5例HBV前C區1896位點和/或BCP1762、1764位點變異對聚乙二醇干擾素α2a早期應答的影響

胡晨波 金宏慧 李仲平 陳曉蓉

·臨床與基礎研究·

5例HBV前C區1896位點和/或BCP1762、1764位點變異對聚乙二醇干擾素α2a早期應答的影響

胡晨波 金宏慧 李仲平 陳曉蓉

目的 探討HBV前C區1896位點和/或BCP1762、1764位點變異對聚乙二醇干擾素α2a早期應答的影響。方法 選擇5例HBV PC1896和/或BCP1762、1764位點發生變異的慢性乙型肝炎患者，使用聚乙二醇干擾素α2a和/或核苷酸類似物抗病毒治療，觀察患者治療12周、24周、48周時HBs Ag、HBe Ag、HBV DNA、ALT的變化。結果 5例患者使用聚乙二醇干擾素α2a和/或核苷酸類似物抗病毒治療后12周、24周均發生了應答。結論 HBV PC1896和/或BCP1762、1764位點發生變異作為亞洲人群聚乙二醇干擾素α2a治療取得早期應答的預測因素。

乙型肝炎病毒；前C區；基本核心啟動子；變異；聚乙二醇干擾素

當HBV DNA復制通過核糖核酸（RNA）中間體逆轉錄時，由于其逆轉錄缺乏校對功能，因此HBV DNA復制出現錯誤的頻率較其他DNA病毒高得多。HBV發生自然變異最常見的是前C區（PC）及基本核心啟動子區（BCP），它們高頻率地發生及穩定的表型提示這些變異可能會提高HBV復制或逃避宿主免疫反應。目前發現G1896A，A1762T/G1764A雙變異是PC區及BCP區最常見的，也是最重要的變異。

荷蘭Sonneveld MJ等學者認為基線時野生株是聚乙二醇干擾素（PEG-IFN）應答的強烈預測因子，而PC和/或BCP變異株對PEG-IFN應答的可能性較低，這樣的患者并不適合PEG-IFN治療［1］。眾所周知，亞洲人群在宿主的遺傳背景和流行的HBV基因型以及傳播方式與歐洲人群不同，那么歐洲人群的研究結論能適合亞洲人群么？為此，我們觀察了存在PC和/或BCP變異株的漢族人群中5例慢性乙型肝炎患者對PEG-IFNα2a的應答情況，現報道如下：

資料和方法

一、研究對象

2012年10月至2013年5月上海市浦東新區南華醫院肝病科住院的慢性乙型肝炎患者5例，男4例，女1例。慢性乙型肝炎及乙型肝炎肝硬化的診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》診斷標準［2］。所有患者同時排除其他病毒感染及重疊其他病毒引起的肝炎，藥物性、自身免疫性和代謝性肝病，伴有其他臟器損害，糖尿病患者以及飲酒史（乙醇攝入量男＞20 g/d，女＞10 g/d）。

二、實驗室檢測

抽血前1天禁食8小時后，次日晨空腹抽血。采用東芝120全自動生物化學分析儀檢測肝生化指標。PCR法檢測血清HBV DNA，采用美國Bio Rad公司的CF-X96型熒光定量PCR儀及中山大學達安基因股份有限公司的HBV DNA熒光定量檢測試劑盒，檢測范圍為1×102～1×108拷貝/m L。HBV PC1896、BCP1762/1764變異檢測采用PCR加膜雜交法檢測，S1000基因擴增儀，深圳亞能生物試劑。以上檢測操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

三、統計學方法

所有數據錄入EXCLE表格。

結 果

一、病例1

顧××，男，41歲，漢族，職員，乙肝史10年余，否認乙肝家族史，無煙酒嗜好；無陽性體征；BMI：23.03；HBV PC1896：無變異；BCP1762、1764完全變異；基因C型。病毒血清學標志物變化詳見表1。

二、病例2

鞠××，男，32歲，漢族，職員，乙肝史15年，否認乙肝家族史，否認飲酒史；吸煙7支/天*10年；無陽性體征；BMI：21.34；HBV PC1896：完全變異；BCP1762、1764完全變異；基因B型。病毒血清學標志物變化詳見表2。

表1 治療期間病毒血清學標志物、ALT動態變化

表2 治療期間病毒血清學標志物、ALT動態變化

三、病例3

顧××，男，38歲，漢族，農民，乙肝史6月余，有乙肝家族史，無煙酒嗜好；無陽性體征；BMI：22.06；HBV PC1896：完全變異；BCP1762、1764部分變異；基因C型。病毒血清學標志物變化詳見表3。

表3 治療期間病毒血清學標志物、ALT動態變化

四、病例4

董××，男，36歲，漢族，農民，乙肝史1年余，否認乙肝家族史，無煙酒嗜好；無陽性體征；BMI：25.37；HBV PC1896：完全變異；BCP1762、1764無變異；基因B型。病毒血清學標志物變化詳見表4。

五、病例5

徐××，女，39歲，漢族，農民，乙肝史1年余，有乙肝家族史，無煙酒嗜好；無陽性體征；BMI：25.37；HBV PC1896：部分變異；BCP1762、1764完全變異；基因C型。病毒血清學標志物變化詳見表5。

表4 治療期間病毒血清學標志物、ALT動態變化

表5 治療期間病毒血清學標志物、ALT動態變化

討 論

我國《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》中指出干擾素抗病毒得較好療效的預測因素有：（1）治療前ALT水平較高；（2）HBV DNA＜2×108拷貝/m L；（3）女性；（4）病程短；（5）非母嬰傳播；（6）肝組織炎癥壞死較重，纖維化程度輕；（7）對治療的依從性好；（8）無HCV、HDV或HIV合并感染；（9）HBV基因A型；（10）治療12或24周時，血清HBV DNA不能檢出。其中治療前ALT、HBV DNA水平和HBV基因型，是預測療效的重要因素。有研究表明，在PEG IFN-a2a治療過程中，定量檢測HBs Ag水平或HBeAg水平對治療應答有較好預測作用。本組病例的患者12周時都取得了干擾素抗病毒治療的較好療效，但這些病例并不同時具有以上預測因素，病例1、病例5基線HBsAg、HBV DNA病毒載量高，病例2、病例3基線ALT水平較低，而它們共同點是在HBV PC1896位點和/或BCP1762、1764位點發生變異。近期臺灣學者Tseng TC等［3］認為對于HBeAg陽性的亞洲患者PC、BCP區變異可能有助于PEG-IFN應答，而對于高加索人群野生株有助于PEG-IFN應答，這和我們的觀察一致。

干擾素的抗病毒治療效果取決于病毒因素、宿主因素、治療依從性等三方面主要因素。HBV PC區G1896A變異可使HBV PC區第28位密碼子由色氨酸變為終止密碼子，從而阻斷了HBe Ag的產生；但HBV復制和HBc Ag表達并不受此影響［4］。BCP區A1762T/G1764A變異可干擾核心mRNA轉錄，導致HBeAg合成抑制和病毒的高復制表型［5］。與野生型病毒相比，PC區變異的細胞內有更高的復制中間體［6］。

HBV感染的自然史一般可人為地劃分為4個期，即免疫耐受期、免疫清除期、非活動或低（非）復制期和再活動期。在HBV感染的中后期，患者針對HBV感染的免疫一定程度上增強，伴隨著HBV E抗原的血清學轉換，HBV PC和BCP變異株替代野生株成為優勢株［7］。HBV PC區G1896A變異還可以對宿主的免疫產生影響。Mohamadkhani A等發現HBV PC區G1896A突變可能通過降低有效的HLAⅡ類分子，從而直接干擾抗原呈遞，這可能導致了HBe Ag陰性慢性乙型肝炎疾病進展較緩慢［8］。而Moradzadeh M等的研究結果顯示：HBV PC區G1896A發生突變的患者其TLR2水平較野生株患者增高，由于TLR2是介導炎癥的重要因子，所以PC區G1896A發生突變的慢性乙型肝炎患者的ALT水平較野生株患者高［9］。另外，Tong MJ等研究發現HBV PC、BCP變異可以顯著增加慢性乙型肝炎患者原發性肝癌的風險［10］。

綜上所述，我們認為高加索人群的遺傳背景以及HBV的基因型與我們亞洲人群有著很大的差異，歐洲學者發現HBV PC、BCP變異是干擾素治療應答不佳的預測因子的結果可能并不適合亞洲人群。與此相反，亞洲人群HBV PC、BCP變異可能是干擾素應答良好的預測指標，由于HBV PC、BCP變異株的出現處于乙肝感染自然史的中后期，并且發生肝癌的風險較大，故需積極抗病毒治療，降低肝硬化、肝癌發生的風險。由于我們醫療條件的限制，本文所能觀察的病例數較少，沒有相對應的病例對照，以至循證學依據不足，所以我們的結論尚需更多的大樣本、前瞻、對照的研究加以進一步證實。

1 Sonneveld MJ，Rijckborst V，Zeuzem S，et al.Presence of precore and core promoter mutants limits the probability of response to peginterferon in hepatitis B e antigen-positive chronic hepatitis B. Hepatology，2012，56：67-75.

2 中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）.中國病毒病雜志，2011，9-23.

3 Tseng TC，Kao JH，Chen DS.et al.Peginterferon alfa in the treatment of chronic Hepatitis B.Expert Opin Biol Ther，2014，14：995-1006

4 Choi JW，Ahn SH，Park JY，et al.Hepatitis B e antigen-negative mutations in the prefore and core premoter regions in Korean patients.J Med Virol，2009，81：594-601.

5 Scaglioni PP，Melegari M，Wands JP.Biologic properties of hepatitis B viral genomes with mutations in the precore promoter and precore open reading frame.Virology，1997，233，374-381.

6 Heipertz RA Jr，Miller TG，Kelley CM，et al.In vitro study of the effects of precore and lamivudine-resistant mutations on hepatitis B virus replication.J Virol.2007，81，3068-3076.

7 Tong S，Kim KH，Chante C，et al.Hepatitis B Virus e Antigen Variants.Int J Med Sci，2005，2：2-7.

8 Mohamadkhani A，Sotoudeh M，Bowden S，et al.Downregulation of HLA class II molecules by G1896A pre-core mutation in chronic hepatitis Bvirus infection.Viral Immunol，2009，22：295-300.

9 Moradzadeh M，Tayebi S，Poustchi H，et al.The Possible Role of TLR2 in Chronic Hepatitis B Patients with Precore Mutation.Adv Virol，2013，Article ID 780319，5 pages，2013.doi：10.1155/ 2013/780319.

10 Tong MJ，Blatt LM，Kao JH，et al.Basal core promoter T1762/ A1764 and precore A1896 gene mutations in hepatitis B surface antigen-positive hepatocellular carcinoma：a comparison with chronic carriers.Liver Int，2007，27：1356-1363.

2014-09-22）

（本文編輯：賴榮陶）

浦東新區衛生系統優秀青年醫學人才培養（PWRq2012-05）；上海市浦東新區衛生和計劃生育委員會科技發展專項基金資助（PW2014A-60）

201399 上海市浦東新區南華醫院肝病科（胡晨波、金宏慧、李仲平）；201508上海市公共衛生臨床中心（陳曉蓉）

陳曉蓉，Email：xiaorong3chen@yahoo.com.cn