老年骨肉瘤術后組織癌胚抗原相關細胞黏附分子6表達與血管生成的關系

張 哲 霍 巖 周 明 喬 楠 (錦州市第二醫院創傷骨科，遼寧 錦州 121000)

老年骨肉瘤發生與常見的中青年骨肉瘤相比，可能具有不同特征。老年人常伴有骨質疏松，并常伴有相關的病變，如骨Paget病、放射后骨肉瘤等，也有少數呈普通型骨肉瘤的病變。病理學顯示腫瘤性骨組織，并伴有明顯異型性，其間質可見較多血管，證實骨肉瘤是富于血管的腫瘤〔1〕。血管內皮生長因子(VEGF)是經典的血管內皮生成促進因子，其高表達時可以激活血管內皮細胞增殖〔2，3〕。癌胚抗原相關細胞黏附分子(CEACAM)6是免疫球蛋白超家族的重要成員，相對分子量為90～95 kD〔4〕。在腫瘤相關因素誘導下，CEACAM6表達可以升高，引起腫瘤細胞的增生和間質的血管生成〔4〕，此時細胞增殖活躍，生長旺盛。本研究觀察老年人骨肉瘤中CEACAM6、VEGF及白細胞分化抗原(CD)31標記的微血管密度(MVD)的特征。

1 材料與方法

1.1一般資料 我院確診骨肉瘤患者43例作為觀察組，其中男30例，女13例;年齡60～75歲，平均63歲。腫瘤發生部位:股骨18例，脛骨13例，肱骨3例，腓骨3例，其他部位6例。

1.2方法 CEACAM6、VEGF和CD31試劑均購自武漢博士德生物工程公司，蛋白的檢測應用免疫組化SP法、應用DAB染色。嚴格按說明書操作，減少誤差，做好質控工作。

1.3結果判斷標準 CEACAM6和VEGF的陽性部位為細胞質，出現深棕色顆粒為陽性細胞，選擇腫瘤細胞密集且典型的區域進行觀察，選擇5個400倍高倍視野，計數陽性細胞的百分率，取平均值，陽性率≥25%為陽性，＜25%為陰性。CD31的陽性部位為細胞質，其染色的特異性細胞為血管內皮細胞，以染成深棕色的內皮細胞或細胞叢定為一個血管。選擇間質染色較為密集的區域，記錄5個400倍高倍視野內的微血管數，取其平均數作為最終MVD值。

1.4統計學方法 應用SAS6.12軟件進行χ2檢驗和線性相關分析。

2結果

2.1觀察組CEACAM6和VEGF表達的陽性率、MVD值觀察觀察組CEACAM6表達的陽性率是24% ～86%，VEGF表達的陽性率是34% ～90%，MVD值是12～46個。

2.2CEACAM6和VEGF表達的陽性率、MVD值在觀察組不同特征分組中的比較 觀察組中CEACAM6和VEGF表達的陽性率、MVD值均與腫瘤最大徑和Ki67增殖指數密切相關。見表1。

2.3CEACAM6、VEGF與CD105在老年人骨肉瘤中表達的關系 骨肉瘤中CEACAM6表達與MVD呈正相關(r=0.48，P＜0.05)，VEGF 表達與 MVD 呈正相關(r=0.54，P＜0.05)，CEACAM6與VEGF表達呈正相關性(r=0.44，P＜0.05)。

表1CEACAM6和VEGF表達的陽性率、MVD值在觀察組不同特征分組中的比較〔n(%)〕

3討論

骨肉瘤是成骨性腫瘤，雖然最常發生于年輕人;但是老年人也可以出現腫瘤性病變，大部分與Paget骨肉瘤、放療后肉瘤或輻射后引起的肉瘤相關。由于老年人骨骼具有退行性改變，且常伴有不同程度的代謝性改變，其可能有特異性改變。病變過程中腫瘤的生長和轉移均依賴于腫瘤內新生血管的形成〔5〕。新生血管的觀察有賴于血管生成促進因子的激活。王東等〔6〕通過在骨肉瘤中觀察VEGF的表達，認為在血管生成以前腫瘤細胞是很少進入循環的，而間質血管的新生為腫瘤細胞進入脈管提供了便捷的途徑，因此腫瘤轉移也依賴血管的生成。由于新生毛細血管的基底膜常不連續，且存在較多的間隙，因此腫瘤細胞可以利用此間隙進入循環系統〔7，8〕。因此血管生成對腫瘤進展同樣具有重要促進作用。CD31是血管內皮細胞較為特異性的標志物，對新生血管的標記作用強〔9，10〕。CEACAM6在發揮作用過程中，可以特征性地識別靶基因DNA序列中的E盒序列，增強轉錄功能〔11〕。也有研究顯示CEACAM6能通過轉錄及中介調節因子促進腫瘤發生，尤其是在腫瘤的前期病變中表達升高，促進腫瘤的惡性轉變〔12，13〕。CEACAM6蛋白也參與細胞惡性轉變的增殖過程中，能使腫瘤細胞的周圍環境產生變化，對促進轉移及播散起明顯的促進作用〔14〕。

本實驗提示CEACAM6和VEGF在腫瘤中有明確的表達，是腫瘤形成的重要促進蛋白，結果也顯示骨肉瘤的間質中可見較多的微血管，提示老年人中形成的骨肉瘤是富于血管的惡性腫瘤。CEACAM6和 VEGF是促進腫瘤生長的重要蛋白，CEACAM6和VEGF對腫瘤的此種作用類似癌基因的作用。CEACAM6和VEGF可以促進腫瘤的失控性增殖進程，使腫瘤的生長更快，侵襲能力更強。Duxbury等〔15〕認為胰腺癌中CEACAM6高表達是重要促進因子，此時可以調節胰島素樣生長因子的異?；罨辜毎脑鲋尺^程明顯增強。也有學者認為CEACAM6可能對有絲分裂原的刺激產生反應，使腫瘤的分化能力下降，細胞更為原始〔16〕。CEACAM6和VEGF均具有直接促進間質血管生成的作用。VEGF在作用過程中有多種影響蛋白〔17〕，CEACAM6對VEGF的作用可能是其促進腫瘤血管生成的重要機制之一。

1 陳國立，林荔軍，林海濱，等.VEGF、bFGF血清濃度變化與骨肉瘤預后的關系探討〔J〕.細胞與分子免疫學雜志，2011;27(12):1343-5.

2 Mineo TC，Ambrogi V，Baldi A，et al.Prognostic impact of VEGF，CD31，CD34，and CD105 expression and tumour vessel invasion after radical surgery forⅠB-ⅡA non-small cell lung cancer〔J〕.J Clin Pathol，2004;57(6):591-7.

3 張先燎，施 鑫.血管內皮生長因子及其受體與骨肉瘤關系的研究進展〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2010;15(6):567-9.

4 Hasselbalch HC，Skov V，Larsen TS，et al.High expression of carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule(CEACAM)6 and 8 in primary myelofibrosis〔J〕.Leuk Res，2011;35(10):1330-4.

5 王 東，仲召陽，陳 俐，等.骨肉瘤iNOS過度表達與血管生成及預后的關系〔J〕.第三軍醫大學學報，2000;22(8):776-9.

6 王 東，陳 俐，高奉潯.骨肉瘤血管內皮生長因子表達與腫瘤血管生成及預后的關系〔J〕.癌癥，1998;17(4):254-6.

7 Kim SH，Cho NH，Kim K，et al.Correlations of oral tongue cancer invasion with matrix metalloproteinases(MMPs)and vascular endothelial growth factor(VEGF)expression〔J〕.J Surg Oncol，2006;93(4):330-7.

8 Bremnes RM，Camps C，Sirera R.Angiogenesis in non-small cell lung Cancer:the prognostic impact of neoangiogenesis and the cytokines VEGF and bFGF in tumours and blood〔J〕.Lung Cancer，2006;51(2):143-8.

9 高保華，王麗娜，李 莉，等.肝癌發生過程中CD31與VEGF的表達〔J〕.現代腫瘤醫學，2007;15(8):1135-6.

10 丁明星，李繼承.食管鱗癌VEGF-C mRNA和CD31表達及其意義〔J〕.實驗生物學報，2003;36(4):269-72.

11 Jantscheff P，Terracciano L，Lowy A，et al.Expression of CEACAM6 in resectable colorectal cancer:a factor of independent prognostic significance〔J〕.J Clin Oncol，2003;21(19):3638-46.

12 Haibang P，Bo W，Aijun Y，et al.Expressions of CEACAM6 and MMP-9 in gastric carcinoma and their relationship with clinicopathological features:report of 54 cases〔J〕.Acta Acad Med Militaris Tertiae，2010;24(1):16.

13 Zhao ZS，Li L，Wang HJ，et al.Expression and prognostic significance of CEACAM6，ITGB1 and CYR61 in peripheral blood of patients with gastric cancer〔J〕.J Surg Oncol，2011;104(5):525-9.

14 Litkouhi B，Litkouhi B，Fleming E，et al.Overexpression of CEACAM6 in borderline and invasive mucinous ovarian neoplasms〔J〕.Gynecol Oncol，2008;109(2):234-9.

15 Duxbury MS，Ito H，Benoit E，et al.Overexpression of CEACAM6 promotes insulin-like growth factorⅠ-induced pancreatic adenocarcinoma cellular invasiveness〔J〕.Oncogene，2004;23(34):5834-42.

16 Deng X，Liu P，Zhao Y，et al.Expression profiling of CEACAM6 associated with the tumorigenesis and progression in gastric adenocarcinoma〔J〕.Genet Molec Res，2014;13(3):7686.

17 Brieger J，Bedavanija A，Gosepath J，et al.Vascular endothelial growth factor expression，vascularization and proliferation in paragangliomas〔J〕.J Otorhinolaryngol Rel Spec，2004;67(2):119-24.