衍生化GC法測定乙酰氧基丙酰氯中R型含量

2015-10-25 02:31:48蘭紅梅陳小君懷哲明

中國醫藥指南 2015年20期

蘭紅梅　王偉　陳小君　懷哲明

（浙江海洲制藥有限公司，浙江臺州 318000）

蘭紅梅王偉陳小君懷哲明

（浙江海洲制藥有限公司，浙江臺州 318000）

目的 R-乙酰氧基乙酰氯和S-乙酰氧基乙酰氯與L-α-苯甲基甲胺衍生化，形成非對映異構體產物，在GC中達到分離。方法衍生產物在DB-FFAP 30 m×0.53 mm×1.0 μm色譜柱中分離，測定R型對映體含量。結果在選定色譜條件下，回收率為95.8%～99.8%；精密度為3.9%；R型對映體的LOQ為0.017 ng，LOD為0.005 ng；在固定S型質量下，R型和S型峰面積比值與R型對映體的量呈良好線性關系，R=0.9995。結論該法是測定R-乙酰氧基乙酰氯中S-乙酰氧基乙酰氯的含量的一種靈敏、準確、可靠地分析方法。

衍生化GC法；R-乙酰氧基乙酰氯；含量

S-乙酰氧基丙酰氯（CAS No. 36394-75-9）是一種醫藥中間體，可由三光氣法合成［1］，用于合成對比劑碘帕醇等原料藥，分子式C5H7ClO3，無色透明發煙液體，有強烈的刺激性氣味，遇水分和醇極易分解。普通色譜法不能將R-型乙酰氧基丙酰氯和S-型乙酰氧基丙酰氯分離，而直接進樣法又會對色譜系統易造成嚴重腐蝕性，雖然氣相色譜法對酰鹵類物質分析已有報道［2-3］，也有利用手性酰化試劑對胺及氨基酸拆分［4］，但對于手性拆分后定量測定乙酰氧基丙酰氯國內尚無報道。本文以L-α-苯甲基甲胺在吡啶條件下與乙酰氧基丙酰氯進行衍生化，將衍生產物采用氣相色譜法分離測定，該法簡單、準確、重現，是S-乙酰氧基乙酰氯中R型對映體含量測定的一種可靠的分析方法。

1　試驗部分

1.1儀器和試藥：FOCUS氣相色譜儀（Thermo Fisher），FID檢測器，Triplus自動進樣器。無水吡啶、L-α-苯甲基甲胺、甲醇和二氯甲烷均為分析純，R-乙酰氧基乙酰氯和S-乙酰氧基乙酰氯對照品均為公司自制。

1.2色譜條件。色譜柱：DB-FFAP 30 m×0.53 mm×1.0 μm；載氣：高純氮氣；氣化室溫度：200 ℃；柱溫：200 ℃；檢測器溫度：250 ℃；流速：2.5 mL/min；分流比：1∶5；進樣量：0.5 μL。

1.3試驗方法

1.3.1樣品衍生化：精密量取20 μL樣品至5 mL量瓶中，冰浴條件下加1 mL無水吡啶，再精密加入100 μL的L-α-苯甲基甲胺，反應趨于平穩后搖勻，靜置2 h，再加入0.25 mL甲醇和1 mL二氯甲烷，搖勻。

1.3.2衍生化樣品測定：精密吸取0.5 μL衍生化后的試液，進樣，記錄色譜圖。計算R-型對映體含量。

1.3.3專屬性和靈敏度：同“1.3.1”項下分別配制R-乙酰氧基乙酰氯對照品衍生化溶液和S-乙酰氧基乙酰氯對照品衍生化溶液，平行配制空白溶液，進樣分析，結果在空白溶液色譜圖（圖1）中，R-乙酰氧基乙酰氯衍生物和S-乙酰氧基乙酰氯衍生物峰位處均無干擾峰；在樣品溶液色譜圖（圖2）中，R-乙酰氧基乙酰氯衍生物保留時間約31 min，S-乙酰氧基乙酰氯衍生物保留時間約33 min，二者前后均無干擾峰，分離度＞1.5，以R-乙酰氧基乙酰氯衍生物計，N≥8000。

將R-乙酰氧基乙酰氯對照品衍生后試液逐步稀釋，s/n=10相當于配樣時所含R-乙酰氧基乙酰氯的量為0.017 ng，s/n=3相當于配樣時所含R-乙酰氧基乙酰氯的量為0.005 ng。

1.3.4標準曲線和線性范圍：取20.0 mL S-乙酰氧基乙酰氯對照品，分別精密加入25、50、100、250、500 μL R-乙酰氧基乙酰氯對照品，搖勻，精密量取20 μL按 “1.3.1”項下配制溶液，進樣，測定。以每20 μL樣品種所含R-乙酰氧基乙酰氯的量（μg）對所測得的R-乙酰氧基乙酰氯與S-乙酰氧基乙酰氯峰面積比值進行線性回歸，得線性方程：Y=59237X-1.548，相關系數r=0.9998。