HPLC法測定紫草中紫草素的含量

楊　沁　陳夢婷　劉　虹　魏艷麗　張向娣（嘉興學院醫學院，浙江嘉興　314033）

HPLC法測定紫草中紫草素的含量

楊沁*陳夢婷劉虹魏艷麗張向娣
（嘉興學院醫學院，浙江嘉興314033）

建立高效液相法對新疆紫草中左旋紫草素的含量測定方法。色譜條件為Dikma diamonsil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相為0.05%三氟乙酸水溶液-乙腈梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長為516 nm，柱溫30℃。左旋紫草素進樣量在0.32 mg/mL～0.00768 mg/mL（R= 0.9999）的范圍內，呈良好線性關系，平均回收率為97.78%，RSD=1.08%。檢測方法簡便、準確。

高效液相色譜法紫草素含量測定

紫草為紫草科紫草屬的多年生草本植物，主要分布于我國新疆、內蒙、四川和云南等地。紫草在我國具有悠久的藥用歷史，其主要有效成分是以左旋紫草素為代表的萘醌類化合物，左旋紫草素的含量也是目前中國藥典中紫草含量測定的指標。本文選擇紫草素作為指標成分，建立了紫草中左旋紫草素的HPLC測定方法。

一、儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀，四元泵（美國Agilent公司）；電子分析天平（北京賽多利斯公司），超聲波清洗器（寧波金達超聲波儀器廠）；MILLI-Q超純水儀（MILLIPORE公司）；新疆紫草購自成都荷花池中藥材專業市場，經鑒定為為紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma（Royle）Johnst.的干燥根；左旋紫草素對照品購自中國食品藥品檢定所（批號：110769-200405）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

二、方法與結果

2.1色譜條件 Dikma diamonsil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱溫30℃；流動相為0.05%三氟乙酸水溶液-乙腈；流速為1.0 mL/min；梯度洗脫，0～25 min，B相線性由40%改變至90%；25～30 min，B相線性維持在90%，檢測波長為516 nm［1］，進樣量為20 μL。

2.2方法學考察

2.2.1對照品溶液制備 精密稱取左旋紫草素對照品6.4 mg，置10 mL量瓶中，無水乙醇溶解，制成0.64 mg/mL的貯備液。精密移取5 mL貯備液，加無水乙醇稀釋至刻度，定容至10 mL量瓶中，得左旋紫草素濃度為0.32 mg/mL的對照品溶液。分別按照上述方法精密移取適量對照品溶液，用無水乙醇進行稀釋分別制得0.16 mg/mL、0.064 mg/mL、0.0384 mg/mL、0.01536 mg/mL和0.00768 mg/mL系列濃度的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液制備同一批次的新疆紫草干燥至恒重，適當粉碎后過篩，精密稱取4 g紫草粉末，置于錐形瓶中，加入48 mL無水乙醇超聲提取2次。合并兩次濾液，旋蒸發儀低溫濃縮至干。加無水乙醇溶解至刻度，定容于50 mL，搖勻。按照2.1色譜條件進行含量測定。

2.2.3線性關系考察對照品溶液經0.45 μm微孔濾膜過濾后，按上述色譜條件分別精密吸取20 μL進樣，峰面積數據利用Excel表格繪制標準曲線（圖3），得回歸方程為y=19896x-5.1787（R=0.9999），其中（y）為峰面積、橫坐標（x）為進樣量。結果表明，進樣量在0.32 mg/mL～0.00768 mg/mL的范圍內，峰面積與進樣量呈良好線性關系。

圖1　紫草對照品HPLC

圖2　紫草提取物HPLC（*：紫草素）

圖3　線性曲線

2.2.4穩定性試驗取同一供試品溶液分別在

0，2，4，6，8，12，24 h進行測定，記錄峰面積，結果顯示左旋紫草素RSD=0.43%（n=7），表明供試品溶液在24h內穩定，有關物質符合要求。

2.2.5精密度試驗分別精密吸取對照品溶液（0.064 mg/mL），每次20 μL，按照確定的色譜條件連續重復進樣6次，測定左旋紫草素的峰面積，并計算RSD=0.26%，由此可知儀器的精密度良好。

2.2.6加樣回收試驗精密稱取已知含量的同一批次紫草藥材6份，分別精密加入0.64 mg/mL左旋紫草對照品溶液1 mL，按2.2.2項制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行實驗，結果顯示左旋紫草素的平均回收率為97.78%，RSD=1.08%（見表1）。

表1　左旋紫草素加樣回收試驗結果（n=6）

三、討論

林雄等［2］和伍毅［3］分別采用甲醇-水-磷酸（78：22：0.3，v/v）和甲醇：磷酸（85：15）作為流動相測定了紫草油中左旋紫草素的含量。本實驗考察了不同比例的甲醇-磷酸-水系統和乙腈-三氟醋酸-水系統，最終以0.05%三氟乙酸水-乙腈系統洗脫效果最優，能較好的測定左旋紫草素的含量，測方法簡便、準確。

［1］周化更，劉曉華，富志軍.新疆紫草中紫草素的提取方法研究［J］.海峽藥學，2015，7：011.

［2］林雄，潘旭東，黃燕，等.HPLC測定紫草油中左旋紫草素的含量［J］.海峽藥學，2011，23（7）：83-85.

［3］伍毅.HPLC法測定紫草油中左旋紫草素的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2005，16（1）：66-68

楊沁（1995.05-），女，嘉興學院醫學院2013年本科生

嘉興學院重點SRT項目基金資助（851714070）