趕黃草對大鼠酒精性脂肪肝的保護作用及機制

李國春 (瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院靜脈用藥調(diào)配中心，四川 瀘州 646000)

酒精性脂肪肝是因酒精及其代謝產(chǎn)物導致的肝損害，已經(jīng)成為造成我國慢性脂肪肝發(fā)病的首要原因。趕黃草性平，味苦、略辛，是經(jīng)典苗族草藥，有清熱利濕、平肝健脾之功效，被普遍用于各類肝炎、肝病的治療〔1，2〕。本文研究趕黃草對大鼠酒精性脂肪肝的干預作用和作用機制，旨在篩選治療酒精性脂肪肝的有效藥物。

1 材料與方法

1.1材料 全自動生化分析儀和光學顯微鏡購自日本Olympus公司，藥材趕黃草取自四川省廣元市，并經(jīng)本醫(yī)學院兩名教授鑒定為正品;槲皮素購自本地生物技術(shù)有限公司，總膽固醇(TC)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)及無水乙醇均購自成都某生物技術(shù)有限公司。選擇Wistar大鼠140只，均為母鼠，體重(205±18)g，由本醫(yī)學院動物實驗中心提供。

1.2方法

1.2.1制備趕黃草提取物 用8倍的濃度為95%的乙醇將趕黃草提取3次，將提取液混合后減壓并回收，干燥后獲得提取物，測得趕黃草提取物中的槲皮素含量約1.25%。

1.2.2模型的復制、分組及給藥 將140只大鼠隨機分為七組，每組20只。正常對照組、模型組，均予等容量生理鹽水;硫普羅寧組予硫普羅寧50 mg/kg;提取物低劑量組予趕黃草提取物2 000 mg/kg;提取物高劑量組予趕黃草提取物4 000 mg/kg;槲皮素低劑量組予槲皮素25 mg/kg;槲皮素高劑量組予槲皮素50 mg/kg。所有組別均給予含1.5%硫酸亞鐵的顆粒飼料喂養(yǎng)，并自由飲水及進食，于24℃溫度、75%濕度室內(nèi)分籠飼養(yǎng)，除正常對照組外，各組在適應性喂養(yǎng)結(jié)束后于每日上午9時肌注50%乙醇8 g/kg，容量為10 ml/kg;正常對照組予等量生理鹽水肌注。4 w后隨機處死模型組6只，病理證實無肝臟脂肪變，6 w后隨機處死模型組6只，病理證實有肝臟脂肪變，此時停止乙醇肌注。每日上午9時肌注相應藥物，持續(xù)6 w，對大鼠食欲、行為、狀態(tài)、毛發(fā)與死亡情況進行觀察。實驗結(jié)束前大鼠禁食12 h后處死，分離血清，取出肝臟稱重并冰凍切片。

1.2.3觀察指標 計算肝臟系數(shù)，肝臟系數(shù)=肝濕度/體重×100%，肝組織油紅O染色，光鏡下觀察肝臟脂肪浸潤情況并對肝細胞脂滴面積。采用全自動生化分析儀檢測ALT、AST、TC及TG含量。

1.3統(tǒng)計學方法 應用SPSS13.0軟件，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1趕黃草提取物對模型大鼠肝臟系數(shù)及體重的影響 正常對照組大鼠毛色光滑，行動活躍，體重增長明顯，其余各組大鼠均出現(xiàn)食欲減退，行動減少，體重增長緩慢表現(xiàn)。相比正常對照組，模型組大鼠反應遲鈍，體重明顯減輕，肝臟指數(shù)明顯增加(P＜0.05)，相比模型組，各用藥組大鼠體重增加顯著，肝臟指數(shù)明顯下降(P＜0.05)。見表1。

表1 趕黃草提取物對模型大鼠肝臟系數(shù)、體重及染色面積的影響(s，n=20)

表1 趕黃草提取物對模型大鼠肝臟系數(shù)、體重及染色面積的影響(s，n=20)

與正常對照組相比:1)P＜0.05;與模型組相比:2)P＜0.05;下表同

組別 體重(g)肝臟系數(shù) 染色面積(%)313±14.8 2.41±0.21 0模型組 278±8.61) 3.03±0.411) 18.3±1.42提取物高劑量組 306±13.92) 2.43±0.462) 5.82±0.861)提取物低劑量組 299±20.12) 2.67±0.522) 10.3±1.041)槲皮素高劑量組 293±14.72) 2.51±0.532) 6.31±1.171)槲皮素低劑量組 289±15.62) 2.72±0.662) 11.2±1.811)硫普羅寧組 313±21.82) 2.53±0.512) 8.22±0.971)正常對照組

2.2趕黃草提取物對大鼠肝臟組織病理學的影響 光鏡下正常對照組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，可見肝細胞內(nèi)有極少數(shù)紅色脂滴存在，模型組有明顯較多的紅色脂滴，趕黃草提取物各組存在不同程度紅色脂滴減少，進行油紅O染色脂滴半定量分析后顯示，趕黃草提取物各劑量組同模型組比較均有明顯差異(P＜0.05)。見表1。

2.3趕黃草提取物對ALT、AST、TC、TG水平的影響 相比正常對照組，模型組血清 ALT、AST、TC、TG水平均增加(P＜0.05);相比模型組，各用藥組血清 ALT、AST、TC、TG水平均降低(P＜0.05);相比槲皮素各組，趕黃草各提取物組ALT、AST、TC、TG水平均降低(P＜0.05)。見表2。

表2 大鼠血清ALT、AST、TC、TG水平比較(s，n=20)

表2 大鼠血清ALT、AST、TC、TG水平比較(s，n=20)

組別ALT(U/L)AST(U/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)78.3±4.2 159±9.3 3.8±0.24 1.9±0.39模型組 110.4±7.61)223±10.28 7.6±0.411)4.2±0.441)提取物高劑量組 80.4±2.22)173±14.22)4.3±0.672)2.3±0.232)提取物低劑量組 91.2±5.52)186±12.22)5.2±0.542)2.5±0.292)槲皮素高劑量組 92.8±6.22)196±11.62)5.1±0.832)3.2±0.472)槲皮素低劑量組 101.4±8.72)204±8.32) 6.2±1.02 3.6±0.282)硫普羅寧組 93.6±6.92)199±10.62)5.2±0.402)3.3±0.622)正常對照組

3討論

酒精性脂肪肝是由于長期大量飲酒導致的肝臟疾病，臨床癥狀為非特異性，可無癥狀，或有右上腹脹痛、食欲不振、乏力、體重減輕等。導致酒精性脂肪肝在我國慢性脂肪肝發(fā)病中占有較大比例，約占慢性脂肪肝患者40%，已經(jīng)成為影響人們健康的重要的消化系統(tǒng)疾病。酒精性肝損害的發(fā)生，主要由于酒精與其代謝產(chǎn)物對肝細胞的毒性作用，乙醇毒性的早期靶器官首先為線粒體，其次為微粒體。由于肝臟是儲存鐵的的重要器官，亦為鐵誘發(fā)損傷的主要靶器官，由于乙醇毒性先后作用于線粒體及微粒體，影響了脂肪酸的β氧化，使蓄積脂肪酸的清除受阻，進而導致了脂肪肝。此時肝鐵含量進一步增加，促進肝組織脂質(zhì)過氧化損傷，導致脂肪肝繼續(xù)加重〔3，4〕。酒精性脂肪肝可經(jīng)脂肪性肝炎、肝纖維化最終轉(zhuǎn)化為肝硬化，迄今尚無防治該病的特效藥物。本文通過復制大鼠酒精性脂肪肝模型，對趕黃草對大鼠酒精性脂肪肝的干預作用和作用機制進行了研究，旨在篩選治療酒精性脂肪肝的有效藥物。

本研究提示長期攝入酒精可致大鼠脂質(zhì)代謝紊亂，進而形成酒精性脂肪肝。趕黃草提取物各劑量組則顯著改善了酒精性脂肪肝的病理改變，顯著治療酒精所致大鼠肝臟脂肪性變〔5〕。本研究發(fā)現(xiàn)槲皮素在趕黃草提取物中平均含量約1.25%，在趕黃草中平均含量約0.2%，而已有研究證實槲皮素對大鼠酒精性脂肪肝有明顯效果〔6〕，本組研究表明趕黃草提取物相比單純槲皮素治療酒精性脂肪肝效果更好，可能與其中含有協(xié)同治療酒精性脂肪肝的化學成分有關(guān)，同既往研究結(jié)果有相似之處〔7〕。

綜上所述，趕黃草對大鼠酒精性脂肪肝有明顯保護作用，與其中含有的槲皮素有顯著相關(guān)性，但相比單純槲皮素治療效果更好，或許與其中可能存在其他具有預防酒精性脂肪肝化學成分有關(guān)，亦可能與其中存在與槲皮素有協(xié)同作用的預防酒精性脂肪肝的化學成分有關(guān)。

1 楊文吉，崔旭妍，鄭晟琳，等.有氧運動對非酒精性脂肪肝大鼠肝細胞PPARα mRNA表達的影響〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2014;14(10):1855-60.

2 張中賢，黃劍臻.趕黃草水提取物利膽退黃作用的研究〔J〕.熱帶醫(yī)學雜志，2008;8(2):125-7.

3 袁葉飛，胡祥宇，歐賢紅，等.趕黃草對體外誘導的酒精性脂肪肝細胞的影響〔J〕.瀘州醫(yī)學院學報，2013;36(1):35-8.

4 柯發(fā)敏，侯杰榮，劉 劍，等.趕黃草中槲皮素提取方法比較研究〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2014;30(14):2118-9.

5 梁志清，白紀紅，秦 青，等.槲皮素對非酒精性脂肪肝大鼠血清白介素18和白介素10比值的影響〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2013;24(5):1112-4.

6 羅華麗，汪 瑩.雙葛解酲丸對酒精性脂肪肝大鼠保護作用的實驗研究〔J〕.重慶醫(yī)科大學學報，2012;37(2):125-9.

7 楊 芳，韓玉翠.大鼠酒精性脂肪肝兩種建模方法的比較〔J〕.山東醫(yī)藥，2011;51(13):15-7.