C—erbB—2和ki一67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

郭玲++李維英++劉海燕

【摘要】目的研究子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinmna，EC）組織中癌基因C-erhB-2、Ki-67的表達(dá)，探討兩者與臨床病理特征之間的關(guān)系。方法用免疫組化法分別檢測(cè)C-erhB-2、Ki-67在63例子宮內(nèi)膜癌組織和20例子宮內(nèi)膜不典型增生組中的表達(dá)。結(jié)果C-erhB-2.Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性率分別為82.5%、76.2%，明顯高于子宮內(nèi)膜不典型增生組的20.0%、15.Oo（P<0.05）。C-erhB-2.Ki-67的表達(dá)和手術(shù)病理分期、組織學(xué)分級(jí)及浸潤(rùn)肌層深度有關(guān)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Ki一67的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C-erhB-2的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論在子宮內(nèi)膜癌中C-erhB-2、Ki-67過度表達(dá)，與子宮內(nèi)膜癌的侵襲性有關(guān)，可作為臨床醫(yī)師評(píng)估子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜癌：原癌基因C-erbB-2；細(xì)胞核增殖抗原Ki-67；免疫組化

【中圖分類號(hào)】R737.33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-0742（2015） 06（b）-0009-02

子宮內(nèi)膜癌在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率僅次于宮頸癌。子宮內(nèi)膜癌在美國(guó)新發(fā)婦科惡性腫瘤中約占50%，位居女性惡性腫瘤第四，并且近幾年發(fā)病率越來越高，發(fā)病人群也越來越年輕。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和人體內(nèi)雌激素水平以及體內(nèi)各種癌基因的表達(dá)異常密切相關(guān)。該研究收集濰坊市婦幼保健院、濰坊市人民醫(yī)院2011年7月-2013年10月收入院的63例EC患者的石蠟標(biāo)本對(duì)c-erhB-2、Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)進(jìn)行分析，研究?jī)烧咭鹱訉m內(nèi)膜癌發(fā)生的原理，為臨床醫(yī)師正確分期和制定治療方案提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集濰坊市婦幼保健院、濰坊市人民醫(yī)院2011年7月-2013年10月收入院的63例EC患者的石蠟標(biāo)本，年齡43～68.5歲，平均（56.6+1.08）歲；術(shù)前均未行放、化療以及激素治療，所有診斷均經(jīng)手術(shù)后病理組織學(xué)確定。參照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Federation Inter-national of Cynecology and Ohstetrics，F(xiàn)IGO）2009年手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行臨床分期：0-1期25例，Ⅱ至Ⅳ期38例；其中高分化（G1）30例，中分化（C2）、低分化（G3）共33例。選取同期門診行官腔鏡檢查，經(jīng)病理檢杏為子宮內(nèi)膜不典型增生的病例共20例作對(duì)照組，年齡為46～58歲，平均年齡（50.4+1.35）歲。比較所有患者的年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。

1.2方法

取標(biāo)本同定于10%福爾馬林液溶液中，采用石蠟包裹，持續(xù)切片5μm，并通過免疫組化s-P法即鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化物酶連接法，分別檢測(cè)存在于子宮內(nèi)膜癌組織及子宮內(nèi)膜不典型增生組織中的C-erhB-2和Ki-67的表達(dá)。從上海博谷公司購(gòu)進(jìn)免疫組化試劑，操作時(shí)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

免疫組化結(jié)果的觀察及判斷：應(yīng)用顯微鏡觀察全部染色切片，其中黃色或棕黃色染色提示陽(yáng)性。Ki-67基因的蛋白產(chǎn)物位于細(xì)胞核，C-erhB-2基因的蛋白產(chǎn)物位于細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)。采用400倍顯微鏡觀察切片，隨機(jī)選取每張切片中的10個(gè)切片（一個(gè)視野計(jì)數(shù)絀胞100個(gè)）進(jìn)行觀察，然后將陽(yáng)性細(xì)胞的百分比（%）計(jì)算出來求平均值。依據(jù)染色范圍分4級(jí)：其中陽(yáng)性細(xì)胞低于10%為陰性㈠；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)位于10%～49%之間為弱陽(yáng)性（+）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)位于50%～89%之間為陽(yáng)性（++）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)不低于90%為強(qiáng)陽(yáng)性f+++）。結(jié)果：f+～+++）列為陽(yáng)性表達(dá)，（一）表示無(wú)表達(dá)，列為陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用sPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料運(yùn)用X2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C-erbB-2、Ki-67表達(dá)的免疫組化結(jié)果

C-erhB-2蛋白在細(xì)胞膜上表達(dá)。63例子宮內(nèi)膜癌組織和20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織，C-erhB-2的陽(yáng)性率和陰性率分別是82.5%和20.0%.因此C-erhB-2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著比對(duì)照組高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Ki-67蛋白表達(dá)于細(xì)胞核上。Ki-67的陽(yáng)性率、陰性率在63例子宮內(nèi)膜癌組織及20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織中分別是76.2% .15.0%差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 C-erbB-2、Ki-67的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理因素相關(guān)性

EC手術(shù)病理分期與C-erbB-2的表達(dá)相關(guān)性顯著差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），和腫瘤細(xì)胞組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)肌層深度關(guān)系密切差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C-erhB-2陽(yáng)性表達(dá)率會(huì)根據(jù)細(xì)胞分化程度的降低、肌層浸潤(rùn)的加深，不斷上升，和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否發(fā)生無(wú)關(guān)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。K1-67的表達(dá)與EC手術(shù)病理分期、肌層浸潤(rùn)程度、組織學(xué)病理分級(jí)和是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是常見的惡性腫瘤，且發(fā)病年齡也越來越低，對(duì)女性的健康產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。當(dāng)前研究顯示，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與雌激素長(zhǎng)期刺激并缺乏孕激素的拮抗有關(guān)，該研究探討C-erhB-2、Ki-67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，探討兩者與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的機(jī)制。

Ki-67又稱細(xì)胞激活標(biāo)記，是細(xì)胞增殖的標(biāo)志物之一，定位于第10號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上。Ki-67是9768hp和8686多肽鏈連接組成的mRNA.是DNA結(jié)合蛋白的一種。Ki- 67能夠識(shí)別除GC和Gl早期外，其他各期的核抗體。BRUNO等發(fā)現(xiàn)，Ki-67蛋白的表達(dá)和細(xì)胞周期關(guān)系密切，僅在G1期的中后期，S、G2、M期表達(dá)。Ki-67在腸道黏膜的上皮細(xì)胞等增殖活性高的細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，而在非增生性組織中幾乎不表達(dá)，是公認(rèn)的的核增殖標(biāo)志物中的一種，用于評(píng)價(jià)腫瘤生物學(xué)行為。Ki-67在乳腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中的表達(dá)較強(qiáng)烈，說明腫瘤細(xì)胞的增生活性嚴(yán)重影響著惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后。Ki-67經(jīng)過白我調(diào)控，可降低自身轉(zhuǎn)錄，實(shí)現(xiàn)調(diào)控蛋白表達(dá)要求。再利用白身磷酸化引發(fā)核仁的崩解、形成，最終對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控產(chǎn)生影響。該研究結(jié)果表明，Ki-67蛋白在細(xì)胞核上表達(dá)。在63例子宮內(nèi)膜癌組織及20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織中，Ki-67的陽(yáng)性率、陰性率表達(dá)分別是76.2%、15.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

原癌基因C-erbB-2是表皮生長(zhǎng)因子受體（epithelial growth factorreceptor， EGFR）家族中的一員，能夠激活酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶，并經(jīng)過激活信使系統(tǒng)推動(dòng)細(xì)胞外部信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi)，對(duì)各種基因的轉(zhuǎn)錄C-erbB-2在機(jī)體細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、分化及凋亡過程產(chǎn)生十分重要的影響。一般情況下C-erbB-2均為非激活狀態(tài)，在正常子宮內(nèi)膜表現(xiàn)低表達(dá)或不表達(dá)。若致癌因素作用，C-erbB-2呈現(xiàn)擴(kuò)增或過度表達(dá)則使正常細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，最終引起腫瘤的發(fā)生問。C-erbB-2蛋白在正常的子宮內(nèi)膜組織中無(wú)表達(dá)或者低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜的不典型增生到子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)，呈逐漸增強(qiáng)。Xie等的研究表明，在C-erbB-2癌基因轉(zhuǎn)染的NIH/3T3細(xì)胞核內(nèi)，酪氨酸磷酸化的作用較核外明顯增強(qiáng)，并且直接參與基因調(diào)控，使細(xì)胞出現(xiàn)過度增殖和惡性化。該文顯示，在63例子宮內(nèi)膜癌組織和20例子宮內(nèi)膜不典型增生組織，C-erhB-2的陽(yáng)性率、陰性率分別為82.5%、20.0%，C-erbB-2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C-erhB-2的表達(dá)率與子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)病理分期密切相關(guān)，Ⅱ一Ⅳ期表達(dá)明顯高于0-1期，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)系，腫瘤細(xì)胞分化越差.C-erbB-2陽(yáng)性表達(dá)率越高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），隨著C-erbB-2基因表達(dá)增高，子宮內(nèi)膜癌的侵襲性增強(qiáng)，提示患者預(yù)后越差，符合文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)治療的抵抗性越強(qiáng)。

C-erbB-2和Ki-67的異常表達(dá)參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程，聯(lián)合檢測(cè)兩者的表達(dá)，不僅有助于鑒別子宮內(nèi)膜良、惡性病變，也為指導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的臨床治療，預(yù)后判斷提供幫助，為子宮內(nèi)膜癌防治探索新思路。