攜帶SXT/R391家族整合接合元件多重耐藥菌株的高效篩選與分析

孫鳳嬌，賀　羽，陳蘭明*

（農業部水產品貯藏保鮮質量安全風險評估重點實驗室（上海），上海海洋大學食品科學與技術學院，上海 201 306）

攜帶SXT/R391家族整合接合元件多重耐藥菌株的高效篩選與分析

孫鳳嬌，賀羽，陳蘭明*

（農業部水產品貯藏保鮮質量安全風險評估重點實驗室（上海），上海海洋大學食品科學與技術學院，上海 201 306）

本研究建立了一種抗生素平板與分子檢測相結合的高效篩選水產品中攜帶SXT/R391家族整合接合元件（integrative and conjugative elements，ICEs）的多重耐藥菌株的方法。采用美國臨床與實驗室標準研究所標準Kirby-Bauer紙片擴散法、需氧菌液體微量稀釋法，以及接合實驗，對篩選、鑒定獲得的攜帶SXT/R391家族ICEs的變形桿菌（Proteus vulgaris）進行了抗菌素、重金屬抗性以及ICEs元件接合轉移活性的分析。結果表明：運用本研究建立的篩選法可有效獲得含有多重耐藥基因的ICEs元件，其檢出率為3%，遠高于常規聚合酶鏈式反應技術的檢測水平（＜1‰）。受試菌株對六大類10 種抗菌素均表現出抗性，并且對重金屬鎘、銅、鋅和汞具有高度耐受性。接合實驗證明了受試菌株所攜帶的ICEs元件在普通變形桿菌與大腸桿菌（Escherichia coli）MG1655之間的自我轉移活性。

整合接合元件；SXT/R391家族；多重耐藥；重金屬抗性

自2002年以來，我國已成為世界第一大水產品生產國和出口國［1-2］。可是，隨著水產養殖業的高密度、集約化、規模化的快速發展，細菌性病害的發生更為頻繁，給中國水產養殖業帶來了嚴重的經濟損失［3］。目前，化學藥物防治仍然是我國水產養殖病害控制的主要措施之一，然而抗生素的過量使用現象較為普遍，導致抗性致病菌甚至“超級細菌”的形成；同時，藥物殘留造成的環境污染也加速了多藥抗性（multip le drug resistance，MDR）基因的傳播和擴散［2-6］。

原核生物的可移動遺傳元件（mobile geneticelement，MGEs）通過接合、轉化、轉導等方式介導遺傳物質在不同種屬細菌間的橫向（水平）基因轉移（lateral/horizontal gene transfer，LGT/HGT）［4-5］。研究發現，攜帶抗性基因簇的SXT/R391家族的可移動遺傳性整合接合元件（integrative and conjugative elements，ICEs）與抗藥性的散播高度相關。ICEs元件最初發現于1992年導致印度和孟加拉霍亂爆發的致病性霍亂弧菌（Vibrio cholera）MO10臨床分離株中，該菌株攜帶的99.5 kb SXT元件含有編碼磺胺甲基異噁唑（sulfamethoxazole，Su）、甲氧芐氨嘧啶（trimethoprim，Tm）、鏈霉素（streptomycin，Sm）和氯霉素（chloramphenicol，Cm）的抗性基因［6-7］。此后，國內外研究發現，SXT/R391家族ICEs元件不僅存在于弧菌屬（Vibrio）細菌中，而且還在超過25 個種屬的細菌中被檢測和鑒定，例如變形菌屬（Proteus）、克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、腸桿菌屬（Enterobacter）等［8-12］，它們廣泛存在于水產品、養殖水體等環境水體中［13-14］。作為MDR基因的載體，環境中ICEs元件及其散播的分子機制已成為國內外研究的熱點［15-16］。生物信息學的方法也已廣泛應用于細菌ICEs的研究，ICEs數據庫ICEberg（http：//db-mml.sjtu.edu.cn/ ICEberg/）通過生物信息學預測和文獻挖掘，已系統地識別了上百個細菌中400多個ICEs，包括89 個SXT/R391家族的ICEs。但是目前所發現的ICEs僅如冰山一角，未來必將在越來越多隸屬于不同種屬的原核生物中發現SXT/R391家族ICEs的存在［17］。

本研究課題組在國內率先開展了水產品、養殖水體、環境淡水和海水中攜帶ICEs元件弧菌的大量研究工作。本實驗研究一種抗性平板與分子檢測相結合的高效篩選攜帶MDR基因SXT/R391家族ICEs元件的方法；并對本研究所獲目的菌株進行了藥物敏感性、重金屬耐受性以及ICEs元件自主傳遞活性的測定，為MDR超級細菌形成的分子機制以及水產食品安全的風險評估研究奠定基礎。

1　材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

水產品樣品采集于上海恒大水產市場和上海蘆潮港水產市場。

MiniBEST細菌基因組DNA提取試劑盒、Premix Ex Taq DNA聚合酶 大連寶生物工程有限公司；慶大霉素瓊脂培養基、堿性蛋白胨水（alkaline peptone water，APW）、胰蛋白胨大豆肉湯（tryptic soy broth，TSB）、Luria-Bertani培養基（LB）、硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養基（thiosulfate citrate bile salts sucrose，TCBS） 北京陸橋技術有限責任公司；Mueller-Hinton Broth（MHB）培養基以及抗生素試紙片，包括氨芐西林（ampicillin，AMP，10 μg）、鏈霉素（streptomycin，STR，10 μg）、氯霉素（chloramphenicol，CHL，30 μg）、卡那霉素（kanamycin，KAN，30 μg）、復方新諾明（trimethoprim-sulfamethoxazole，SXT，25 μg）、四環素（tetracycline，TET，30 μg）、甲氧芐氨嘧啶（trimethoprim，TMP，5 μg）、利福平（rifampin，RIF，5 μg）、慶大霉素（gentamicin，GEN，10 μg）、壯觀霉素（spectinomycin，SPE，100 μg） 英國Oxoid公司；重金屬BaCl2、PbCl2、ZnCl2、CrCl3、CdCl2、NiCl2、CuCl2、HgCl2上海國藥集團化學試劑有限公司。

Eppendorf 6325 PCR儀、Eppendorf 5424高速冷凍離心機 德國Eppendorf公司；電泳儀、Bio-Rad CHEF Mapper XA System凝膠成像系統 美國Bio-Rad公司；拍擊式均質器 法國Interscience公司；多功能酶標儀美國BioTek公司；MilliQ純化柱純水儀 法國Millipore公司。

1.2樣品制備

參考Loi-Braden等［18］的方法富集樣品中的細菌，根據美國食品藥品管理局的標準細菌學分析手冊（the Standard of the Bacteriological Analytical Manual（BAM）of U.S. Food and Drug Administration，8th Edition Revision A，1998）分離樣品中的細菌。步驟如下：無菌操作將25 g水產品樣品置于無菌均質袋中，加入225 mL的APW（3 g/100 mL NaCl），用拍擊式均質器拍打3 min成為勻漿。將勻漿倒入250 mL無菌離心瓶中，380×g離心5 min。收集上清液于50 mL無菌離心管中，5 000×g離心7 min，棄上清后將沉淀重懸浮于5 mL APW中為菌體原液，并用APW梯度稀釋5～25 倍后，各吸取原液與稀釋液100 ?L涂布于慶大霉素平板和TCBS平板上，放置于37 ℃培養箱中過夜培養。

1.3SXT/R391家族ICEs元件保守核心基因的檢測

挑取上述平板上生長良好的單菌落，接種在含200 ?L APW（3 g/100 mL NaCl）的96 孔細菌培養板中，置于37 ℃培養16～18 h。吸取10 ?L菌液至200 ?L的超純水中，95 ℃熱裂解15 min。吸取1 ?L裂解液為模板，采用聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）技術，擴增SXT/R391家族ICEs元件的保守功能模塊相關核心基因，包括整合酶基因（int）、ICEs調控蛋白基因（setR）、接合轉移相關蛋白基因（traC、traI），以及SXT/R391家族ICEs元件攜帶的典型鏈霉素（strA、strB），甲氧芐氨嘧啶（dfrA1、dfr18），磺胺甲基異噁唑（sul2）抗性基因。PCR擴增反應條件參考Song Yuze等［15］的方法，PCR反應引物以及相應的擴增產物長度見表1。寡核苷酸引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。對檢測結果為陽性的菌株，通過16S rRNA基因的PCR擴增和DNA序列的測定進行鑒定。

表1　寡核苷酸引物及其序列Table1　The oligonucleotides used in this study

1.4抗菌素平板-PCR結合篩選法

收集上述慶大霉素平板或TCBS平板上生長的菌體，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS，pH 7.4）［22］重懸菌體，系列梯度稀釋后，涂布于LB選擇性平板（含256 ?g/mL磺胺甲基異噁唑，128 ?g/mL鏈霉素）或LB選擇性平板（含128 ?g/mL磺胺甲基異噁唑，64 ?g/mL鏈霉素）上，37 ℃過夜培養。挑取選擇性平板上生長良好的單菌落，按照上述菌液PCR法，檢測受試菌的ICEs元件保守核心基因（int、setR、traC、traI）與典型耐藥基因（strA、strB、sul2、dfrA1、dfr18）。對檢測為陽性的菌株，進行16S rRNA基因的PCR擴增和DNA序列的測定與鑒定。

1.5抗菌素藥物敏感性和重金屬抗性分析

采用美國臨床與實驗室標準研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI，2012版）標準紙片擴散法（Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests），對受試菌進行六大類10 種抗生素的藥物敏感性測試。質控菌大腸桿菌（Escherichia coli）ATCC25922與銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC2785購自上海工業微生物研究所。參考美國CLSI的需氧菌液體微量稀釋法，對受試菌株進行重金屬（BaCl2、PbCl2、 ZnCl2、CrCl3、CdCl2、NiCl2、CuCl2、HgCl2）耐受性測定。進行3 次獨立平行實驗。

1.6接合實驗

參考Song Yuze［15］、Waldor［23］等的方法，以E. coli MG1655（Cmr、Sms、Sus）為受體菌，本研究分離菌株為供體菌進行接合實驗。挑取LB抗性平板（含磺胺甲基異噁唑256 ?g/mL、鏈霉素128 ?g/mL、氯霉素30 ?g/mL）上生長的接合子單菌落，提取基因組DNA，檢測ICEs元件保守核心基因、耐藥基因以及16S rDNA。同時計算受試菌接合效率，即形成接合子數量/供體菌數量。分別進行3 次獨立平行實驗。

2　結果與分析

2.1抗菌素平板-PCR結合篩選法的建立

本研究采用慶大霉素平板與TCBS平板從蝦、貝類水產品中初篩獲得約1 000 株弧菌或變形菌屬分離菌株。采用PCR法檢測SXT/R391家族ICEs元件耐藥基因與保守功能模塊核心基因，結果顯示：鏈霉素、磺胺甲基異噁唑、甲氧芐氨嘧啶抗性基因（strA/strB、sul2、dfrA1/dfr18）的檢出率分別約為28%、40%和13%，攜帶2 種或以上抗性基因的菌株檢出率分別約為7%、1%；ICEs元件保守功能模塊核心基因int、setR、traC、traI檢出率分別約為48%、25%、20%和23%，攜帶ICEs元件保守功能模塊核心基因的菌株檢出率約為4%，與Bakhshi等［24］報道的5.4%的篩選率基本一致。但是，在受試菌中未篩選到ICEs元件可變區Ⅲ插入MDR基因簇的菌株。

Song Yuze［15］和唐毓祎［25］等的研究也表明僅采用傳統PCR技術獲得攜帶MDR基因的ICEs元件的環境分離菌株篩選率極低（＜1‰）。因此，本研究在初篩基礎上，增加了氯霉素、鏈霉素、磺胺甲基異噁唑抗性平板篩選步驟，對獲得的200 株陽性分離菌株進行了ICEs元件核心基因與典型耐藥基因簇的檢測，結果顯示：int、setR基因檢出率分別為43%和27%，但是，int和setR基因同時檢測為陽性的菌株，經進一步檢測為攜帶SXT/R391家族ICEs元件且含有MDR抗性基因菌株的篩選率高達3%，遠高于傳統PCR技術的篩選率（＜ 1‰）。

2.2“多重耐藥菌”抗菌素藥物敏感性及重金屬耐受性的分析

本研究對篩選獲得的陽性菌株中的5 株分別進行了16S rRNA基因的PCR擴增和序列測定。BLASTn比對分析結果顯示，它們與RDP數據庫［26］（http：//rdp.cme.msu. edu/）中普通變形桿菌（Proteus vulgaris）16S rRNA基因序列相似性為99%。抗生素藥物敏感性分析結果顯示：受試菌株對8 種抗生素均表現出抗性，包括氨芐西林、鏈霉素、氯霉素、卡那霉素、新諾明、甲氧芐氨嘧啶、利福平和壯觀霉素，對慶大霉素與四環素表現為中介。其中，鏈霉素、甲氧芐氨嘧啶、磺胺甲基異噁唑和氯霉素的抗性為SXT/R391家族ICEs元件攜帶菌株具有的典型MDR表型。此外，本研究對獲得的“多重耐藥菌”還進行了8 種環境常見重金屬的敏感性測定，結果如表2所示。受試菌株對重金屬鋅（≥3 200 μg/mL）、銅（≥3 200 μg/mL）、鎘（≥3 200 μg/mL）和汞（≥25 μg/mL）表現出高度抗性。

表2　攜帶SXT/R391家族ICEs元件變形桿菌分離菌株重金屬與抗菌素的耐受性Table2　Susceptibility off Proteus vulgaris isolates harboring SXT/R391 family of ICEs to heavy metals and antimicrobial agents

2.3變形桿菌分離菌株攜帶的ICEs元件的接合轉移活性

本研究以篩選獲得的攜帶SXT/R391家族ICEs的變形桿菌為供體菌，E. coli MG1655作為受體菌進行了接合實驗，在LB抗性平板上（含256 ?g/mL磺胺甲基異噁唑，128 ?g/mL鏈霉素，30 ?g/mL氯霉素）獲得了E. coli MG1655接合子。PCR檢測接合子的ICEs元件核心基因（int、setR、traC、traI）以及典型耐藥基因簇（strA、strB、sul2）均呈陽性反應；并且通過接合子的16S rDNA序列測定鑒定，證明了本研究發現的SXT/R391家族ICEs元件（命名為ICEPvuChn1～ICEPvuChn5）在變形桿菌與大腸桿菌之間自主的接合轉移活性，介導MDR基因在不同屬細菌間的傳播。它們的自主傳遞頻率如表3所示，其中ICEPvuChn3的自主接合轉移效率最高，為6.61×10-4。

表3　普通變形桿菌攜帶的SXT/R391家族ICEs元件自主傳遞頻率的比較Table3　Self-transmissible activity of SXT/R391 family of ICEs derived from from Proteus vulgaris aris isolates ates

3　討 論

ICEs元件兼具轉座子、質粒和噬菌體的特性，既可以在染色體上跳躍，從宿主染色體上切離、整合并隨染色體一起復制，也可以接合形式在細胞與細胞間進行DNA轉移［16］。ICEs攜帶大量基因信息，例如，耐藥基因、抗重金屬基因、烴類化合物降解基因等，使得宿主對環境脅迫獲得適應性［8-9］。SXT/R391家族作為ICEs中較具代表性的一類，闡明其耐藥基因散播的分子機制將對致病菌防控研究起到重要的實踐指導意義［20］。

變形桿菌在自然界中分布廣泛，腐物寄生，屬于條件致病菌。普通變形桿菌可引發人類腸 道或尿道感染等疾病及水產養殖魚類疾病［27］。近年來，涉及變形桿菌屬ICEs元件攜帶菌株的相關研究大多集中于臨床分離菌株［28］。本研究自水產品中分離、鑒定出攜帶SXT/R391家族ICEs元件的變形桿菌，表現出多重耐藥性和重金屬抗性特性，并且在不同種屬細菌間具有自主轉移活性。細菌的重金屬耐受性及協同選擇機制下的抗生素抗性問題已對生態環境和人類健康構成潛在威脅［29-30］。多重抗性菌株的加快形成和抗性基因的連鎖傳播為致病菌感染性疾病的醫治帶來了極大的挑戰［4］。本研究建立的高效篩選攜帶ICEs元件多重耐藥菌的方法，為進一步探討環境中重金屬和抗生素逆境應答的共選擇機制以及多重抗性超級細菌形成的分子機制奠定了基礎。

［1］ 張家國， 劉翠玲. 乳酸菌代替抗生素在水產養殖上的應用［J］. 中國水產， 2014（7）： 66-68.

［2］ 孫胤. 我國出口貿易的現狀及發展對策［J］. 統計與管理， 2014（1）：34-36.

［3］ 王德武， 張健. 淺談水產品質量安全及對策［J］. 中國科技博覽，2013（6）： 268.

［4］ BURRUS V， PAVLOVIC G， DECARIS B， et al. Conjugative transposons： the tip of the iceberg［J］. Molecular Microbiology， 2002，46（3）： 601-610.

［5］ WOZNIAK R A， WALDOR M K. Integrative and conjugat ive elements： mosaic mobile genetic elements enabling dynamic lateral gene fl ow［J］. Nature Reviews Microbiology， 2010， 8（8）： 552-563.

［6］ HOCHHUT B， LOTFI Y， MAZEL D， et al. Molecular analysis of antibiotic resistance gene clusters in Vibrio cholerae O139 and O1 SXT constins［J］. Antimicrobial Agents and Chemotherapy， 2001，45（11）： 2991-3000.

［7］ WALDOR M K， TSCHAPE H， MEKALANOS J J. A new type of conjugative transposon encodes resistance to sulfamethoxazole，trimethoprim， and streptomycin in Vibrio cholera e O139［J］. Journal of Bacteriology， 1996， 178（14）： 4157-4165.

［8］ HOCHHUT B， BEABER J W， WOODGATE R， et al. Formation of chromosomal tandem arrays of the SXT element and R391，two conjuga tive chromosomally integrating elements that share an attachment site［J］. Journal of Bacteriology， 2001， 183（4）： 1124-1132.

［9］ HOCHHUT B， WALDOR M K. Site-specific integration of the conjugal Vibrio cholerae S XT element into prfC［J］. Molecular Microbiology， 1999， 32（1）： 99-110.

［10］ AHMED A M， SHINODA S， SHIMAMOTO T. A variant type of Vibrio cholerae SXT element in a multidrug-resistant strain of Vibrio fl uvialis［J］. Federation of Eur opean Microbiological Societies Microbiology Letters， 2005， 242（2）： 241-247.

［11］ TAVIANI E， CECCARELLI D， LAZARO N， et al. Environmental Vibrio spp.， isolated in Mozambique， contain a polymorphic group of integrative conjugative elements and class 1 integrons［J］. Federation of European Microbiological Societies Microbiology Letters， 2008，64（1）： 45-54.

［12］ MATA C， NAVARRO F， MIRO E， et al. Prevalence of SXT/R391-like integrative and conjugative elements carrying blaCMY-2 in Proteus mirabilis［J］. Journal of Antimicrobial Chemotherapy， 2011， 66（10）：2266-2270.

［13］ DACCORD A， CECCARELLI D， BURRUS V. Integrating conjugative elements o f the SXT/R391 family trigger the excision and drive the mobilization of a new class of Vibrio genomic islands［J］. Molecular Microbiology， 2010， 78（3）： 576-588.

［14］ BURRUS V， MARRERO J， WALDOR M K. The current ICE age： biology and evolution of SXT-related integrating conjugativ e elements［J］. Plasmid， 2006， 55（3）： 173-183.

［15］ SONG Yuze， YU Pan， LI Bailin， et al. The mosaic accessory gene structures of the SXT/R391-like integrative and conjugative elements derived from Vibrio spp. iso lated from aquatic products and environment in the Yangtze Riv er Estuary， China［J］. BioMed Central Microbiology， 2013， 13（1）： 214-226.

［16］ FALBO V， CARATTOLI A， TOSINI F， et al. Antibiotic resistance conferred by a conjugative plasmid and a class I integron in Vibrio cholerae O1 El Tor strains isolated in Albania and Italy［J］. Antimicrob Agents Chemother， 1999， 43（3）： 693-696.

［17］ BI D， XU Z， H ARRISON E M， et al. ICEberg： a web-based r esource for integrative and conjugative elements found in bacteria［J］. Nucleic Acids Research， 2012， 40： D621-D626.

［18］ LOI-BRADEN M H， HUANG T S， KIM J H， et al. Use of electrolyzed oxidizing water for quality improvement of frozen shrimp［J］. Journal of Fo od Science， 2005， 70（6）： M310-M315.

［19］ DALSGAARD A， FORSLUND A， TAM N V， et al. Cholera in Vietnam： changes in genotypes and emergence of class I integrons containing aminoglycoside resistance gene cassettes in Vibrio cholerae O1 strains isolated from 1979 to 1996［J］. Journal of Clinical Microbiology， 1999， 37（3）： 734-741.

［20］ IWANAGA M， TOMA C， MIYAZATO T， et al. Antibiotic resistance conferred by a class I integro n and SXT constin in Vibrio cholerae O1 strains isolated in Laos［J］. Antimicrob Agents Chemother， 2004， 48（7）：2364-2369.

［21］ WEISBURG W G， BARNS S M， PELLETIER D A， et al. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study［J］. Journal of Bacteriology， 1991， 173（2）： 697-703.

［22］ SAMBROOK J， RUSSELL D W. Molecular cloning： a laboratory manual［M］. 3th ed. New York： Cold Spring Harbor Laboratory Press， 2001.

［23］ WALDOR M K， TSCHAPE H， MEKALANOS J J. A new type of conjugative transposon encodes resistance to sulfamethoxazole，trimethoprim， and streptomycin in Vibrio cholerae O139［J］. Journal of Bacteriology， 1996， 178（14）： 4157-4165.

［24］ BAKHSHI B， BARZELIGHI H M， ADABI M， et al. A molecular survey on virulence associated genotypes of non-O1 non-O139 Vibrio cholerae in aquatic environment of Tehran， Iran［J］. Water Research，2009， 43（5）： 1441-1447.

［25］ 唐毓祎， 談建國， 繆海振， 等. 南美白對蝦養殖水體中霍亂弧菌的毒力、耐藥及重金屬抗性研究［J］. 上海海洋大學學報， 2014， 23（6）：867-873.

［26］ COLE J R， WANG Q， FI SH J A， et al. Ribosomal Database Project：data and tools for high throughput rRNA analysis［J］. Nucleic Acids Research， 2014， 42（D1）： D633-D642.

［27］ 金元寶， 王英， 劉莉萍， 等. 鱟素I對普通變形桿菌的作用研究［J］. 生物技術通報， 2014（5）： 190-196.

［28］ 陳曉莉， 徐元宏， 儲潔 ， 等. 臨床分離的變形桿菌中整合子分型研究［J］.中國微生態學雜志， 2007， 19（5）： 408-410.

［29］ 竇秋燕， 貢嬌娜， 張智輝， 等. 細菌金屬耐受性及協同選擇抗生素抗性的研究進展［J］. 云南大學學報： 自然科學版， 2009（增刊1）：523-526.

［30］ NISHINO K， NIKAIDO E， YAMAGUCHI A. Regulation of multidrug effl ux syst ems involved in multidrug and metal resistance of Salmonella enterica serovar Typhimurium［J］. Journal of Bacteriology，2007， 189（24）： 9066-9075.

Effective Screening for Multiple-Drug Resistant Bacteria Harboring SXT/R391 Family of Integrative and Conjugative Elements

SUN Fengjiao， HE Yu， CHEN Lanming*
（Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Aquatic Products on Storage and Preservation （Shanghai）， Ministry of Agriculture， College of Food Science and Technology， Shanghai Ocean University， Shanghai 201306， China）

In this study， we established a highly effective method to screen multiple-drug resistant （MDR） bacteria carrying the integrative and conjugative elements （ICEs）. Five Proteus vulgaris strains harboring SXT/R391 family of ICEs， isolated from aquatic products in Shanghai， China， were obtained using the new method. Antimicrobial activity and heavy metal susceptibility of the P. vulgaris strains w ere examined using standard Kirby-Bauer disk diffusion method and dilution susceptibility t ests according to the Clinical and Laboratory Standards Institute （CLSI， USA， 2012 Edition）， all showing distinct resistance to ten antimicrobial agents belonging to six drug classes tested. In addition， a wide heavy metal resistance profile was also detected， displaying strong resistance to Cd， Cu， Zn and Hg. The conjugation experiments demonstrated the capacities of active self-transmission of the SXT/R391-like ICEs between P. vulgaris and Escherichia coli MG1655 strains. Our results will facilitate further research on collaborative selection mechanism of environmental antibiotics and heavy metals， and early warning in prevalence of novel MDR bacteria or “super bacteria”.

integrative and conjugative elements （ICEs）； SXT/R391 family； multiple-drug resistance； heavy metal tolerance

TS201.3

A

1002-6630（2015）13-0079-05

10.7506/spkx1002-6630-201513016

2015-02-11

國家自然科學基金面上項目（31271830）

孫鳳嬌（1988—），女，碩士研究生，研究方向為食品質量與安全。E-mail：fengjiaosun@foxmail.com

陳蘭明（1965—），女，教授，博士，研究方向為食品安全與質量控制、海洋微生物資源的開發與利用。E-mail：lmchen@shou.edu.cn