Treg細胞在喉癌及喉癌前病變中的變化

劉天洋　王世飛

【摘要】 通過研究喉癌、癌旁組織、喉癌前病變及正常喉組織中Treg細胞/CD4+T細胞比例逐漸變化的關系，探討以下內容：1.明確Treg細胞的作用 ；2.獲得預測喉癌前病變是否惡變的指標。（隨訪2年）3.獲得有效的免疫切緣（immune margin ）指標，指導手術切緣判定。

【關鍵詞】喉癌、Treg細胞、CD4+T細胞、手術切緣

【中圖分類號】R739.65 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0785-01

腫瘤的發生是多因素、多步驟的復雜過程，其中抑癌基因失活是導致腫瘤發生的重要的基因層面因素。Treg細胞是腫瘤微環境中重要的免疫抑制細胞，腫瘤微環境中Treg細胞的浸潤性在基因異常的患者具有協同促發腫瘤的作用。實驗目的：本項目檢測喉癌、癌旁組織、喉癌前病變及正常喉組織Treg 細胞及CD4+細胞的比例，并且通過術后臨床隨訪2年，進行喉癌及喉癌前病變臨床Treg細胞的相關性分析，Treg細胞在喉癌前病變及喉癌的發生、發展、浸潤中的作用，獲得喉癌前病變惡變的危險指標，并探討Treg細胞免疫切緣預測手術切緣足夠與否的價值。Treg細胞在喉癌前病變及喉癌的發生、發展、浸潤中的作用，獲得喉癌前病變惡變的危險指標。

一、實驗方法：

1.選取喉癌患者20例，術前制定合理的手術方案，完整切除腫物（癌旁組織經病理檢查，排除腫瘤細胞浸潤），排除手術因素對實驗標本及及療效的影響；保證檢測相關指標情況的準確性及可比性。

2.喉癌組患者經行徹底的手術切除，術中分別距腫瘤0.2cm、0.5cm、1.0cm的組織做為喉癌旁組織組；并分為癌旁0.2cm、癌旁0.5cm、癌旁1.0cm 3個亞組。

根據各組設立的要求，術中選取相應的實驗標本：①喉癌組：選取喉癌組織標本作為標本；②喉癌旁組織組：切除喉癌后，選取喉癌旁組織（距離腫物0.2cm、0.5cm、1.0cm）作為標本；③喉癌前病變組：選取切除的喉癌前病變腫物作為標本；④喉正常組織組：選取切除的喉良性腫瘤周圍的正常粘膜作為標本。⑤所有標本取得以后，編號后分成三部分，分別按照流式分析、雙重酶標免疫組化實驗方法要求保存、制備。

1）實驗檢測指標

（1）雙重酶標免疫組化及流式分析檢測四種組織中Treg 細胞及CD4+細胞，計算Treg細胞/CD4+細胞比例。

（2）隨訪2年，確定喉癌患者術后有無復發，與術前癌組織及癌旁組織中Treg細胞/CD4+細胞比例進行相關性分析，與臨床結局進行相關性分析。

（3）隨訪2年，確定喉癌前病變患者術后有無惡變，與術前Treg細胞/CD4+細胞比例進行相關性分析，與臨床結局進行相關性分析。

二、擬解決的關鍵問題：

1.術前制定合理的手術方案，完整切除腫物（癌旁組織經病理檢查，排除腫瘤細胞浸潤），排除手術因素對實驗標本及及療效的影響；保證檢測相關指標情況的準確性及可比性。

2.建立四組組織（包括各組亞組）中Treg細胞/CD4+T細胞比例的梯度關系。

3.實驗所選取標本應無污染，低溫保存，標本盡快檢查，避免細菌等其他因素造成淋巴細胞激活，影響檢測結果的準確性。

三、本項目的特色與創新之處：

1.本課題檢測Treg細胞在喉癌及喉癌前病變中的表達，并且分梯度取喉癌旁0.2cm、0.5cm、1.0cm組織，檢測Treg細胞水平變化，來探討喉癌發生、浸潤以及在喉癌前病變惡化中的機制，國內外未見文獻報道。

2.本課題對喉癌及喉癌前病變患者進行術后隨訪，進行組織中Treg細胞表達情況與有無局部復發進行相關性分析，從分子切緣角度探討手術切緣的足夠與否，并且首次提出“免疫切緣”的概念，在國內外尚無報道。

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