早期自然流產胚胎染色體數目異常行熒光原位雜交技術檢測的研究

丘文君

（廣州醫科大學附屬第三醫院，廣東 廣州 510150）

早期自然流產胚胎染色體數目異常行熒光原位雜交技術檢測的研究

丘文君

（廣州醫科大學附屬第三醫院，廣東 廣州 510150）

目的 針對早期自然流產患者，研究分析熒光原位雜交技術對其胚胎染色體數目異常檢測的效果分析。方法 在我院的早期自然流產患者中抽取60例為研究對象，用熒光原位雜交技術（FISH）對患者胚胎絨毛的5條染色體：13、18、21和X、Y染色體進行快速檢測。結果 采用FISH檢測，所有結果與常規染色體核型分析一致，檢測率為100%，患者中出現染色體異常25例，占患者總數的41.7%。結論 FISH檢測技術用于早期自然流產胚胎染色體數目異常的檢測具有方法簡單、過程迅速等優點，有助于提高診斷的成功率。

早期自然流產；熒光原位雜交技術；染色體異常

早期自然流產指的是發生在妊娠12周之前的非人工流產。導致自然流產的原因很多包括父母染色體異常［1］，母體內分泌失調、生殖道異常或感染等，其中大約一半以上的早期流產是由胚胎染色體異常導致的。熒光原位雜交技術（FISH）是近些年在細胞遺傳學上發展的新型檢測技術，相比于傳統的檢測技術，快速、準確、靈敏度高成為FISH技術的最顯著優點［2］。FISH是一種探針檢測技術，檢測特異微生物種群的存在和豐度。由于FISH可以迅速準確診斷染色體數目異常問題，目前已經被廣泛應用在產前診斷。現抽取我院2012年12月至2013年12月的早期自然流產患者共60例，對其行FISH快速檢測，分析檢測效果。報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：從2012年12月至2013年12月在本院治療的早期自然流產患者中抽取60例為研究對象。孕婦患者年齡在19～41歲，平均年齡28.6歲。患者妊娠時間在51～98 d，平均妊娠時間為72.3 d。關于產婦流產次數，其中1次流產的29例，2次流產的20例，3次以上流產的11例。

1.2FISH檢測方法

1.2.1標本取材：選擇流產產婦的胎兒絨毛組織，首先用生理鹽水清洗干凈；然后用消毒剪刀去掉脫膜組織，以選取其中的絨毛或是肌肉組織；最后在無菌環境下將標本剪碎，并去除不能剪碎的部分。

1.2.2FISH探針選擇：本次研究所用的兩種FISH探針都來自英國Cytocell公司：第18，X，Y染色體探針，是特異性重復序列著絲粒探針，用藍、綠、紅三種顏色直接標記，區域定位為［3］：p11.1～q11.1；第13和21染色體探針為位點特異性單一序列探針，由紅色和綠色分別直接標記，區域定位為：13q14.3，21q22.2。

1.2.3雜交檢測：①將標本加入規定溫度的Kcl溶液處理；再加入固定液預固定，多次離心去上清處理后室溫下干燥保存；②將①中得到的玻片經過正規的消化、漂洗、脫水、自然干燥；然后將探針混合物10 μL滴加到玻片雜交區在規定環境中進行雜交。③雜交后，將玻片依次由46 ℃水浴鍋、70%乙醇漂洗，之后暗處干燥；在目標區域滴加15 μL的DAPI復染劑，暗處放置觀察。

1.3診斷標準：對于每例樣本計數200個細胞，信號異常率介定值為10%和60%：＜10%視為陰性，＞60%視為陽性，10%～60%視為結果異常。

1.4統計學方法：使用SPSS17.0統計學軟件，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

①染色體數目異常類型：60例樣本均檢測成功，其中25例結果異常。關于異常類型如表1所示。②流產次數對于染色體數目異常的影響：比較1次流產和多次流產中染色體的異常情況，具體見表2。

表1　染色體異常類型數目比率

表2　流產次數與染色體異常的關系

3　討 論

孕婦的早期流產，約50%以上由胚胎染色體異常導致。并且流產風險隨著流產次數和孕婦年齡的增加而增高。導致自然流產的原因還包括：母體內分泌失調、母體生殖道異常和感染以及其他如生活習慣等因素［4］。其中胚胎染色體異常又包括多種情況：三倍體、多倍體、X單體、染色體平衡易位、缺失等。正常人群染色體異常率為0.2%，而在復發性流產夫婦中發生率為4%，其中母源與父源之比為3∶1。據歷史資料［5］，胚胎染色體異常為首次自然流產的主要原因，而對于非首次或多次流產孕婦其發生率會更高。

熒光原位雜交技術的檢測原理——利用非放射性熒光物質和核酸探針雜交原理，在核中或是染色體上顯示DNA序列位置。其探針可以長時間保存，研究表明其具有快速、安全、靈敏度高等優點，現已被廣泛應用在細胞遺傳學、基因定位、產前診斷等研究領域。

本次研究通過FISH檢測早期流產患者染色體異常情況，由檢測值與常規染色體核型對比分析可知，檢測成功率為百分之百。在檢測出的25位染色體異常患者中，最多的為三體異常共16例，占總異常數的64%，其次為X單體，占28%。研究結果還表明，染色體異常隨著產婦流產次數比率增大（P＜0.05）。

綜上所述，FISH技術可以高效的檢測早期自然流產中染色體異常情況，能夠提高診斷的有效率。進而提高該病患者的生活幸福指數，值得臨床推廣。

［1］施瓊，王箭，袁泰先，等.染色體數目異常自然流產胚胎hsMAD2基因研究［C］.遺傳學進步與人口健康高峰論壇論文集，2011，20（11）:29.

［2］劉永林，張麗，陳益民，等.孕早期婦女外周血白細胞Toll樣受體表達的研究［C］.2009中國杭州生殖健康學術論壇暨浙江省計劃生育學與生殖醫學分會學術年會論文匯編，2010，33（6）:22-23.

［3］Weremowicz S，Sandrom DJ，Morton CC，et a1.Fluorescenceinsitu hybridization （FISH） for rapid detection of aneuploidy:experience in 911 prenatal cases［J］.Prenat Diagn，2011，21（4）:110-112.

［4］曾瓊連，姚美玉.復發性自然流產患者封閉抗體的檢測與臨床應用［C］.第十次全國中醫婦科學術大會論文集，2011，8（3）:791-793.

［5］石東紅，謝魯文，劉茜.2720例自然流產患者染色體分析［C］.第五次全國中青年檢驗醫學學術會議論文匯編，2013，21（5）:69.

R714.21

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1671-8194（2015）20-0157-02