，比較A、B兩場抗體代謝動力學(xué)參數(shù)ka、t1/2（a）可見：抗體（效價）增長常數(shù)ka值越大，抗體效價上升速度越快，最終的抗體效價峰值也高；t1/2（a）數(shù)值越大抗體效價上升速度越慢，最終的效價峰值越底。抗體代謝動力學(xué)參數(shù)k、t1/2是考查疫苗注射后抗體（效價）消除情況的重要指標，抗體（效價）消除常數(shù)越小，抗體消除速度越慢；抗體（效價）半衰期t1/2越大，抗體（效價）維持時間越長。在相關(guān)疫苗質(zhì)量可控的情況下，疫苗注射后抗體效價上升的速度和幅度與豬場內(nèi)眾多的免疫抑制性因素（如免疫抑制性疾病、霉菌毒素等）有關(guān)，考查抗體消長動態(tài)參數(shù)ka、t1/2（a）就可以對豬場內(nèi)免疫抑制性因素（如免疫抑制性疾病、霉菌毒素等）的綜合危害程度做出半定量綜合評價；而考查抗體消長動態(tài)參數(shù)k、t1/2可以對豬場相關(guān)疫病的防控水平和生物安全措施的效果做出較為直觀的綜合評測。

[1] 楊懷志，張爭勁.散養(yǎng)生豬豬瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的監(jiān)測研究[J].中國牧業(yè)通訊，2008(5)：47-49.

[2] 梁文權(quán)，等.生物藥劑與藥物動力學(xué)[M].第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社1999：180-182.

[3] 張新成，李官兵，史子學(xué).豬瘟母源抗體在仔豬體內(nèi)持續(xù)時間的研究[J].養(yǎng)豬，2008（1）：46-48.

2014-03-10)

徐慶安 (1975-) 男，漢臺區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，獸醫(yī)師。主要從事動物衛(wèi)生監(jiān)督和檢疫監(jiān)督工作。

*韓永剛，為并列第一作者、通訊作者。