ε-聚賴氨酸產生菌的復合誘變篩選及其發酵培養基優化

吳晨奇，扶教龍，2，*，陳冬銓，錢大偉，李良智，2，胡翠英，王桃云（.蘇州科技學院化學生物與材料工程學院，江蘇蘇州25009；2.蘇州市新能源與低碳技術重點實驗室，江蘇蘇州25009）

ε-聚賴氨酸產生菌的復合誘變篩選及其發酵培養基優化

吳晨奇1，扶教龍1，2，*，陳冬銓1，錢大偉1，李良智1，2，胡翠英1，王桃云1
（1.蘇州科技學院化學生物與材料工程學院，江蘇蘇州215009；2.蘇州市新能源與低碳技術重點實驗室，江蘇蘇州215009）

以白色鏈霉菌FQ-9為出發菌株，首次利用（甘氨酸+L-賴氨酸+磺胺胍）復合抗性，進行“紫外-氯化鋰”復合誘變，篩選出一株ε-PL產量達（0.668±0.0045）g/L的突變菌株FQC-23，產量提高了15.37%，且其遺傳性穩定。然后在單因素實驗的基礎上，應用響應面分析方法，對其發酵培養基進行優化，最終確定最佳培養基為（g/L）：葡萄糖46.1、酵母粉13.0、（NH4）2SO45.9、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO40.8、KH2PO41.36、FeSO4·7H2O 0.03、ZnSO4·7H2O 0.04，在此條件下，FQC-23的ε-PL產量達（1.090±0.0041）g/L，比出發菌株的產量提高了87.56%。

ε-聚賴氨酸，抗性平板，誘變，響應面分析方法，白色鏈霉菌

ε-聚賴氨酸（ε-PL）是一種由L-賴氨酸殘基通過α-羧基和ε-氨基連接而成的微生物源線性多聚物，它可用作食品防腐劑，具有抑菌譜廣、安全性能高、熱穩定性好等優點，這使它成為目前最具潛力的生物防腐劑［1］。ε-PL已在美國、日本和韓國等地被廣泛使用，而我國也批準了ε-PL可用作食品添加劑。此外，ε-PL還可用作載體材料、可降解性材料和高吸水性聚合材料等［2］。因此，ε-PL具有廣闊的應用前景。

目前，研究人員在ε-PL高產菌的篩選及育種方面做了大量的研究。然而，ε-PL產生菌的生產能力依然較低，這在一定程度上制約了對它進一步的研究和利用。通過遺傳改良來獲得高產菌株，是提高ε-PL產率的關鍵，國內外研究者主要是通過物理或化學方法（UV、NTG、DES、亞硝酸等）對菌種進行誘變，并結合對產物（ε-PL）或代謝中間產物的結構類似物（如AEC、AHV）等的耐受進行高產菌種的篩選［3-7］。但從這些研究可以發現，國內ε-PL產生菌的生產能力與日本相比還存在一定差距，因此在育種方面還需進行深入的研究。微生物代謝控制育種是通過遺傳育種技術獲得解除或繞過正常代謝途徑的突變株，從而選擇性地大量合成積累有用產物的方法［8］。基于此，本研究以白色鏈霉菌FQ-9為出發菌株，應用微生物代謝控制育種與物理復合誘變相結合的方法對其進行誘變篩選，并采用單因素與響應面結合的方法，對其發酵培養基進行優化，以進一步提高ε-PL發酵水平。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

白色鏈霉菌（Streptomyces albulus）FQ-9由本實驗室保藏；甲基橙、甘氨酸（Gly）、L-賴氨酸（LLys）、磺胺胍（SG）、酵母粉AR，阿拉丁試劑（上海）有限公司；葡萄糖、硫酸銨、MgSO4·7H2O、K2HPO4、KH2PO4等AR，國藥集團化學試劑有限公司；蛋白胨、瓊脂粉BR，國藥集團化學試劑有限公司；ε-PL標準品南京工業大學徐虹教授惠贈。

UV-2450紫外-可見光分光光度計日本島津企業管理（中國）有限公司；UNE500滅菌烘箱德國MEMMERT公司；SW-CJ-2FD超凈臺蘇州凈化設備有限公司；TS-2102型搖床上海天呈科技有限公司；隔水式恒溫培養箱上海精宏實驗設備有限公司；實驗室常規儀器。

1.2實驗方法

1.2.1培養基的配制

1.2.1.1貝特納斜面培養基葡萄糖10 g，蛋白胨2 g，酵母粉1 g，瓊脂15 g，加水定容至1 L，pH7.5，115℃滅菌20 min。

1.2.1.2Gly、L-Lys和SG抗性平板葡萄糖10 g，蛋白胨2 g，酵母粉1 g，瓊脂15 g，一定量的Gly，L-Lys和SG，加水定容至1 L，pH7.5，115℃滅菌20 min。

1.2.1.3種子和發酵培養基（M3G）葡萄糖50 g，酵母粉5 g，（NH4）2SO410 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO40.8 g，KH2PO41.36 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，ZnSO4·7H2O 0.04 g，加水定容至1 L，pH6.8，115℃滅菌20 min。

1.2.2培養方法

1.2.2.1斜面及平板培養單孢子懸液涂布于貝納特斜面培養基或抗性平板，30℃恒溫培養5～6 d形成孢子，保藏備用。

1.2.2.2種子培養250 mL的三角瓶中裝液50 mL，接入一環孢子，200 r/mim，30℃培養24 h。

1.2.2.3搖瓶發酵培養250 mL的三角瓶中裝液50 mL，按10%接種量接入種子液，200 r/mim，30℃培養72 h。

1.2.3指標的測定

1.2.3.1ε-PL產量測定方法參照Itzhaki F R方法［9］。

1.2.3.2致死率計算方法致死率（%）=［（對照組菌落數-處理組菌落數）/對照菌落數］×100

1.2.3.3致死率偏差計算方法致死率偏差=－|致死率－80%|，致死率偏差越接近于零，表明此時致死率越接近80%，負號表明作三維響應面圖時開口朝下。

1.2.4單孢子懸浮液制備用無菌生理鹽水洗下S.albulus斜面上成熟的孢子，制成孢子懸液，然后轉移至含有玻璃珠的無菌三角瓶中，經充分振蕩，使孢子打散后，用八層紗布進行過濾，即得單孢子懸液。

1.2.5抗性平板中Gly、L-Lys和SG濃度的確定

1.2.5.1單一抗性物質對單菌落生長的影響將0.1 mL出發菌株的單孢子懸液涂布于含有不同抗性物質，不同設計水平的抗性平板上，每個處理做三個平行，進行平板培養，觀察平板上菌落的生長情況，以確定抗性平板中Gly、L-Lys和SG的濃度。其中Gly添加濃度（g/L）：0、1.5、3、4.5、5.5、6.5、7.5、8.5、10、12、14、16，其他同斜面培養基；L-Lys添加濃度（g/L）：0、0.1、0.4、0.7、1.0、1.3、1.6、1.9、2、2.5、3、4，其他同斜面培養基；SG添加濃度（g/L）：0、1.5、4、6.5、9、11.5、14，其他同斜面培養基。

1.2.5.2復合抗性的濃度優化實驗在單因素抗性篩選實驗的基礎上，進一步優化Gly、L-Lys和SG三者的復合濃度。以Gly、L-Lys和SG為三種篩選因子，以致死率偏差為響應值，應用響應面設計方法并利用Design-Expert 8.0.6軟件［10］，設計三因素三水平實驗，其因素與水平設計見表1，優化復合抗性濃度。

表1　Box-Behnken實驗因素與水平Table 1　Variable and levels of response surface Box-Behnken design

1.2.6誘變方法

1.2.6.1紫外（UV）復合氯化鋰誘變取單孢子懸液5 mL，加入到9 cm直徑的無菌培養皿中，在紫外誘變箱內距15 W紫外燈30 cm處進行攪拌照射誘變，在紅光下稀釋涂布固體平板培養基，培養基中添加0.5%的LiCl作為助誘變劑［11］，避光平板培養。

1.2.6.2初篩紫外復合氯化鋰誘變后，涂布于復合抗性平板上，平板培養后，從平板中挑取表面粗糙干燥、呈現圓形或不規則形、孢子量大且豐滿的單菌落，接入到斜面培養基中，斜面培養，4℃冰箱中保藏用于復篩［12］。

1.2.6.3復篩將初篩得到的菌株逐個進行搖瓶發酵，測定其ε-PL產量。

1.2.7菌株遺傳穩定性實驗將篩選出的高產菌株在斜面培養基上連續轉接6代，并進行搖瓶發酵培養，測定ε-PL的產量，檢測菌株遺傳性狀。

1.2.8發酵培養基優化

1.2.8.1發酵培養基的單因素實驗本實驗選擇了培養基中對發酵影響較大的三種成分：葡萄糖、酵母粉和硫酸銨，分別考察其不同濃度對誘變菌株發酵產ε-PL的影響。其中，選擇葡萄糖濃度（g/L）為10、20、30、40、50、60、70，其他同發酵培養基，來選擇最佳的葡萄糖濃度；選擇酵母粉濃度（g/L）為2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5，其他同發酵培養基，來選擇最佳的酵母粉濃度；選擇硫酸銨濃度（g/L）為1.5、3.0、4.5、6.0、7.5、9.0、10.5、12.0，其他同發酵培養基，來選擇最佳的硫酸銨濃度。

1.2.8.2發酵培養基優化的響應面分析實驗根據單因素的實驗結果，選用葡萄糖、酵母粉及硫酸銨為考察因素，采用Box-Behnken中心組合實驗設計［13］，設計三因素三水平的響應面分析實驗，其實驗因子和編碼水平見表2。

表2　Box-Behnken實驗因素與水平Table 2　Variable and levels of response surface Box-Behnken design

1.2.9數據處理方法所有實驗做3個平行，Excel進行實驗數據誤差分析，Design Expert軟件對響應面實驗得到的數據進行線性回歸和方差分析。

2　結果與分析

2.1抗性平板中Gly、L-Lys和SG濃度的確定

目前在篩選ε-PL抗性突變株時，常用的抗性物質是AEC與Gly的混合物，但AEC價格昂貴，且用量極大［4，6，14］。研究表明，L-Lys是ε-PL的合成前體，能直接被ε-PL生物合成所利用［15-16］；此外，SG是β-氨基安息香酸的結構類似物，SG抗性可以解除天冬氨酸對磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）的反饋抑制作用［16］。選育SG抗性突變株，可增強L-Lys前體天冬氨酸的合成，從而提高L-Lys的代謝流，進而提高ε-PL的產量。

因此，本文選擇Gly、L-Lys和SG這三種抗性物質，同時添加到抗性平板上，篩選出具有這三種抗性的突變株。實驗首先須確定Gly、L-Lys和SG的最佳濃度。

2.1.1單一抗性物質對單菌落生長的影響當Gly、L-Lys和SG濃度分別為5.5、1.3、4 g/L時，平板中開始出現少量不長孢子的單菌落，但大部分菌落的孢子豐滿且量大，菌落生長良好；當Gly、L-Lys和SG濃度分別低于5.5、1.3、4 g/L時，其濃度對出發菌株的生長基本沒有影響，孢子量大且豐滿；而當三個抗性物質濃度高于上述添加量時，平板中明顯大多數單菌落都不長孢子，當三種濃度分別達到14、3、9 g/L時，菌株幾乎無法生長。實驗結果見表3。根據文獻，高產菌株的特征是孢子量大且豐滿［12］。故本實驗將Gly、L-Lys和SG的濃度分別以5.5、1.3和4 g/L為中心點，以對抗性濃度進行進一步優化。

表3　各抗性物質對FQ-9的生長影響Table 3　Effect of resistant substance concentration on growth of FQ-9

2.1.2復合抗性的濃度優化實驗結果實驗中，設置當復合抗性平板上菌落的致死率越接近80%，復合抗性平板中三種成分的濃度組成越好。響應面實驗設計及結果見表4。

表4　響應面實驗設計與結果Table 4　Box-Behnken design and corresponding results

根據表4的實驗結果，對表中數據進行多元回歸擬合，得到致死率偏差（R1）對Gly（A1）、L-Lys（B1）、SG（C1）的多項回歸方程為：R1=－0.853＋0.074A1＋0.437B1＋0.143C1－5.819×10-3A1B1－6.617×10-3A1C1－0.021B1C1－2.875A12－0.114B12－7.941×10-3C12，對實驗結果進行方差分析，結果如表5所示。

從表5可以看出，模型相關性系數R2=0.9974，校正決定系數R2Adj=0.9939，這兩個值說明模型的實測值和預測值有良好的擬合度，能夠較好地解釋響應面值的變化。此次實驗的C.V.值為6.64%，說明此次實驗是可信的。而且模型的p值小于0.0001，表明模型極顯著，方程對實驗結果擬合較好，而失擬項的p值為0.2163，說明失擬項不顯著，殘差有隨機誤差引起，模型是可行的。

表5　回歸系數檢驗表Table 5　ANOVE analysis for regression equation

通過求解回歸方程，可解出復合抗性的最佳組成濃度為：Gly 5.95 g/L，L-Lys 1.33 g/L，SG 4.79 g/L，此時致死率偏差為-0.0014，致死率為80%±0.14%?？紤]實際操作的方便，最終三種抗性物質的濃度為：Gly 5.95 g/L，L-Lys 1.35 g/L，SG 4.80 g/L，按此濃度進行三次驗證實驗，致死率分別為80.29%、80.29%、79.75%，平均致死率為80.11%±0.25%，與預測值接近，且在驗證實驗中，單菌落基本都長出豐滿且量大的孢子。實驗結果表明，應用響應面方法優化三種抗性濃度是可靠的。

2.2紫外誘變

2.2.1紫外線誘變時間的確定取制備好的濃度為108個/mL的FQ-9的單孢子懸液分別振蕩照射0、15、20、30、45、60、75、90、120 s。將照射后的懸液在紅光下進行稀釋，取稀釋液0.1 mL涂布于復合抗性平板，每個時間做三個平行，同時做對照實驗，避光培養后進行活菌計數，以照射時間為橫坐標，致死率為縱坐標，繪制致死率曲線圖，見圖1。

圖1　S.albulus FQ-9紫外誘變致死率曲線Fig.1　The fatality rate curve of Streptomyces albulus FQ-9

由圖1可看出，當紫外輻照時間為60 s時，致死率為86.73%±0.325%，接近80%，選擇60 s為紫外誘變處理時間。

2.2.2UV復合氯化鋰突變株篩選結果將誘變處理的孢子懸液涂布于含有0.5%LiCl的復合抗性平板上，避光培養。從平板上挑取40個生長良好的單菌落進行初篩和復篩，測定ε-PL產量。篩選結果見圖2，圖中水平虛線為出發菌株FQ-9的ε-PL產量。

圖2　紫外誘變的篩選結果Fig.2　Result of UV mutagenesis

從圖2可發現，有19株突變株的產量得到提高，其中23號菌株FQC-23表現最突出，產量達（0.668± 0.0045）g/L，較FQ-9提高了15.37%，故選取FQC-23進行遺傳穩定性研究。結果表明，在紫外線、LiCl和復合抗性物質的作用下，正突變率接近50%。

2.2.3遺傳性狀穩定性實驗將篩選出的突變株FQC-23在復合抗性斜面上連續轉接6代，其產孢速度基本一致，ε-PL產量穩定，其中第二代的產量為（0.652±0.0038）g/L，第四代為（0.647±0.0015）g/L，第六代為（0.653±0.0015）g/L，ε-PL產量介于0.647～0.653 g/L之間，結果表明該菌株遺傳性能穩定，Gly5.95L-Lys1.35SG4.80復合抗性標記可穩定遺傳。

2.3發酵培養基的優化

2.3.1葡萄糖濃度對ε-PL產量的影響由圖3可以看出，隨葡萄糖濃度的增加，ε-PL產量也增加；當葡萄糖濃度達到40 g/L時，ε-PL產量達到最大，可達（0.653±0.0055）g/L；而當葡萄糖濃度繼續加大時，ε-PL產量反而下降，這表明過大的添加量并不利于ε-PL產量的增大，這可能是由于在發酵過程中過多葡萄糖容易引起“葡萄糖效應”，進而影響菌體生長和代謝產物的形成。故在本實驗的考察范圍內葡萄糖最佳濃度為40 g/L。

圖3　葡萄糖濃度對ε-PL產量的影響Fig.3　Effect of glucose concentration on the yield of ε-PL

2.3.2酵母粉濃度對ε-PL產量的影響由圖4可以看出，當酵母粉濃度低于10 g/L時，ε-PL產量不斷增加，并達到最大值（0.823±0.0032）g/L，繼續增加酵母粉的濃度，ε-PL產量反而降低，可能是由于酵母粉成分復雜，后期底物消耗不完，會誘導產生一些酶降解白色鏈霉菌菌絲體，因此，確定酵母粉最佳濃度為10 g/L。

圖4　酵母粉濃度對ε-PL產量的影響Fig.4　Effect of yeast powder addition on the yield of ε-PL

2.3.3硫酸銨濃度對ε-PL產量的影響由圖5可以看出，當硫酸銨濃度為6 g/L時，ε-PL產量達到最大的（0.658±0.0026）g/L，繼續增加硫酸銨濃度，ε-PL產量反而降低，這表明過多的硫酸銨并不利于ε-PL的形成，只有適宜的濃度才有利于ε-PL形成，故在本實驗的考察范圍內，硫酸銨的最佳濃度為6 g/L。

2.3.4響應面設計優化發酵培養基組成

圖5　硫酸銨濃度對ε-PL產量的影響Fig.5　Effect of（NH4）2SO4on the yield of ε-PL

2.3.4.1模型的建立及顯著性檢驗根據單因素結果，采用Design-Expert軟件對葡萄糖、酵母粉、硫酸銨進行優化，實驗結果如表6所示。

表6　Box-Behnken實驗設計及結果Table 6　Box-Behnken design and corresponding results

用Design-Expert軟件，對表6進行多元回歸擬合，可以得到ε-PL產量（R2）對葡萄糖（A2）、酵母粉（B2）、硫酸銨（C2）的回歸方程為：R2=1.030＋0.067A2＋0.170B2＋0.028C2＋7.000×10-3A2B2－0.037A2C2－0.018B2C2－0.059A22－0.150B22－0.092C22，對實驗結果進行顯著性檢驗及方差分析，結果如表7所示。

從表7可以看出，模型p<0.0001，表明該模型是高度顯著的，方程擬合度較好；同時失擬項的p為0.3293，說明模型失擬不顯著，殘差由隨機誤差引起，模型選擇正確；該方程系數R2=0.9986，說明方程的擬合程度較好，該模型能較好地預測發酵培養基組分與ε-PL產量的關系；校正決定系數R2Adj=0.9967，表明方程模型可信度較高，能夠較好地描述實驗結果。

2.3.4.2響應面優化及分析根據BB實驗設計結果做出三維響應面（見圖6~圖8），它們分別反映了葡萄糖（A2）、酵母粉（B2）、硫酸銨（C2）這三個因素的兩兩交互作用對響應值的影響。

表7　回歸系數檢驗表Table 7　ANOVE analysis for regression equation

圖6　葡萄糖和酵母粉對ε-PL產量影響的響應面分析圖Fig.6　Response surface plot for the effects of ε-PL production between glucose and yeast powder

葡萄糖和酵母粉對ε-PL產量的影響如圖6所示，當葡萄糖濃度一定時，ε-PL產量隨著酵母粉濃度增加而增大，但當酵母粉濃度大于13.03 g時，ε-PL產量呈下降趨勢。當酵母粉濃度一定時，隨著葡萄糖濃度的增加，開始ε-PL產量也隨之增大，但當葡萄糖濃度繼續增大時，ε-PL產量逐漸降低。

圖7　葡萄糖和硫酸銨對ε-PL產量影響的響應面分析圖Fig.7　Response surface plot for the effects of ε-PL production between glucose and（NH4）2SO4

等高線的形狀可以反映因素間交互作用的強弱，圓形表示交互作用不顯著，橢圓形表示交互作用顯著。如圖7所示，葡萄糖與硫酸銨交互作用顯著，等高線葡萄糖的交點多于與硫酸銨的交點，因此葡萄糖、硫酸銨的交互作用中，葡萄糖對ε-PL產量的影響較大，為主效應因子。

圖8　酵母粉和硫酸銨對ε-PL產量影響的響應面分析圖Fig.8　Response surface plot for the effects of ε-PL production between（NH4）2SO4and yeast powder

酵母粉和硫酸銨對ε-PL產量的影響如圖8所示，當硫酸銨濃度一定時，ε-PL產量隨著酵母粉濃度增加呈先增大后降低的趨勢。當酵母粉濃度一定時，ε-PL產量先增大后降低，這與圖6和圖7顯示的規律相同。此外從響應面圖可分析得出，在各因素之間的交互影響中，酵母粉對ε-PL產量影響最大，葡萄糖次之，硫酸銨最弱。此結果與方差分析表所反映出的結果一致。在此基礎上，通過Design-Expert軟件，進行分析計算，可得最佳發酵培養基配方為：葡萄糖46.16 g/L、酵母粉13.03 g/L，（NH4）2SO45.91 g/L，在此條件下，ε-PL產量的預測最大值為1.101 g/L?？紤]到實際培養基的配制，最終確定這三個因素的濃度分別為：葡萄糖46.1 g/L、酵母粉13.0 g/L，（NH4）2SO45.9 g/L。

2.3.4.3優化培養基的驗證為了驗證實驗結果的可靠性，按上述最終培養基參數進行驗證實驗，三次重復實驗的ε-PL產量分別為1.090、1.095 g/L及1.085 g/L，平均值為（1.090±0.0041）g/L，與預測值只相差1%，表明此模型是可行有效的，并具有一定的實踐參考價值。

3　結論

采用紫外-氯化鋰復合誘變，結合Gly-L-Lys-SG三種抗性的代謝控制育種方法，篩選獲得了一株ε-PL高產菌株Gly5.95L-Lys1.35SG4.80-FQC23，其產量為（0.668±0.0045）g/L，遺傳穩定性良好，比出發菌株提高15.37%。并在單因素實驗基礎上，采用BB實驗設計，對其發酵培養基進行了優化，通過響應面法對實驗數據進行優化與評價，得到影響ε-PL產量的二次多項式回歸模型，并對該模型進行顯著性檢驗。最終得到優化的培養基為（g/L）：葡萄糖46.1，酵母粉13.0，（NH4）2SO45.9，MgSO4·7H2O 0.5，K2HPO40.8，KH2PO41.36，FeSO4·7H2O 0.03，ZnSO4·7H2O 0.04，在此條件下，ε-PL產量達1.101 g/L，重復驗證測得ε-PL產量為（1.090±0.0041）g/L，兩者相對偏差小于5%。因此，采用響應面法優化白色鏈霉菌培養基組成穩定可行。綜上所述，代謝控制育種方法和響應面法優化培養基都為后續進一步深入研究打下了良好的基礎。同時，也可為其他菌種的選育提供一定參考借鑒。

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Breeding of ε-poly-L-lysine producing strain with combined mutation and the optimization of its fermentation medium

WU Chen-qi1，FU Jiao-long1，2，*，CHEN Dong-quan1，QIAN Da-wei1，LI Liang-zhi1，2，HU Cui-ying1，WANG Tao-yun1
（1.School of Chemistry Biology and Material Engineering，Suzhou University of Science and Technology，Suzhou 215009，China；2.Key Laboratory of New Energy and Low-carbon Technology of Suzhou City，Suzhou 215009，China）

Using Streptomyces albulus FQ-9 as the initial strain mutated by UV combined with LiCl，and using glycine+sulfaguanidine（SG）+L-lysine as selective markers.Then，a ε-PL-producing strain，Streptomyces albulus FQC-23 of the yield improved to（0.668±0.0045）g/L was screened，which was 15.37%higher than that of FQ-9.Moreover，based on single factor experiment，the fermentation medium of ε-PL producing strain FQC-23 were optimized by response surface methodology，and finally determined the optimal fermentation medium as follows（g/L）：glucose 46.1，yeast powder 13.0，（NH4）2SO45.9，MgSO4·7H2O 0.5，K2HPO40.8，KH2PO41.36，FeSO4·7H2O 0.03，ZnSO4·7H2O 0.04.Under the optimized medium，the yield of ε-PL reached（1.090± 0.0041）g/L and increased by 87.56%compared with the previous condition.

ε-poly-L-lysine；resistant medium plate；mutation；response surface methodology；Streptomyces albulus

TS201.3

A

1002-0306（2015）18-0186-07

10.13386/j.issn1002-0306.2015.18.029

2014－12－22

吳晨奇（1989-），男，碩士研究生，研究方向：生物化工、食品微生物，E-mail：612324wcq@163.com。

扶教龍（1969-），男，副教授，主要從事生物化工、發酵工程方面的研究，E-mail：jlfu999@126.com。

蘇州市科技計劃項目（SYN201317）；蘇州科技學院科研基金項目（XKZ201411）。