針對(duì)乳糖酸阿奇霉素注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查方法

黃金龍

【摘要】目的：建立乳糖酸阿奇霉素注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法：按《中國藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，對(duì)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行了干擾試驗(yàn)和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。結(jié)果：高濃度乳糖酸阿奇霉素注射液溶液對(duì)TAL與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)有干擾作用，經(jīng)稀釋后可排除干擾。結(jié)論：本品可采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法進(jìn)行質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】乳糖酸阿奇霉素注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；干擾試驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2015）02-0677-02

阿奇霉素是一種15元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。據(jù)體外試驗(yàn)結(jié)果顯示，阿奇霉素對(duì)臨床中的諸多致病菌具有較強(qiáng)的抗菌作用，而常見的致病菌主要有革蘭陽性需癢菌、金黃色葡萄球菌、釀膿鏈球菌（A組β溶血性鏈球菌）、肺炎（鏈）球菌、（溶血性鏈球菌（草綠色鏈球菌）和其他鏈球菌、白喉（棒狀）桿菌。而針對(duì)耐紅霉素的革蘭陽性細(xì)菌，包括糞鏈球菌（腸球菌）以及耐甲氧西林的多種葡萄球菌菌株呈現(xiàn)交叉耐藥性。

一般而言，各種抗菌類藥物在發(fā)揮抗菌、殺菌作用時(shí)，也是要根據(jù)病菌的活性來選擇適宜的抗菌類藥物，只有這樣才能夠保證殺菌的效果。乳糖酸阿奇霉素對(duì)格蘭陰性菌的活性視菌株而定，并且在用藥之前需要做敏感性測定。而其主要針對(duì)的適應(yīng)癥為敏感致病菌株所引起的感染，主要包括：一是由肺炎衣原體、流感嗜血桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、卡他摩拉菌、肺炎支原體、金黃色葡萄球菌或肺炎鏈球菌引起的需要首先采取靜脈滴注治療的社區(qū)獲得性肺炎；二是由沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、人型支原體引起的需要首先采取靜脈滴注治療的盆腔炎。

一般來說，乳糖酸阿奇霉素注射液的物理形態(tài)為無色澄明液體。通常的用法用量為：在臨床應(yīng)用中，首先要將乳糖酸阿奇霉素注射液融入到250ml或500ml的0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液中。在乳糖酸阿奇霉素注射液融合的過程中，盡量保持阿奇霉素的濃度，將融合最終的阿奇霉素的濃度控制在1.0-2.0mg/ml之間，采取靜脈滴注的方式將藥物注射入患者的體內(nèi)，通常滴注的時(shí)間為濃度為2.0mg/ml，滴注1小時(shí)，然后以此向下類推。一般在進(jìn)行社區(qū)獲得性肺炎治療時(shí)，要注意成人的用量為每次0.5g，而每天使用1次，至少要連用兩天的藥，繼之換用口服阿奇霉素口服制劑0.5g/天，治療7～10天為一個(gè)療程。轉(zhuǎn)為口服治療時(shí)間應(yīng)由醫(yī)生根據(jù)臨床反應(yīng)確定。而在進(jìn)行盆腔炎治療時(shí)，要注意成人的用量為每次0.5g，也是每天一次，在用藥1到2天之后改用阿奇霉素口服制劑0.25g/日，以7天為一個(gè)療程。轉(zhuǎn)為口服治療時(shí)間應(yīng)由醫(yī)生根據(jù)臨床反應(yīng)確定。若懷疑合并有厭氧菌感染，則應(yīng)合用抗厭氧菌藥物。

乳糖酸阿奇霉素原料標(biāo)準(zhǔn)收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)西藥第四十五冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS1-（X-356）-2003Z，為保證臨床用藥安全，標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)乳糖酸阿奇霉素細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行控制，乳糖酸阿奇霉素注射液的標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH10722004，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為熱原檢查，該法繁瑣且實(shí)驗(yàn)條件要求較高。本文參照《中國藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究，對(duì)乳糖酸阿奇霉素注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行了可行性研究。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1樣品

乳糖酸阿奇霉素注射液（規(guī)格：5mL：0.25g，批號(hào)：083130702083130703083130704），石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2儀器與試藥

鱟試劑（TAL）：批號(hào)1305211，1309281，靈敏度0.25EU·mLˉ·，規(guī)格0.1mL/支，湛江安度斯生物有限公司產(chǎn)品。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水）：批號(hào)1209230，規(guī)格5mL/支，湛江安度斯生物有限公司產(chǎn)品。

2方法與結(jié)果

2.1供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

根據(jù)L=K/M，L為供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值，K為人用每公斤每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑為5EU/（kg·h），M為人用每公斤體重每小時(shí)的最大劑量。乳糖酸阿奇霉素注射液臨床每次最大用量0.5g，因此擬定本品內(nèi)毒素限值為：每1mg乳糖酸阿奇霉素注射液中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.6EU。

2.2鱟試劑靈敏度的復(fù)核

按照《中國藥典》2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的要求復(fù)核所用鱟試劑，結(jié)果均符合規(guī)定（見表1）。

2.3干擾預(yù)試驗(yàn)

將乳糖酸阿奇霉素注射液從原液起，加入BET水按照1∶1依次倍比稀釋至0.36mg·mLˉ·，依法制成2λ的供試品內(nèi)毒素溶液，將上述稀釋溶液用湛江安度斯生物有限公司的鱟試劑（靈敏度為0.25EU·mLˉ·）依法進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)。

2.4干擾試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，取不同濃度的乳糖酸阿奇霉素注射液將同一支標(biāo)準(zhǔn)品制成2λ，1λ，0.5λ和0.25λ的供試品內(nèi)毒素溶液，分別取兩個(gè)廠家的鱟試劑與上述內(nèi)毒素溶液依法進(jìn)行干擾試驗(yàn)

結(jié)果表明，選用兩個(gè)廠家3批鱟試劑，對(duì)3批乳糖酸阿奇霉素注射液進(jìn)行的干擾試驗(yàn)，高濃度時(shí)對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)有抑制作用，經(jīng)稀釋至6.25mg·mLˉ·時(shí)即可排除干擾作用，其Es及Et均在0.5λ～2λ之間。

2.5細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

根據(jù)干擾試驗(yàn)結(jié)果和擬定的細(xì)菌內(nèi)毒素限值0.6EU·mgˉ·，采用兩個(gè)廠家鱟試劑，根據(jù)公式c=λ·L-1，將乳糖酸阿奇霉素注射液稀釋至0.42mg·mLˉ·，對(duì)3批乳糖酸阿奇霉素注射液分別進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果均符合規(guī)定，與家兔法（熱原檢查）一致（見表2）。

3、討論與結(jié)論

3.1細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法能夠?qū)┰嚻分械募?xì)菌內(nèi)毒素是否達(dá)標(biāo)進(jìn)行有效的判斷，從而保障藥品的質(zhì)量。而一般來說，內(nèi)毒素是一種革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖，其毒性成分一般為類脂A。這種毒素通常是在菌體死亡后才會(huì)崩解釋放出來。對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查一般有兩種方法：一種是凝膠法，另外一種是光度測定法。其中光度測定法還包括濁度法和顯色基質(zhì)法。在對(duì)供試品進(jìn)行檢測試驗(yàn)時(shí)，可采用上述的兩種檢測方法進(jìn)行內(nèi)毒素的檢查。如果檢測的結(jié)果出現(xiàn)爭議，在沒有特殊規(guī)定的要求下，可以在進(jìn)行凝膠法檢驗(yàn)，從而以凝膠法的結(jié)果為基準(zhǔn)。

3.2細(xì)菌內(nèi)毒素主要來源于熱原，而熱原本身就是一種內(nèi)毒素。當(dāng)熱原進(jìn)入到機(jī)體血液循環(huán)系統(tǒng)中時(shí)，就會(huì)引起發(fā)熱等一系列的不良反應(yīng)，因此，對(duì)注射劑中的熱原或者是細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行檢查是保證注射劑安全性的重要質(zhì)量指標(biāo)。一般來說，乳糖酸阿奇霉素注射液中也具有熱原或者是細(xì)菌內(nèi)毒素，如果在臨床中大量的進(jìn)行乳糖酸阿奇霉素注射液的注射，在沒有對(duì)注射液中的內(nèi)毒素進(jìn)行檢查時(shí)，很容易使得藥液中的熱原對(duì)人體產(chǎn)生危害，通常過量的熱原會(huì)使得病人在半小時(shí)到一小時(shí)之間出現(xiàn)冷顫、高溫、出汗、昏暈或者是嘔吐等癥狀，熱原所引發(fā)的高溫，最高可使得人體的體溫達(dá)到40℃，嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)休克的現(xiàn)象，因此，要注意對(duì)乳糖酸阿奇霉素注射液中存在的熱原或者是內(nèi)毒素進(jìn)行檢查，保障熱原和內(nèi)毒素符合用藥標(biāo)準(zhǔn)，從而有效保障注射液的質(zhì)量，進(jìn)而保障病人的安全。

3.3試驗(yàn)使用兩個(gè)不同廠家的鱟試劑，對(duì)3批樣品分別進(jìn)行了干擾試驗(yàn)。結(jié)果表明，高濃度乳糖酸阿奇霉素注射液對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)有干擾作用，在濃度稀釋至6.25mg·mLˉ·時(shí)即可排除干擾作用。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有靈敏性好、操作簡便、準(zhǔn)確快速等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)果與家兔法（熱原檢查）一致，所以乳糖酸阿奇霉素注射液可直接用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法替代家兔法檢查。

參考文獻(xiàn)

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