高效液相色譜法檢測生物樣品中喹諾酮類藥物的研究進(jìn)展

龐月 劉艷杰

【摘要】喹諾酮類藥物是當(dāng)前臨床醫(yī)學(xué)上應(yīng)用較多的抗菌藥物，與其他抗菌藥相比，喹諾酮類的藥用機(jī)理主要是通過阻止細(xì)菌DNA合成并使其死亡而達(dá)到消炎抗菌效果，所以不會產(chǎn)生質(zhì)粒傳導(dǎo)，因而其耐藥性較強(qiáng)，所以喹諾酮類藥物的應(yīng)用非常廣泛。加大對喹諾酮類藥物檢測方法的研究可以對生產(chǎn)和臨床應(yīng)用該類藥物提供有利幫助，而高效液相色譜檢測法就是這樣一種檢測方法，已經(jīng)在多種喹諾酮類藥物檢測中發(fā)揮重要作用?，F(xiàn)本文就對高效液相色譜檢測法對生物樣品在幾種常見喹諾酮類藥物檢測中的應(yīng)用研究進(jìn)展進(jìn)行分析探討，以供參考。

【關(guān)鍵詞】喹諾酮類；高效液相色譜法；檢測；研究進(jìn)展

【中圖分類號】R969【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1005-0019（2015）01-0284-01

通俗來講，喹諾酮類藥物就是指沙星類抗生素，如諾氟沙星、左氧氟沙星、加替沙星等等。喹諾酮類藥物的抗菌譜非常廣，抗菌活性很強(qiáng)，且毒副作用相對較小，不但可以用于人體消炎，還可以用養(yǎng)殖業(yè)中。自從第一代喹諾酮類藥物研發(fā)以來，就得到了非常廣泛的應(yīng)用。目前第四代喹諾酮類藥物已經(jīng)被研發(fā)并應(yīng)用在臨床醫(yī)學(xué)中。而無論是在研發(fā)生產(chǎn)或是臨床應(yīng)用中都需要對喹諾酮類藥物中的含量進(jìn)行檢測，以確定最佳劑量和藥物使用量。以下本文就重點(diǎn)對喹諾酮類藥物的檢測方法之一，高效液相色譜法的應(yīng)用進(jìn)行研究探討。

一、研究概述

喹諾酮類藥物作為一種療效顯著、耐藥性強(qiáng)、副作用小、具有較長的抗菌后效應(yīng)的廣譜抗菌藥，是臨床醫(yī)學(xué)上使用較為頻繁的藥物，尤其是在治療革蘭陰性菌引起的感染方面，更是有著非常好的抑菌殺菌效果。并且喹諾酮類藥物無論是口服或是注射針劑都能夠很快被生物體吸收，不易與生物蛋白質(zhì)結(jié)合，因此不會對生物體產(chǎn)生太大的毒副作用。一般來講，喹諾酮類藥物很少在生物體內(nèi)進(jìn)行代謝，多是以原型排出體外。

從性質(zhì)上來講，喹諾酮類藥物一般很難在水中溶解，也不易在乙醇中溶解，但可以在弱酸弱堿中溶解，如冰醋酸、稀堿溶液等。喹諾酮類藥物在溶解后對光并不穩(wěn)定，但是其在紫外光區(qū)卻可以形成較為穩(wěn)定的熒光，因此在很長一段時(shí)間中喹諾酮類藥物的含量檢測都是利用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測。而隨著高效液相色譜法在有機(jī)化合物檢測中的應(yīng)用越來越廣，也開始有人將其應(yīng)用在喹諾酮類藥物的檢測中。

高效液相色譜法是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展而成的一種新的分析方法，其有著很強(qiáng)的分離能力，可以將有機(jī)化合物中的成分分離出來進(jìn)行測定，測定結(jié)果較為精準(zhǔn)，因此其逐漸成為一種常用的檢測方法。在喹諾酮類藥物的檢測中，高效液相色譜法多采用反相高效液相色潽法，也可采用離子對色譜法；使用C18柱，以甲醇（或乙腈）-緩沖液（pH2.0～3.5）系統(tǒng)為流動相。并且在長期的研究中，發(fā)現(xiàn)在對喹諾酮類藥物進(jìn)行高效液相色譜檢測時(shí)，其發(fā)光效果是與緩沖液的pH值有很大關(guān)聯(lián)，即pH值與等電點(diǎn)越相近，效果就會越明顯。所以一般在進(jìn)行熒光檢測時(shí)，會在流動相中添加一定的弱酸性緩沖液，這樣可以使色譜峰值增高，分離測定效果更好。另外，為了解決喹諾酮類藥物檢測過程中存在的拖尾現(xiàn)象等問題，還可以在高效液相色譜法檢測中加入一定的掃尾劑三乙胺，并使用離子抑制色譜進(jìn)行檢測。

二、幾種常見的喹諾酮類藥物檢測研究進(jìn)展

1、左氧氟沙星

左氧氟沙星在治療尿路感染或呼吸道感染方面有著顯著療效，其比氧氟沙星的性能更優(yōu)，應(yīng)用更廣泛。在對左氧氟沙星進(jìn)行高效液相色譜法檢測時(shí)，一般多采用紫外檢測或熒光檢測，波長采用275nm，可以使用C8柱作為色譜柱，使用乙腈-甲醇-0.4mol/L檸檬酸（7：15：78）當(dāng)做流動相，并用甲醇對血漿進(jìn)行萃取，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行檢測。也有利用反相色譜紫外檢測，其所使用的色譜柱為C18柱，流動相為水（含0.1%甲酸，0.4%三乙胺）-乙腈（14：86），波長290nm，柱溫35℃，乙腈離心萃取，外標(biāo)法測定。還有文獻(xiàn)報(bào)道采用C18柱，波長設(shè)計(jì)為297nm，流動相雖然也使用乙腈，但使用了pH為5.6的磷酸鹽緩沖液，使用50%三氟醋酸來沉淀血漿蛋白，在萃取靜置一段時(shí)間后，蛋白充分沉淀后再進(jìn)樣，并以帕珠沙星為內(nèi)標(biāo)物。這種檢測方法不但簡便快捷，而且非常靈敏，檢測出的準(zhǔn)確率較高。左氧氟沙星色譜圖如入1所示。

圖1左氧氟沙星色譜圖

2、巴洛沙星

巴洛沙星也是一種非常重要的喹諾酮類藥物，屬于第四代沙星類抗生素，其對革蘭陽性菌及革蘭陰性菌具有廣譜的抗菌活性。其母核的7位含有3-甲基氨基哌啶環(huán)，因此擁有更為廣泛的抗菌譜和更強(qiáng)的抗菌活性。其8位上還可以結(jié)合一定的甲氧基，使其幾乎無潛在的光敏反應(yīng)，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不良作用小。目前對于巴洛沙星的高效液相色譜檢測的研究較少。有學(xué)者使用C18色譜柱，流動相為乙腈-0.05mol/L檸檬酸（三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.0）（22：78），柱溫40℃，檢測波長294nm，二極管陣列紫外檢測器進(jìn)行測定，在一定濃度范圍內(nèi)能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。也有使用乙腈-水（1000ml中含0.5μl磷酸和三乙胺）（25：75）為流動相，色譜柱為C18色譜柱，檢測波長320nm，該方法能夠很好的將巴洛沙星和帕珠沙星（內(nèi)標(biāo)）分離開并進(jìn)行含量測定。巴洛沙星色譜圖如圖2所示。

圖2巴洛沙星色譜圖

3、帕珠沙星

與巴洛沙星一樣，帕珠沙星也是一種新一代的喹諾酮類藥物，其主要作用的病菌對象是需氧菌和一般的厭氧菌，能夠阻止細(xì)菌的形成，使其細(xì)胞不能繼續(xù)分裂增殖。目前對于帕珠沙星的高效液相色譜檢測研究也很少。僅有的一些研究中多是利用反相色譜紫外檢測方法進(jìn)行檢測。檢測過程中所使用的波長一般都在254-320nm之間，而流動相也多為加入一定緩沖液的乙腈或甲醇。甲醇相比于乙腈的洗脫能力更弱一些，可適當(dāng)延長出峰時(shí)間，更好的消除雜峰的帶來的影響，多用于帕珠沙星混旋體的檢測。有文獻(xiàn)報(bào)道可采用C18色譜柱、以乙腈-[10%甲磺酸溶液-1.0mol/L磷酸氫二鉀溶液-水（10：7：153）（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0）]（30：170）為流動相，檢測波長為244nm進(jìn)行帕珠沙星含量的測定。也有人使用甲醇-磷酸鹽緩沖液（pH5.6）（15：85）為流動相，色譜柱為C18柱，檢測波長為320nm。這種檢測方法也較為靈敏方便，可用應(yīng)用在帕珠沙星的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用檢測中。帕珠沙星的色譜圖如圖3所示。

圖3帕珠沙星色譜圖

三、結(jié)束語

總之，喹諾酮類藥物作為目前臨床醫(yī)學(xué)生應(yīng)用極為廣泛的廣譜抗菌藥物，加強(qiáng)對其檢測方法的研究有助于更好的利用這些藥物，使其在開發(fā)生產(chǎn)、更新?lián)Q代以及臨床使用中能夠掌握其含量，以更好的控制藥效。采用高效液相色譜法力檢測生物樣品中的喹諾酮類藥物，可以實(shí)現(xiàn)快速精準(zhǔn)分離和高效分辨測定，檢測效果很理想，并且還能夠在檢測質(zhì)量和檢測速度上有更進(jìn)一步的提升，這就需要廣大研究者再進(jìn)行深入的研究，以促進(jìn)高效液相色譜法在生物樣品檢測中得到更好的應(yīng)用。

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