小干擾RNA對人卵巢癌細胞株CXCR4基因表達和侵襲力的影響

燕 鋒* 孫國棟 燕 霞 韓文華 劉曉東 崔星亮 劉貴京 王小英 楊 濤 張 靜

（1 邯鄲市中心血站，河北 邯鄲 056002；2 河北工程大學，河北 邯鄲 056002；3 邯鄲市中醫院，河北 邯鄲 056002）

根據近幾年研究可知，CXCR4在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌中具有高度表達，并與腫瘤散播、轉移具有密切聯系[1]。因此，干擾癌細胞的CXCR4有助于繁殖腫瘤轉移。本文主要通過RNA干擾技術，用CXCR4-siRNA對人卵巢細胞株進行轉染，分析siRNA對人卵巢癌細胞株CXCR4基因表達和侵襲力的影響。研究報道如下。

1 資料與方法

1.1 材料和試劑：南京凱基公司提供卵巢癌細胞株SW626，兔抗人CXCR4抗體購于Santa Cruz公司，PCR試劑盒、脂質體Lipofectamine2000、Trizol試劑盒均購于大連寶生物公司，Biocoat Matrigel侵襲能力檢測儀購于美國Becton Dickinson公司[2]。同時，在5%CO2、37 ℃條件下，由DMEM高糖培養液培養SW626細胞，試驗用細胞均在對數生長期狀態。

1.2 方法：利用陽離子脂質體轉染法，按照不同比例的脂質體、質粒轉染SW626細胞，在48 h后利用顯微鏡對轉染效果進行觀察。同時，取對數生長期細胞，在胰酶消化后計數細胞，在50 mL培養瓶中，以每瓶5×105細胞接種，在CO2條件下培養24 h，確保細胞融合率達到85%左右。然后，在根據轉染說明要求進行轉染操作，并放入5%CO2、37 ℃中培養，每隔6 h對培養液進行更換，并根據試驗要求加入其他試劑。轉染48 h后，收集細胞，將細胞裂解液加入其中，提取細胞總蛋白，測試濃度，經過SDS-PAGE凝膠、轉膜、CXCR4抗體反應等，沖洗膠片，測試蛋白質表達水平，利用RT-PCR方法測試CXCR4 mRNA[3]。最后，利用Biocoat Matrigel侵染能力檢測儀對細胞浸染能力進行分析，將測試結果與空白對照組、陰性對照組比較。

1.3 統計學處理：在處理本次的研究結果的過程中，統計數據處理利用統計學軟件SPSS12.0進行，用百分數表示計數資料，并用χ2檢驗，用（±s）表示正太分布的計量資料，且用t檢驗，經過數據處理，當P＜0.05時，表示數據有統計學意義。

2 結 果

在siRNA對卵巢癌CXCR4 mRNA表達影響方面，轉染72 h后，CXCR4 mRNA水平明顯下調，明顯低空白對照組與陰性對照組（P＜0.05）；同時，分析Westerm印跡法檢測結果，CXCR-siRNA組的蛋白表達率明顯低于空白對照組與陰性對照組（P＜0.05）；而在侵襲力影響方面，CXCR-siRNA組穿膜細胞數明顯少于空白對照組與陰性對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 三組CXCR4基因表達及侵襲力情況（±s）

表1 三組CXCR4基因表達及侵襲力情況（±s）

組別 CXCR4 mRNA水平 CXCR4蛋白表達率 穿膜細胞數CXCR-siRNA組 4.56±0.71 16.31±0.18 15.03±2.46空白對照組 13.48±1.59 48.63±1.07 26.01±3.65陰性對照組 11.34±0.64 47.02±0.76 29.18±4.31

3 討 論

趨化因子受體及其配體在腫瘤的發生發展過程中發揮重要作用，對趨化因子受體的信號傳導進行有效拮抗、抑制可控制趨化因子系統功能，進而對惡性腫瘤轉移、復發進行有效防止[4]。作為細胞趨化因子受體之一，CXCR4在組織中表達廣泛，在卵巢、乳腺等惡性腫瘤生長、轉移中發揮作用。同時，由于CXCR4被其配體結合激活后，可聚合細胞肌動蛋白絲，形成定向遷移侵襲，在腫瘤中異常表達。

在本次研究中， 利用小干擾RNA干擾人卵巢癌細胞株CXCR4，分析siRNA作用下，CXCR4 siRNA的mRNA產量，結果，CXCR-siRNA組的CXCR4 mRNA水平、蛋白表達率、穿膜細胞數均明顯低于空白對照組和陰性對照組，而空白對照組與陰性對照組之間無明顯差異。由此可知，小干擾RNAZ可有效抑制人卵巢癌細胞株CXCR4基因表達及侵襲力。在RNA依賴性RNA聚合酶作用下，siRNA大量擴增，轉運出細胞，并以其高效性、可遺傳性、高特異性特點產生強強烈的干擾效應，抑制CXCR4基因[5]。

綜上所述，RNA干擾CXCR4基因后，有效抑制卵巢細胞增增，減緩腫瘤生長，說明卵巢癌基因治療的靶基因可能為CXCR4基因，為卵巢癌治療提供新的方法，值得在以后臨床研究中試驗、推廣。

[1]湯容,于國新,袁瑞,等.shRNA抑制人卵巢癌SW626細胞CXCR4基因的研究[J].生物技術通報,2010,26(4):165-168.

[2]劉瑜,袁瑞.CXCR4-siRNA重組腺病毒載體沉默人卵巢癌細胞株CXCR4基因表達的研究[J].重慶醫科大學學報,2011,36(10):1168-1171.

[3]王紅英,王景苗,靳衛國,等.siRNA靶向沉默CXCR4基因對人卵巢癌SW626細胞增殖、遷移及侵襲的影響[J].現代婦產科進展,2012,21(11):848-856.

[4]燕霞,燕鋒,張靜,等.siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因對卵巢癌腹腔轉移的影響[J].河北醫藥,2013,(24):3701-3703.

[5]湯容.siRNA抑制人卵巢癌SW626細胞CXCR4基因的研究[D].重慶:重慶醫科大學,2010.