ER、PR、MMP-9在絕經后子宮內膜息肉中的表達

高翠嫻范治軍

（1 大連市婦幼保健院，遼寧 大連 116000；2 大連醫科大學附屬第三醫院，遼寧 大連 116000）

ER、PR、MMP-9在絕經后子宮內膜息肉中的表達

高翠嫻1范治軍2

（1 大連市婦幼保健院，遼寧 大連 116000；2 大連醫科大學附屬第三醫院，遼寧 大連 116000）

目的 通過觀察絕經后子宮內膜息肉中ER、PR、MMP-9的表達情況，探討子宮內膜息肉的相關發病機制，并尋找預測絕經后子宮內膜息肉惡變可能的相關蛋白，指導治療及判斷預后。方法 實驗選取的病例標本來自我院2013年1月1日至2013年12月31日的手術患者，其中經手術切取的絕經后子宮內膜標本18例，經宮腔鏡下摘除或宮腔鏡手術切除的絕經后子宮內膜息肉標本30例。采用免疫組化法，檢測兩組中ER、PR、MMP-9在組織中的表達情況。取半定量評分方法，分析兩組中腺體及間質細胞中陽性細胞的平均百分數進行評估。結果 實驗組與對照組中ER的表達陽性率分別為93%和78%，ER蛋白在實驗組強陽性表達情況高于對照組；PR的表達陽性率分別為87%和67%，PR蛋白在實驗組強陽性表達情況高于對照組；MMP-9的表達陽性率分別為33%和11%，MMP-9的陽性表達呈現弱陽性，且實驗組陽性表達情況高于對照組。結論 ER、PR含量升高促使絕經后子宮內膜息肉的發生；MMP-9的表達參與了絕經后子宮內膜息肉的生成；經后子宮內膜息肉中MMP-9的表達不能作為子宮內膜息肉向子宮內膜癌發展的預測指標。

絕經后；內膜息肉；ER；PR；MMP-9

子宮內膜息肉在絕經前、絕經后婦女中均可發生，是比較常見的瘤樣病變，為婦科常見疾病。其發病率國外文獻報道為7.8%～34.9%，惡變率1.0%～1.6%[1-2]。而在絕經后的子宮內膜息肉患者中，部分患者發生了自子宮內膜息肉發展為子宮內膜癌的轉變，其惡變率高達4.1%[3-4]，目前大多數研究普遍認為體內ER、PR表達水平失衡與子宮內膜息肉的發生密切相關[5]。ER和PR是配體依賴轉錄活性因子超家族的成員。子宮內膜中ER的表達較多，表現為子宮內膜的增生以及血管的增殖。雌激素還可以誘導ER和PR的不斷生成，長期過度的作用便可促進子宮內膜發生增生形成息肉，個別甚至發生癌變。PR與孕激素結合后在子宮內膜中發揮作用的途徑與和雌激素基本相同。基質金屬蛋白酶（MMP），是腫瘤細胞侵襲和轉移的關鍵因素，也參與炎癥的發生及擴散等病理變化。子宮內膜息肉上MMP-9的高表達提示其在絕經前后內膜息肉的發生、發展中可能起到了一定的作用。MMP-9在正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生及子宮內膜癌組織中的陽性表達率逐漸升高，提示MMP-9促進子宮內膜癌的進展。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病例標本：所有病例均為我院2013年1月1日至2013年12月31日收治的患者，所有患者均無體質量標準為肥胖情況，無高血壓病、糖尿病病史，未服用過三苯氧胺類藥物、非甾體抗炎藥，無經歷雌孕激素替代治療病史。所有患者年齡、絕經時間及孕產次均無統計學差異。

1.1.2實驗儀器：4950型石蠟包埋機、Lecia RM2235輪轉式組織切片機、DMR+Q550病理圖像分析儀、脫水機、切片機、微波儀、S261型變焦體視顯微鏡、微量電子天平、可調微量加樣器。

1.1.3實驗試劑：即用型雌激素受體（ER）鼠抗人單克隆抗體、即用型孕激素受體（PR）鼠抗人單克隆抗體、即用型基質金屬蛋白酶-9鼠抗人單克隆抗體、DAB顯色劑、檸檬酸抗原修復液、APES防脫片劑、多聚-L-賴氨酸/PBS粉劑、無水乙醇、丙酮、二甲苯、蘇木精、伊紅。

1.2方法

1.2.1實驗分組：分為對照組和實驗組兩組。對照組包含經手術切取的絕經后子宮內膜標本18例，所有患者平素身體健康，自然絕經后超1年，因子宮脫垂行陰式全子宮切除術，術前超聲提示子宮萎縮，內膜厚＜5 mm，術中剖視大體標本，見內膜光滑，萎縮，術后病理證實為正常絕經后內膜。患者年齡為51～74歲，中位年齡為（56±4.81）歲。實驗組包含經宮腔鏡下摘除或宮腔鏡手術切除的絕經后子宮內膜息肉標本30例，所有患者平素身體健康，自然絕經后超1年因陰道排液、流血、下腹痛、常規體檢超聲提示內膜厚≥5 mm，回聲欠均勻，進一步宮腔鏡檢查提示子宮內膜息肉，行宮腔鏡下內膜息肉摘除術或宮腔鏡下內膜息肉切除術，病理證實為子宮內膜息肉，排除其他內膜病變。患者年齡為49～72歲，中位年齡為（54±5.01）歲。

1.2.2實驗方法

1.2.2.1免疫組化標本處理：玻片表面涂上一層多聚-L-賴氨酸膠，烤干備用，將各張切片加入含有3%過氧化酶的阻斷劑50 μL，其作用是阻斷內源性過氧化酶的活性，微波下抗原修復，加入10%正常兔血清50 μL，加入第一抗體（簡稱一抗，分別為即用性抗ER、PR、MMP-9單抗）50 μL，加入生物素標記的第二抗體（兔抗鼠單抗）50 μL，加入SP溶液50 μL，加入新鮮配制的DAB 100 μL，顯色、脫水、中性樹膠封片。

圖1　對照組ER低倍鏡下表達情況

圖2　對照組ER高倍鏡下表達情況

圖3　實驗組ER低倍鏡下表達情況

圖4　實驗組ER高倍鏡下表達情況

圖5　對照組PR低倍鏡下表達情況

圖6　對照組PR高倍鏡下表達情況

圖7　實驗組PR低倍鏡下表達情況

圖8　實驗組PR高倍鏡下表達情況

圖9　對照組MMP-9低倍鏡表達情況

圖10 對照組MMP-9高倍鏡表達情況

圖11　實驗組MMP-9低倍鏡表達情況

圖12　實驗組MMP-9高倍鏡表達情況

1.2.2.2免疫組化法檢測ER、PR、MMP-9的表達：免疫組化陽性染色為棕黃色顆粒，其中ER、PR為細胞核陽性，MMP-9為細胞質陽性，表達的判定以陽性細胞的百分率進行評估。

1.2.2.3計分方法：染色結果觀察采用盲法，由兩位病理科醫師在不知病理分級和臨床資料的情況下讀片，取半定量評分方法，每張切片隨機選擇5個視野，在全切片的上、下、左、右、中選取視野，在高倍光鏡下（400×）用病理圖像分析系統，根據視野中的染色情況計數陽性細胞數量，分別測定患者子宮內膜息肉及正常絕經后子宮內膜的腺體及間質細胞中陽性細胞的平均百分數。每張切片根據陽性細胞的百分率分別作出判斷：（-）為未出現反應細胞，（+）為＜25%陽性細胞，（++）為25%---50%陽性細胞，（+++）為50%～75%陽性細胞，（++++）為75%～100%陽性細胞。

1.2.3統計方法：采用SPSSl9.0軟件包進行統計數據分析，數據采用t檢驗和單因素方差分析進行統計學處理，P＜0.05為有顯著性差異。

2　結 果

免疫組化染色觀察及分析：免疫組化陽性染色為棕黃色顆粒，ER、PR、MMP-9均可表達于患者子宮內膜息肉及正常子宮內膜的腺體及間質細胞中，其中ER、PR表達于細胞核，表達的強弱判定以陽性細胞占總細胞的百分率進行評估，MMP-9表達于細胞質，表達的強弱判定以陽性細胞占總細胞的百分率進行評估。

2.1ER蛋白主要定位于細胞核，胞質少量染色，其在實驗組及對照組中的陽性率分別為93%和78%（t=1.064，P＜0.05），ER蛋白在實驗組強陽性表達情況高于對照組（P＜0.05）。見圖1～4和表1。

2.2PR蛋白定位于細胞胞核，實驗組與對照組中PR的表達陽性率分別為87%和67%（t=1.187，P＜0.05），PR蛋白在實驗組強陽性表達情況高于對照組（P＜0.05）。見圖5～8和見表2。

表1　ER在兩組中的表達情況

表2　PR在兩組中的表達情況

2.3MMP-9主要定位于細胞質實驗組與對照組中MMP-9的表達陽性率分別為33%和11%（t=1.032，P＜0.05），MMP-97的陽性表達呈現弱陽性，且實驗組陽性表達情況高于對照組（P＜0.05）。見圖9～12和表3。

表3　MMP-9在兩組中的表達情況

3　討 論

子宮內膜息肉為婦科常見子宮內膜病變，發病率較高，有研究顯示絕經后的患者子宮內膜息肉有發展為子宮內膜癌的風險，該情況的發生概率較絕經前的患者略高。病因及發病機制目前不明，有報道指出主要是ER、PR在子宮內膜的病變中發揮主要作用，另有其他相關蛋白質的表達也起到了促進的作用。

子宮內膜息肉惡變的現象在臨床上已經引起了廣大婦產科臨床醫師的高度關注。國內外已經有研究表明月經狀態和子宮內膜息肉惡變有相關性，尤其在絕經期后，子宮內膜息肉發生惡變的風險有明顯增高趨勢，特別是在＞65歲的人群中。因此對于絕經期的子宮內膜息肉，明確息肉性質，將指導臨床選擇治療的方式及判斷預后情況。本研究意在通過觀察絕經后子宮內膜息肉中ER、PR、Ki-67的表達情況，欲探討子宮內膜息肉的相關發病機制，并尋找預測絕經后子宮內膜息肉惡變可能的相關蛋白，利用對蛋白表達情況的檢測，為臨床工作提供治療方式的選擇，以及由此判斷患者的預后情況。

ER和PR在子宮內膜中的表達最多，對子宮內膜的影響即表現為子宮內膜的增生和血管增殖，形成息肉[7]。雌激素還可以在DNA復制轉錄水平上誘導ER和PR生成，長期過度的作用即可使子宮內膜發生增生，息肉樣改變，部分患者甚至癌變[8]。PR與孕激素結合后發生作用的途徑與和雌激素基本相同，但也能在轉錄和轉錄后水平上對ER和PR產生下調，主要是由于使增生期內膜轉為分泌期，使間質細胞蛻膜改變，促使細胞發生了調亡[9]。一般認為，長期的雌激素刺激可能是子宮內膜增生的主要發病因素。子宮內膜在長期的持續過多的雌激素刺激作用下，逐漸發生了內膜增生過長，當子宮內膜增生過長時，由于長期不排卵而缺乏足夠的孕激素發揮與之抗衡的作用，就會導致子宮內膜發生一系列不同程度的增生性改變，促使息肉的形成。有研究發現從正常內膜、不典型增生內膜、內膜癌組織中的ER、PR分布不同[10]。本實驗中所得結果顯示實驗組比對照組的ER、PR陽性率表達高，ER、PR蛋白在實驗組強陽性表達情況高于對照組。提示ER、PR含量升高與絕經后子宮內膜息肉的發生密切相關。雌激素與ER結合后，可促使子宮內膜增生，子宮內膜各部分ER含量不同，局部內膜受體含量較高時，局部內膜增生過盛，便形成息肉。Taylor等[11]研究發現，息肉ER表達水平較相應的內膜明顯升高，推斷ER持續高水平表達使細胞增殖，從而形成息肉。Maia等[12]研究發現息肉ER無論在腺上皮細胞還是基質中均強陽性表達。Lydia[13]的研究發現，孕激素抑制ER生成的作用減弱，導致ER持續高水平表達，最終內膜細胞增殖形成息肉，PR可能在此過程中也參與了內膜息肉形成的病理過程。高婉麗等[14]研究認為PR的表達被認為是雌激素刺激功能型ER產生的。本實驗亦提示ER、PR在絕經后子宮內膜息肉中的高表達與眾多實驗結果相一致。

MMP-9屬于明膠酶B，為內源性蛋白水解酶中的一種，是腫瘤細胞侵襲和轉移的關鍵因素，也參與炎癥的發生及擴散等病理變化，與腫瘤血管生成、細胞增殖、凋亡抑制、細胞免疫抑制等都有十分密切的關系。Evrim等[15]的研究表明絕經前后內膜息肉上MMP-9的表達提示其在絕經前后內膜息肉的發生、發展中可能起到了一定的作用。曾嫣等[16]研究發現絕經后正常子宮內膜存在MMP-9的表達，絕經后內膜息肉與絕經后正常內膜比較，息肉組中MMP-9表達顯著高于內膜組，提示可能參與了內膜息肉的形成。大部分研究證實MMP-9在子宮內膜癌組織中呈現高度強陽性表達，并推測MMP的高表達可使細胞外基質（ECM）及基底膜（BM）降解增強，從而促進子宮內膜癌的進展[17]。因為惡性腫瘤對機體造成危害的主要原因在于具有向周圍組織浸潤性生長及遠處轉移的能力，ECM特別是其中的BM是腫瘤侵襲、轉移過程中必須克服的生理屏障，而MMP-9恰好是幾乎能降解ECM的所有成分的蛋白水解酶，是腫瘤細胞結合、溶解細胞外基質，進而經溶解缺損處向外轉移過程中的限速酶。此外MMP-9還能促進血管內皮細胞的出芽，導致新生血管生成，同時可通過與整合素的相互活化而加強細胞間的黏附作用，并且被MMP-9降解的ECM蛋白片段能夠調節上皮細胞的增殖、凋亡與遷移。這提示MMP-9參與調節了細胞遷移、腫瘤生長和血管生成，它的活性與腫瘤的侵襲和轉移有密切關系[18-19]。本實驗中實驗組與對照組中MMP-9的表達陽性率分別為33%和11%，MMP-9的陽性表達呈現弱陽性，且實驗組陽性表達情況高于對照組。提示雖然在子宮內膜息肉中MMP-9有所表達，但由于呈現弱陽性的表達，未出現上述其他強陽性表現下促使息肉惡性轉化的情況，因此MMP-9無法作為子宮內膜息肉向子宮內膜癌發展的預測指標。由于本實驗病例數量有限，實驗結果還有待于樣本量的增大進一步探索。

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1671-8194（2015）34-0033-03