乙型肝炎患者血清HBV cccDNA與肝組織HBV cccDNA、血清HBV DNA的關系及意義

張房英 吳啟文 賴小麗 熊曉英 姚葉萍 黃莉美

·臨床與基礎研究·

乙型肝炎患者血清HBV cccDNA與肝組織HBV cccDNA、血清HBV DNA的關系及意義

張房英 吳啟文 賴小麗 熊曉英 姚葉萍 黃莉美

目的 探討乙型肝炎患者血清HBV共價閉合環狀DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）與肝組織HBV cccDNA、血清HBV DNA的關系及意義。方法 從本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中隨機選擇69例進行研究。結果 15例肝組織及其血清標本中，HBV cccDNA陽性檢出率方面，血清標本顯著低于肝組織，經比較差異有統計學意義，（χ2=7.13，P＜0.05）。肝組織HBV cccDNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之間均呈正相關關系，（r=0.62，r=0.72，均P＜0.05）。隨著HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷貝數呈現出不斷增大的情況，二者水平之間呈正相關關系（r=0.82，P＜0.05）。69例血清標本中，HBV DNA≥105拷貝/m L的高水平組的血清HBV cccDNA陽性檢出率達到96.6%，顯著高于HBV DNA水平較低組（103拷貝/m L≤HBV DNA＜1×105拷貝/m L）經比較差異有統計學意義，（χ2=6.27，P＜0.05）。69例乙型肝炎患者血清標本中，隨著病程的不斷進展，HBV cccDNA檢出率呈現出不斷上升的情況，其中肝癌組的檢出率最高，不同病程之間的陽性檢出率比較均有統計學意義，（均P＜0.05）。結論 乙型肝炎血清HBV cccDNA可間接反映出患者肝組織內的HBV cccDNA情況，與HBV DNA之間具有顯著的相關性，且與病程有關。

乙型肝炎；HBV cccDNA；HBV DNA；血清；肝組織

乙型肝炎患者在感染HBV之后，在其肝細胞核內可以檢測到一種特殊的病毒DNA，即cccDNA［1］。臨床研究發現，乙型肝炎患者血清和肝組織HBV cccDNA含量之間具有一定的相關性［2］。研究中，筆者即對乙型肝炎患者血清HBV cccDNA與肝組織HBV ccc DNA、血清HBV DNA的關系及意義進行分析，現報道如下。

資料和方法

一、一般資料

從本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中隨機選擇69例進行研究，其中男39例，女30例，年齡37～81歲，平均年齡（49.1±2.6）歲。所有患者均經臨床診斷，確診為乙型肝炎。研究獲得醫學倫理學相關部門同意，所有患者均了解研究相關情況，并簽署知情同意書，自愿參與研究。

二、方法

抽取所有患者的清晨空腹靜脈血送檢，對患者進行肝組織活檢，并妥善保存標本。利用FQ-PCR技術對患者的肝組織及血清標本進行HBV cccDNA以及血清HBV DNA進行定量PCR檢測。

三、統計學方法

研究所得數據均輸入Excel表格，建數據庫，并使用SPSS公司推出的SPSS 15.0軟件進行統計分析，研究所得計數資料均進行χ2檢驗，計量資料均進行t檢驗，并以進行表示。并對P 值進行檢測，如果可得P小于0.05，則視為差異有統計學意義。

結 果

一、肝組織和血清HBV cccDNA檢出率比較

15例肝組織及其血清標本中，HBV cccDNA陽性檢出率方面，血清標本顯著低于肝組織，經比較差異有統計學意義，（χ2=7.13，P＜0.05）。具體結果如表1所示。

表1 肝組織和血清HBV cccDNA檢出率分析

二、肝組織HBV ccc DNA水平與血清HBVcccDNA、HBV DNA及HBs Ag的相關分析

經統計，肝組織HBV ccc DNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之間均呈正相關關系，（r=0.62，r=0.72，均P＜0.05）。

三、血清HBV DNA水平與HBV cccDNA水平的相關性分析

對血清HBV cccDNA與HBV DNA分布的散點圖（見圖1）進行分析可以發現，隨著HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷貝數呈現出不斷增大的情況，二者水平之間呈正相關關系（r=0.82，P＜0.05）。

圖1 血清HBV cccDNA與HBV DNA分布的散點圖

四、不同HBV DNA水平組血清HBV cccDNA檢出率比較

經統計，在69例血清標本中，HBV DNA≥105拷貝/m L的高水平組的血清HBV cccDNA陽性檢出率達到96.6%，顯著高于HBV DNA水平較低組（103拷貝/m L≤HBV DNA＜1×105拷貝/m L）經比較差異有統計學意義，（χ2=6.27，P＜0.05）。具體結果如表2所示。

表2 不同HBV DNA水平組血清HBV cccDNA檢出率分析

五、肝患者不同病程進展間血清HBV cccDNA檢出率比較

69例乙型肝炎患者血清標本中，隨著病程的不斷進展，HBV cccDNA檢出率呈現出不斷上升的情況，其中肝癌組的檢出率最高，不同病程之間的陽性檢出率比較均有統計學意義，（均P＜0.05）。具體結果如表3所示。

表3 肝患者不同病程進展間血清HBV cccDNA檢出率分析

討 論

在乙型肝炎HBV病毒的整個生活周期中，cccDNA的形成發揮著十分重要的作用。乙型肝炎治療只有清除了細胞核內的cccDNA，才能徹底消除乙型肝炎患者病毒攜帶狀態［3，4］。目前通過抽血化驗檢測出外周血單個核細胞內和肝組織的HBVcccDNA，這樣可以避免和克服以往乙型肝炎病毒指標檢測的局限性，cccDNA檢測是目前診斷乙型肝炎病情和判斷療效最有潛力和價值的指標［5，6］。

臨床可以用來檢測是否感染HBV，HBV cccDNA的形成會對乙型肝炎病毒的復制、感染等產生較大的影響［7］。如果肝細胞中還存在HBV cccDNA，那么HBV病毒便不會停止復制。因此，臨床可以通過肝組織活檢的方式來對乙型肝炎患者肝組織中的HBV cccDNA水平的變化情況進行檢測［8］。從而更好的了解患者體內HBV感染、復制情況，更好的評估患者的病情和治療效果等。本研究結果顯示，15例肝組織及其血清標本中，HBV cccDNA陽性檢出率方面，血清標本顯著低于肝組織。即提示，較之血清HBV ccc DNA檢測，肝組織HBV cccDNA檢測可以更加準確的評價HBV的感染情況［9］。本研究結果還顯示，肝組織HBV cccDNA和血清中HBV cccDNA水平以及血清HBV DNA水平之間均呈正相關。隨著HBV DNA水平的升高，血清HBV cccDNA拷貝數呈現出不斷增大的情況，二者水平之間呈正相關關系［10］。即提示，血清HBV cccDNA可以間接地反映患者肝組織內HBV cccDNA的情況。結果還發現，69例血清標本中，HBV DNA≥105拷貝/m L的高水平組的血清HBV cccDNA陽性檢出率達到96.6%，顯著高于HBV DNA水平較低組（103拷貝/m L≤HBV DNA＜1× 105拷貝/m L）經比較差異有統計學意義。即說明，高水平復制狀態離不開高濃度模板，而高水平HBV DNA會伴隨高濃度HBV cccDNA［11］。同時，本研究69例乙型肝炎患者血清標本中，隨著病程的不斷進展，HBV cccDNA檢出率呈現出不斷上升的情況，其中肝癌組的檢出率最高，不同病程之間的陽性檢出率比較均有統計學意義。即提示，HBV cccDNA可能會與患者的病情活動以及肝細胞破壞等伴隨出現。對于未出現癥狀的HBV攜帶者，如果病情長期處于穩定狀態，肝細胞未出現明顯損傷，則較難檢測到HBV cccDNA。如果患者的病情出現惡化，肝細胞內容物會大量釋放，肝細胞核中的HBV cccDNA便會大量釋放到血液中，較易臨床監測［12］。

綜上所述，乙型肝炎血清HBV cccDNA可間接反映患者肝組織內的HBV cccDNA情況，與HBV DNA之間具有顯著的相關性，且與病程有關。

1 陶晨，葉偉.乙型肝炎病毒感染患者血清cccDNA檢測及其臨床應用.肝臟，2012，17：132-134.

2 劉志紅，江建寧，李華東，等.核苷（酸）類似物對乙肝患者肝細胞內HBV cccDNA和tDNA及血清HBs Ag的影響研究.中國全科醫學，2012，15：865-867.

3 Nebbia G，Peppa D.Maini M K Hepatitis B infection：eurrent eoncepts and future challenges.QJM，2012，105：109-113.

4 李忠斌，任曉強，劉妍，等.血清病毒檢出核苷（酸）類似物耐藥突變的慢性乙肝患者PBMCs中HBV cccDNA基因突變特點分析.解放軍醫學雜志，2012，37：556-560.

5 楊曉瑞，吳學煒，臧利敏，等.HBV cccDNA SYBR GreenⅠ熒光定量檢測方法的建立及初步應用.現代預防醫學，2012，39：4200-4204.

6 Thompson A J.Serum hepatitis B surface antigen and hepatitis B eanligen tilers：disease phase influences correlation with viral load and intrahepalic hepatitis B virus nmrkers.Hepatology，2010，51：1933-1944.

7 Ying C，Johnny S，He ML.HBV cccDNA patients’sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage. world J Gastroenterol，2004，10：82-85.

8 許春海，李兆申，代俊英，等.單核細胞乙型肝炎病毒ccc DNA檢測方法及應用價值.中華實驗和臨床病毒學雜志，2011，25：307-309.

9 肖曉光，李艷蓮，王晶，等.乙型肝炎患者外周血單個核細胞HBV cccDNA含量的檢測及其臨床意義.大連醫科大學學報，2010，32：348-351.

10 宋閩寧，黃文琪，閔峰，等.HBV感染恢復期血清標志物與肝細胞HBV cccDNA檢測對照.中西醫結合肝病雜志，2012，22：334-336.

11 王美容，邱寧，盧實春，等.肝組織中HBV cccDNA熒光定量聚合酶鏈反應檢測法的建立.中華流行病學雜志，2011，32：504-509.

12 盛慧萍，楊巖，賴雅芳，等.慢性乙型肝炎患者肝組織中HBV ccc DNA定量與病情的相關性分析.山東醫藥，2010，50：12-14.

2014-08-26）

（本文編輯：馮珉）

511300 廣東，增城市人民醫院感染科（張房英，吳啟文，賴小麗，熊曉英，姚葉萍），內三科（黃莉美）