紅細胞血型血清學技術綜述

劉玥　馮震

【中圖分類號】R392.7 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0798-01

血 型是人類血液的主要特征之一，表達了血液各種成分的遺傳多態性。人類紅細胞血型抗原是研究最早的抗原，1901年奧地利維也納大學的Kar Landsteiner發現人類第一個血型——ABO血型后，迄今發現的血型系統已接近30個，包括ABO、MNS、P、RH、Lutheran、Kell等。

1 紅細胞血型鑒定

1.1 ABO血型鑒定

1.1.1原理

根據紅細胞上和血清（或血漿）中有或無A抗原或/和 B抗原及其抗體，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。可利用紅細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒定ABO血型。正定型是用已知抗-A或抗-B定型試劑來測定紅細胞上有無相應的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型紅細胞和B型紅細胞來測定血清中有無相應的抗-A或/和抗-B。應用篩選紅細胞檢測鑒定標本的血清中是否存在不規則抗體，如果存在，應用譜細胞進行抗體鑒定，以確定抗體的特異性。

1.1.2 結果判讀

細胞均勻無凝集者為陰性（-），細胞有凝集者或反應中紅細胞溶血者為陽性（+）。

1.2.1 原理

Rh血型系統是繼ABO血型系統之后又一重要的血型系統，與ABO血型系統不同的是，在沒有相應的抗原免疫的情況下，一般不會產生Rh抗體[1] 。紅細胞表面存在正常D抗原，則該細胞與抗D（IgM）試劑發生直接凝集，與抗D（IgG ）試劑發生間接凝集，該細胞Rh血型為陽性；若紅細胞表面D抗原位點數減少或抗原結構產生變異，則該細胞與抗D（IgM）試劑不發生直接凝集，與抗D（IgG ）試劑發生間接凝集，該細胞Rh血型為D弱反應型；紅細胞無論在間接凝集試驗還是在直接凝集試驗中發生凝集都應為RhD陽性。若不存在D抗原，則該細胞無論在間接凝集試驗還是在直接凝集試驗中均不發生凝集，該細胞Rh血型為陰性。

用抗C、抗c、抗E、抗e這4種Rh定型試劑通過血凝試驗來檢查紅細胞上是否存在相應抗原。

用篩選紅細胞檢測RhD陰性確證血清中是否存在不規則抗體，如果存在用譜細胞進行抗體鑒定，以確定抗體的特異性。

1.2.2 結果判讀

細胞均勻無凝集者為陰性（-），細胞有凝集者或反應中紅細胞溶血者為陽性（+）。

1.3 血型鑒定操作時注意事項

1.3.1 所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后再用，用畢后應盡快放回冰箱保存。

1.3.2加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便核實是否漏加血清。

1.3.3雖然IgM抗A和抗B與相應紅細胞的反應溫度以4℃最強，但為了防止冷凝集現象干擾，一般在室溫20℃～24℃內進行試驗，而37℃條件，可使反應減弱。

1.3.4幼兒紅細胞抗原未發育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。

1.3.5玻片法反應時間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現，造成假陰性。

1.3.6正、反定型結果一致才可發報告。

2 交叉配血實驗

2.1原理

交叉配血試驗主要是檢查受血者血清/紅細胞與供血者紅細胞/血清之間的相容性。受血者血清對供血者紅細胞即主側配血，是測定受血者血清中有無針對供血者紅細胞的抗體；受血者紅細胞對供血者血清即次側配血，是測定供血者血清中有無針對受血者紅細胞的抗體。應用篩選紅細胞檢測受血者血清中是否存在不規則抗體，如果存在，須用譜細胞進行抗體特異性鑒定。

2.1.1鹽水介質法

IgM類血型抗體可與對應的紅細胞在室溫鹽水介質中出現凝集反應，通過離心觀察主、次側有無凝集現象。主、次側均無凝集反應表示配血相合；任何一側凝集或兩側均凝集為配血不合。

2.1.2 酶介質法

蛋白酶（木瓜酶、菠蘿酶、無花果酶）能破壞紅細胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細胞間斥力，使得紅細胞靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細胞便出現凝集。蛋白酶可修飾紅細胞膜上的抗原，從而促進某些血型系統（尤其是Rh和Kidd）的抗原抗體反應；但會改變其他系統（尤其是M，N，Fya ，Fyb ）抗原的構型破壞其抗原性。酶還可能改變細胞懸液的物理性質，可導致紅細胞的非免疫性聚集。

2.1.3 抗人球蛋白介質法

抗人球蛋白試驗又稱coombs試驗。在鹽水介質中，不完全抗體只能致敏紅細胞，而不能使紅細胞出現凝集，加入抗球蛋白試劑后，抗人球蛋白分子的Fab片段與包被在紅細胞上的抗體Fc段結合，從而通過抗人球蛋白分子的搭橋造成紅細胞的凝集。coombs試驗包括“直接抗人球蛋白”和“間接抗人球蛋白”試驗，均可使用試管法和微柱凝膠法。直抗試驗檢測紅細胞上已包被的抗體或補體；間抗試驗檢測血清或血漿中游離的不完全抗體。

2.1.4 凝聚胺法

聚凝胺是一種由四個銨聚合而成的高陽離子聚合體。聚凝胺可使正常紅細胞聚集，而在加入檸檬酸鹽時又可使聚集的紅細胞散開。當紅細胞上有IgG抗體結合時，聚凝胺所造成的凝集是不可逆的。在此實驗中，紅細胞與血清在低離子介質中孵育，以促進抗體結合到紅細胞上。然后加聚凝胺，離心后通過加入檸檬酸鹽使聚凝胺形成的凝集散開。此時，由抗體介導的凝集在加入檸檬酸鹽后仍然維持，而無抗體致敏的紅細胞凝集則會散開。如果需使用加入檸檬酸鹽后散開的紅細胞做進一步的抗球蛋白試驗，則散開后的細胞需經過三次洗滌。

2.1.5 微柱凝膠免疫技術

微柱凝膠試驗（Microtubes Gel Test，MGT）是20世紀90年代先后進入國內實驗室并用于交叉配血的新方法。在一些先進國家已成為常規的紅細胞血型血清學檢測技術。

2.1.6 結果判讀

先觀察上清液的顏色，然后再輕搖試管觀察有無紅細胞凝集現象發生； 如試管內紅細胞呈均勻混濁無顆粒出現即無凝集，上清液呈正常血清狀顏色為交叉配血試驗相合。如上清液呈紅色即有溶血現象，紅細胞成塊即為凝集現象，為交叉配血試驗不相合。

3不規則抗體的篩選和鑒定

不規則抗體是指不符合ABO血型系統Landsteiner法則的血型抗體，即除抗A、抗B之外的血型抗體。若OC管呈陽性反應，則可能存在不規則抗體，應用譜細胞進行抗體鑒定。若可疑為亞型標本，增加抗A、抗B抗血清反應量，加抗AB、抗H、抗A1試劑做正定型。用A1、A2、B、O細胞做反定型。如果以上試驗不足以確認亞型類型，要加做唾液中血型物質的測定。

4 血型抗體效價測定

凝集強度 效價評分4+ 123+ 102+ 81+ 5W+ 20 0抗體效價測定時一種抗體半定量的分析方法[2] 。血清經連續倍比稀釋后與選定的紅細胞進行反應，通常以肉眼可見的明顯凝集的最高血清稀釋度數值的倒數來表示效價，這個半定量的方法能提供血清中抗體的量或紅細胞上抗原的量的情況。細胞均勻無凝集者為陰性（0），細胞有凝集者或反應中紅細胞溶血者為陽性（+）。

參考文獻

[1] 車玲玲，宿軍，李敏等.RhD（-）獻血者中檢出IgM抗-D1例.中國輸血雜志，2012，（12）：1331-1332.

[2]韓兆東，郭立霞，汪桂霞等.臨床檢驗學.中醫古籍出版社，2013：216.